血塞通片中5种成分溶出行为的研究

闫伟伟， 罗慧玉， 丁 杰， 唐殿飞， 徐 鹏， 吴长年， 陈正源

(张家口市食品药品检验中心，河北 张家口 075000)

血塞通片是以三七总皂苷为有效成分的中成药制剂，功效活血祛瘀、通脉活络，临床可用于心脑血管疾病[1]、抑制巨噬细胞炎性反应[2]、去势骨质疏松性骨折[3]等。但血塞通片现行质量标准没有溶出度测定项目[4]，仅依靠崩解时限检查难以描述该制剂有效成分的体外溶出过程。本实验参考血塞通固体制剂的含量、溶出度测定方法[4-9]，考察不同厂家及同一厂家不同批次血塞通片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd的溶出行为，以期为该制剂质量评价及质量标准提升提供依据。

1 材料

1.1 试剂与药物 血塞通片(厂家A，批号200512；厂家B，B1批号20200501，B2批号20190702，B3批号20191102；厂家C，批号2001035)。三七皂苷R1(批号110745-201921，纯度90.4%)、人参皂苷Rg1(批号110703-201530，纯度91.7%)、人参皂苷Re(批号110754-202028，纯度93.9%)、人参皂苷Rb1(批号110704-202028，纯度93.1%)、人参皂苷Rd(批号111818-201603，纯度92.1%)对照品均购自中国食品药品检定研究院。乙腈、甲醇为色谱纯；磷酸、冰醋酸、磷酸二氢钾、醋酸钠均为分析纯；水由超纯水机制备。

1.2 仪器 LC-2010A HT高效液相色谱仪(日本岛津公司)；CPA225D电子分析天平(德国赛多利斯公司)；RCZ-8M溶出仪(天大天发科技有限公司)；Milli-Q Integral纯水/超纯水机(美国Millipore公司)。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液 精密称取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd对照品适量，置于5 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为4.140 3、4.276 9、4.170 9、4.019 2 mg/mL的贮备液；精密称取人参皂苷Re对照品适量，置于25 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为0.502 2 mg/mL的贮备液。精密量取上述贮备液适量，置于10 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，制成含三七皂苷R10.041 4 mg、人参皂苷Rg10.163 4 mg、人参皂苷Re 0.016 75 mg、人参皂苷Rb10.156 4 mg、人参皂苷Rd 0.050 24 mg的溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液 设定条件为溶出介质pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、水；溶剂体积200 mL；温度37 ℃；转速50 r/min。取本品6片，投入6个溶出杯中并计时，于5、10、20、30、45、60、75、90、120 min各取样，每次1 mL，同时补充等质量同温度溶出介质，0.45 μm微孔滤膜过滤；另取本品20片，除去包衣，精密称定质量，计算平均片重，研细，精密称取适量(约相当于三七总皂苷25 mg)，置于具塞锥形瓶中，加入70%甲醇10 mL，超声处理10 min，取出，放冷，70%甲醇补足减失的质量，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.2 色谱条件 Thermo C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱(0～21 min，78%B；21～45 min，78%～52%B；45～55 min，52%～45%B；55～60 min，45%B；60～62 min，45%～78%B；62～72 min，78%B)；体积流量1.0 mL/min；柱温 30 ℃；检测波长203 nm；进样量 20 μL。色谱图见图1。

2.3 线性关系考察 精密吸取对照品溶液适量，甲醇稀释成6个质量浓度，在“2.2”项色谱条件下进样测定。以峰面积为纵坐标(Y)，质量浓度为横坐标(X)进行回归，结果见表1，可知各成分在各自范围内线性关系良好。

表1 各成分线性关系

2.4 精密度试验 取“2.1.1”项下对照品溶液，在“2.2”项色谱条件下进样测定6次，测得各成分峰面积RSD分别为三七皂苷R10.28%、人参皂苷Rg10.63%、人参皂苷Re 0.56%、人参皂苷Rb10.40%、人参皂苷Rd 0.72%，表明仪器精密度良好。

2.5 重复性试验 取本品(批号200512)适量，按“2.1.2”项下方法制备3种溶出介质的供试品溶液，每种6份，在“2.2”项色谱条件下进样测定，测得各成分峰面积RSD均小于3.0%，表明该方法重复性良好。

2.6 稳定性试验 取本品(批号200512)60 min溶出液，室温下于0、2、4、8、12、24、48 h在“2.2”项色谱条件下进样测定，测得各成分峰面积RSD均小于3.0%，表明溶液在48 h内稳定性良好。

