广西武鸣墨羊冷冻精液制作技术探讨

文│邓祝新 魏莎 覃孝杰 许鹏 李芳芳 李美珍 何复明 方奕雄 黄丽云 彭燕（广西壮族自治区畜禽品种改良站）

广西武鸣绿世界生态农业投资有限公司培育的武鸣墨羊是一种适应性强、抗病力强、肉质细腻，具有高营养价值的杂交羊品种。武鸣墨羊是广西隆林黑山羊和努比亚黑山羊多年杂交改良而来的后代。

为提高武鸣墨羊的经济效益，充分发挥优良种公羊的种用价值和配种效能，减少生殖道疾病，笔者挑选具有优良种用价值的公羊进行采精和冻精制作，再利用羊的人工授精技术加快武鸣墨羊的品种改良过程。

一、墨羊的人工采精

准备羊采精架，将其放在公羊栏舍的运动场内，固定好采精位置，将一头发情母羊牵到采精架内保定好。把羊的采精筒设备消毒干净、晾干。装上集精杯，注水加压（采精筒内的水温控制在40～45℃为宜）、采精筒内壁涂上润滑剂待用。将公羊牵引到采精架上进行采精，待公羊爬跨时，将采精筒套上公羊阴茎，让公羊自己往前冲顶。公羊警惕性比较高，采精动作必须要做到稳、准、快。采集精液结束后放水、放气压，迅速将精液送到稀释间。

二、羊稀释液的配制

目前使用效果比较好的稀释液是采用法国卡苏公司（BIOXCELL freezing medium for bull semen）的稀释液，按照1:4的比例配制，使用双蒸高压灭菌蒸馏水，等温混合均匀后放置于35℃的恒温水浴锅内待用。

三、墨羊鲜精的镜检、密度、稀释过程

质量好的墨羊鲜精浓度一般在10亿～20亿/毫升。取5微升原精，在电子显微镜下观察，如果看到云雾状精液游动，或者有密密麻麻的精液团在蠕动，则是非常理想的精液状态。一般情况下笔者采集的原精为2～5毫升，第一步以1∶1稀释，然后取10微升镜检观察，如果发现精液还是很浓稠，再次1倍量稀释。使用卡苏公司生产的牛羊精子密度仪（AccuRead），选一个清洁、消毒过的比色皿，在其中加入2.4毫升的（0.9%）氯化钠溶液，放置于密度仪中调零，用移液枪吸取10微升的原精，注入含有2.4毫升氯化钠溶液的比色皿中，混合摇匀，再放置于密度仪中进行密度测量。为了结合实际生产，笔者对墨羊冻精的稀释要求是0.25毫升细管灌装，容量为0.185～0.20毫升，总精子数在3500万，有效精子数在1200万，活力在0.3以上为合格，这样的稀释标准比较符合实际生产，在羊冷冻精液人工授精方面更有保证。

四、墨羊鲜精的分装、封口与细管精液平衡

鲜精分装：采用0.25毫升的细管。用一次性注射器从细管的棉花塞一端抽取精液，在细管封口端留1.5厘米，最后在细管留空的最末端使用热熔封口机将细管末端热熔封口，以不泄漏精液为封口标准。这样就完成了一支精液的手工分装，以此类推，直到所有羊鲜精液分装、封口全部完成，并且在细管上用笔填写、标注公羊的信息编号。将封口完毕的细管精液按照公羊号分类排版到专用的细管精液架子上，并且成排叠起来转移到4℃的恒温冰箱内静置3～4小时。

五、墨羊的冷冻精液制作过程

墨羊的冷冻精液采用熏蒸冷冻法现场制作。所用设备如下：液氮、液氮容器、泡沫箱、细管架子、镊子、冻精提筒等。泡沫箱的规格是长80厘米、宽50厘米、高60厘米，配备有泡沫箱盖子。细管架的高度是35厘米。

将液氮倒入泡沫箱口30厘米的位置，等待液氮面稳定在30厘米处后，从恒温冰箱内取一托已平衡好的墨羊细管精液与细管架子一起放入泡沫箱内，细管精液整齐平铺在细管架子上，此时细管精液与液氮面的实际高度维持在3～5厘米。快速盖上泡沫箱盖子，压紧不透气，静置等待15分钟。

15分钟后揭开盖子，迅速将细管架子上的细管精液全部收拢，瞬间浸泡到液氮内，直到液氮沸腾稳定下来，第一托细管精液冷冻结束，可打包入袋。以此类推，一次一托，直到全部冷冻结束。

六、墨羊冻精的解冻

将水浴锅温度恒定在38～39℃。从液氮中取出一支墨羊冻精，空气浴1秒，然后迅速浸泡到水浴锅中摇晃解冻30秒以上，直至完全解冻。取出冻精擦干表面水分，减掉封口端，分别取10微升精液于载玻片上，盖上盖玻片，对3个视野进行镜检，并进行活力的综合评分。要求：电子显微镜必须要有恒温载物板进行预热。因为羊的冷冻精液比较浓稠，也可以考虑在镜检时加入少许解冻液来观察。

综上所述，虽然武鸣墨羊的鲜精密度较高，但冷冻后大部分精子会有死亡情况。为做好羊的精液冷冻，必须保证羊鲜精活力要强、精液稀释过程保持等温、精液冷冻过程逐级降温。