芳香烃受体与复发性流产的相关性分析

张晓婷 张月莲 黄雅玲

[摘要]目的 分析不同組织中芳香烃受体（AHR）与人绒毛膜促性腺激素（HCG）、雌二醇（E2）、孕酮（P）、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）的相关性，探讨AHR与复发性流产（RSA）的关系。方法 选取2016年12月～2017年3月在山西医学科学院妇产科门诊就诊的30例RSA患者为研究组，正常早孕要求行人工流产的30例患者为对照组，取每例患者的外周血、绒毛、蜕膜组织，检测每例患者血清中的AHR、HCG、E2、P水平，绒毛及蜕膜组织中的ER、PR水平，进行统计学分析。结果 研究组患者绒毛、蜕膜中的AHR水平明显高于对照组（P<0.05），两组的血清AHR水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。研究组患者的血清HCG、P、E2水平明显低于对照组（P<0.05）。研究组绒毛及蜕膜组织中的ER、PR水平明显低于对照组（P<0.05）。血清中AHR与HCG、P、E2无相关性，绒毛及蜕膜组织中AHR与相应部位ER、PR无相关性。结论 人体中AHR的增高可能会导致RSA，尤其是局部组织绒毛及蜕膜中AHR的升高，ER、PR的表达量减少也是导致复发性流产的原因，但AHR的升高与ER、PR之间无联系，AHR升高既不会通过ER、PR影响妊娠结局，ER、PR也不会影响AHR的升高，AHR可能直接或者通过其他路径影响着妊娠结局。

[关键词]芳香烃受体；雌激素受体；孕激素受体；绒毛；蜕膜

[中图分类号] R714.21 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）3（b）-0009-04

Correlation analysis of aromatic hydrocarbon receptor and recurrent spontaneous abortion

1.Shanxi Dayi Hospital Affiliated to Shanxi Medical University，Taiyuan 030000，China；2.Department of Obstetrics and Gynecology，Shanxi Academy of Medical Sciences，Taiyuan 030000，China

[Abstract]Objective To analyze the correlation between aromatic hydrocarbon receptor （AHR） and human chorionic gonadotropin （HCG），estradiol （E2），progesterone （P），estrogen receptor （ER），and progesterone receptor （PR），and to explore the relationship between AHR and recurrent spontaneous abortion （RSA）.Methods From December 2016 to March 2017，30 RSA patients treated in the Department of Obstetrics and Gynecology，Shanxi Academy of Medical Sciences were selected as the research group.30 patients with abortion requiring in normal early pregnancy were categorized into the control group.The peripheral blood，villi and decidua tissues were collected.The levels of serum AHR，HCG，E2，P，ER and PR from villi and decidua tissues were detected and statistically analyzed.Results The AHR levels in the villi and decidua tissues in the research group were significantly higher than those in the normal control group （P<0.05）.There was no significant difference in the serum AHR levels between the two groups （P>0.05）.The level of serum HCG，P and E2 in the research group were significantly lower compared with those in the normal control group （P<0.05）.The levels of ER and PR in villus and decidua tissues in the research group were significantly lower，in comparison with those in the control group （P<0.05）.There was no correlation between the serum AHR and HCG，P and E2.The AHR in the villi and decidua tissues was not correlated with ER or PR in the corresponding areas.Conclusion The elevated AHR in human may lead to RSA，especially the increase of AHR in the local villi and decidua tissues.The decrease of ER and PR expression is also the cause of RSA.However，the increase of AHR is not associated with ER or PR.Increase of AHR will may directly influence on pregnancy outcome or by other pathways except ER and PR.Meanwhile，ER and PR will not affect the rise of AHR，either.

[Key words]Aromatic hydrocarbon receptors；Estrogen receptors；Progesterone receptors；Villi；Decidua

复发性流产（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指与同一性伴侣连续发生3次及3次以上的自然流产，常见的原因有染色体异常、解剖异常、内分泌异常、感染等，但仍有1/2的患者病因不明，称为原因不明性复发性流产（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）。有研究发现，正常的雌孕激素水平能够促进子宫内膜容受性，有利于胚泡的植入及胎盘的形成发育，可以维持胚胎持续生长发育[1]。也有研究发现，芳香烃受体（AHR）可通过配体依赖的方式调节调节性T细胞的分化和巨噬细胞、树突状细胞等重要免疫细胞的功能[2]，参与许多重要的生理过程[3]，如细胞周期和增殖的调控、细胞分化和凋亡、信号转导、免疫应答、昼夜节律、肿瘤诱发[4]、脂类代谢有关基因的表达、胚胎的形成、胎儿生长、血管的形成和重塑等[5-8]。本研究通过检测RSA患者及正常对照组患者血清中AHR、人绒毛膜促性腺激素（HCG）、雌二醇（E2）、孕酮（P），绒毛及蜕膜组织中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）的水平，分析AHR在RSA中的作用，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选择2016年9月～2017年3月在我院因胎停育而行清宫术的30例患者作为研究组，纳入标准为男方精液分析正常，女性月经周期正常，无生殖器官解剖结构异常、自然流产史或胎停育史2次以上，抗心磷脂抗体、抗核抗体、药物基因、同型半胱氨酸均无异常，夫妇双方染色体检查正常的患者。选择同期在我院要求行人工流产的30例患者作为对照组，纳入标准为此前有正常生育史，无自然流产史或胎停育史，超声提示可见胚胎原始心管搏动，未合并其他相关疾病。本研究已经过医院医学伦理委员会同意，研究对象签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1标本采集及处理 收集两组早孕妇女的血清、绒毛及蜕膜组织。血清置于离心机中，以3000 r/s离心15 min后取上清液，置于-70℃冰箱中备用；将绒毛及蜕膜用生理盐水进行漂洗，剪取200 mg，加入生理盐水1.8 ml，使用玻璃研磨器进行研磨，置于离心机中，以3000 r/s速度离心15 min，提取上清液，置于-70℃冰箱中备用。

1.2.2 Elisa试验方法 采用Elisa试验方法对各个标本中的AHR、ER、PR进行检测。取出上述冰冻标本，室温下溶解，严格按照Elisa试剂盒说明书进行试验，得出数值。

1.2.3化学发光法 采用化学发光法检测各外周血标本中HCG、P、E2的浓度。取出每例患者血清标本，室温下溶解，严格按照各个试剂盒说明书进行试验，得出数值。

1.3统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，如符合正态分布，采用两样本t检验分别对实验组与对照组血清、绒毛、蜕膜的AHR進行比较，采用Pearson相关分析研究AHR与HCG、E2、P、ER、PR是否相关，检验水准α<0.05。

2结果

2.1两组病例AHR表达情况的比较

研究组与对照组血清、绒毛及蜕膜组织中均有AHR的表达。研究组绒毛及蜕膜组织中的AHR表达量明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；研究组外周血中的AHR表达量与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。

2.2两组病例血清中HCG、E2、P表达情况的比较

研究组血清中的HCG、E2、P含量明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）（表2）。

2.3两组病例绒毛、蜕膜中ER、PR的表达分析

研究组绒毛及蜕膜中ER、PR含量明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）（表3）。

2.4研究组各部位AHR与相关部位HCG、E2、P、ER、PR的相关性分析

血清AHR与血清HCG、E2、P无相关（P>0.05）；绒毛与蜕膜组织中AHR与相应部位的ER、PR无相关（P>0.05）（图1～图7）。

3讨论

AHR又称二英受体，是一种以多环芳香烃类化合物为配体的信使蛋白，在信号转导与基因转录中发挥作用，属于碱性螺旋-环-螺旋转录因子家族中的bHLH-PAS（periodaryl hydrocarbon receptor nuclear translocator-single minded，Pre-Arnt-Sim）亚家族成员，由805个氨基酸构成，N-端区域高度保守，C-端区域保守性低，易活化，需依赖配体激活[9]。其在各种生物体内广泛分布，多种哺乳类动物体内都含有AHR蛋白，不同物种和不同组织细胞中AHR含量不同[10]，人体中主要存在于肺、肝、肾、胎盘、扁桃体、B淋巴细胞等各种组织和细胞中[2]。AHR参与代谢环境中的污染物，其在毒理学研究中的作用被广为重视，通过与毒性配体结合，损害生殖系统功能，进一步对胚胎和胎儿产生不良影响[11]。已有不少研究发现，RSA与机体免疫异常有关。有研究者提出AHR可能参与Th17的表达上调，干扰Treg/Th17平衡，进而在母胎免疫调节中起作用，并影响妊娠结局[12]。也有学者推测AHR与滋养细胞的增值和凋亡密切相关，很可能介导了滋养细胞侵袭能力的调节。有动物实验显示[13]，AHR功能缺失的小鼠生殖功能受到严重损害，部分母鼠受精卵不能着床，着床后不能维持正常妊娠等。本研究结果显示，RSA患者绒毛及蜕膜组织中AHR的含量明显高于对照组，而外周血中无明显差异，提示局部组织的AHR聚集可能影响胚胎发育不良，是导致胚胎停育的主要原因。

血HCG是由合体滋养细胞分泌的一种糖蛋白激素，其作用在于维持早期妊娠黄体的继续生长，刺激黄体产生雌激素，以维持妊娠，直至完全被胎盘取代[14]。妊娠早期，孕酮随着HCG的升高而升高，且呈正相关，若系血中孕酮水平低下或下降提示黄体或胎盘功能不足，不能维持继续妊娠[15]。孕酮对孕卵着床建立适宜的子宫内膜环境、早孕阶段建立充分恰当的免疫环境发挥重要作用，上调人白细胞抗原G（HLA-G）表达，维护母胎免疫平衡[16]。孕激素还可使子宫肌纤维松弛，兴奋性降低，同时降低妊娠子宫对宫缩素的敏感性，减少子宫收缩，有利于受精卵在子宫内生长发育[17]。可见，孕激素对于排卵、受精乃至整个妊娠的维持均起着非常重要的作用，然而其功能的发挥主要是靠孕激素受体PR来实现的[18]。E2对ER起正调节作用，P对PR起负调节作用。PR的合成依赖于ER的合成通路，且E2和P必须在一定的比例范围内存在，才能正确诱导受体的合成，使激素受体的组织学效应达到最佳状态[19]。本研究结果显示，血清HCG、E2、P的表达维持着正常妊娠，任意一者发生偏离都会导致流产的发生，ER、PR的正常表达比例也是维持妊娠的重要条件，E2、P通过ER、PR才能发挥相应作用。

本研究中，血清AHR与血清HCG、P、E2无明显相关性，绒毛及蜕膜中AHR与ER、PR也无明显相关性，提示AHR并不通过ER、PR影响正常妊娠，可能其直接影响妊娠结局，也可能是通过其他因素间接影响妊娠结局，就像上述所说通过影响Th17/Treg细胞的平衡，进而影响母胎界面微环境，导致胎停育。

AHR表达广泛，其配体多样，通过与各种配体的结合影响着妊娠的结局，本研究提示AHR局部聚集导致不良妊娠结局的发生，但并非通过雌孕激素、ER、PR实现，关于AHR过高导致RSA的机制，有待进一步研究。

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（收稿日期：2017-12-05 本文编辑：祁海文）