2.7 加样回收率试验 精密称取各成分含量已知的本品(批号200512)6份，每份约0.053 g(平均片重约为0.106 3 g)，置于25 mL量瓶中，加入三七皂苷R1对照品溶液220 μL、人参皂苷Rg1对照品溶液750 μL、人参皂苷Re对照品溶液850 μL、人参皂苷Rb1对照品溶液1 000 μL、人参皂苷Rd对照品溶液230 μL，甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，分别取5 mL至25 mL量瓶中，稀释3份，3种溶出介质稀释至刻度，在“2.2”项色谱条件下进样测定。结果，各成分在水中的平均加样回收率为98.91%～100.02%，RSD为0.19%～0.52%；在醋酸盐中的平均加样回收率为98.96%～100.68%，RSD为0.16%～0.65%；在磷酸盐中的平均加样回收率为98.96%～99.67%，RSD为0.15%～0.59%。

2.8 溶出曲线考察

2.8.1 同一厂家不同批号 参考《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》[10]，选择醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、水作为溶出介质，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.2”项色谱条件下进样测定，计算累积溶出量，结果见图2。由此可知，厂家B 3批样品中各成分在水、磷酸盐中60 min内溶出基本达到平衡；在醋酸盐中60 min后B3厂家样品仍有缓慢释放；3批样品中各成分在水中溶出行为较一致，累积溶出量最大；在磷酸盐中溶出行为差异较大；同一批样品中各成分在3种介质中的溶出行为基本一致，即呈同步性存在。

2.8.2 不同厂家 选择醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、水作为溶出介质，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.2”项色谱条件下进样测定，计算累积溶出量，结果见图3。由此可知，厂家B样品中各成分在3种介质中60 min内可达到平衡；厂家A样品中各成分在3种介质中60 min内基本达到平衡；厂家C样品中各成分在水、磷酸盐中60 min内达到平衡，而在醋酸盐中60 min后仍在缓慢释放。

2.8.3 溶出曲线评价 选取6个时间点(5、10、20、30、45、60 min)，采用非模型依赖相似因子(f2)法对溶出曲线进行评价，结果见表2～3。由此可知，厂家B 3批样品中各成分在3种溶出介质中的溶出行为存在差异，仅在水中一致性较好；不同厂家样品中各成分在同一介质中的溶出行为存在差异，而同一批次样品中各成分在同一溶出介质中的f2差异较小。

表2 同一厂家不同批次样品中各成分f2测定结果

溶出介质厂家三七皂苷R1人参皂苷Rg1人参皂苷Re人参皂苷Rb1人参皂苷Rd水A-B31.248 937.685 136.929 446.478 934.095 9A-C59.082 067.220 561.759 357.088 060.142 5B-C26.449 933.977 332.317 238.115 530.374 2醋酸盐缓冲液A-B50.180 559.691 956.444 377.331 150.788 2A-C32.322 236.992 732.296 434.016 042.844 0B-C25.103 831.962 231.155 532.499 432.262 9磷酸盐缓冲液A-B39.813 2 42.515 738.159 448.091 134.367 5A-C41.896 555.891 743.011 447.440 2 47.350 5B-C26.271 634.141 227.760 232.932 729.619 7

2.9 溶出模型拟合 采用模型依赖法，以厂家B样品(批号20200501)中各成分在水中的溶出行为为例，分别考察零级释放方程、一级释放方程、Weibull方程、Peppas方程、Higuchi方程，结果见表4，可知Weibull方程相关系数达0.9以上，表明拟合效果最好，并且药物释放速率常数与扩散系数成正比，并随着时间变化而变化。同法对该厂家样品中各成分在3种溶出介质中的溶出数据进行拟合，发现均以Weibull方程效果最好，表明其溶出机制相同。再对不同厂家样品进行数据拟合，发现厂家C样品在水中释放时，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd拟合模型不同，其他厂家样品也以Weibull模型最佳，表明部分厂家样品中个别成分的溶出行为不一致，内在质量存在差异。

3 讨论

血塞通片中有效成分含量较低，为提高检测准确度，采用小杯法进行实验。三七总皂苷在pH 1.0盐酸缓冲液中不稳定[11]，故未选取该溶液作为溶出介质。在50、75 r/min

表4 厂家B样品中各成分在水中溶出行为的模型拟合

转速下进行实验，2种条件下各成分溶出量无显著差异，故选择50 r/min。人参皂苷Rg1、Re相对保留时间差异较小，采用梯度洗脱程序时可实现分离度大于1.5，理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计大于6 000。采用常用模型对溶出数据进行拟合，推测其溶出机制。同厂家样品在不同介质中的溶出机制相同，以Weibull模型最佳；不同厂家样品的溶出机制略有不同，也以Weibull模型最佳，表明血塞通中5种指标成分的溶出机制基本符合该模型，但不同厂家样品质量存在差异。

溶出度可反映工艺稳定性，并可预测其在体内的起效程度，故中药固体制剂溶出度测定是中药整体质量控制体系和工艺一致性评价的重点内容之一[12]。研究血塞通片在不同pH溶出介质中多种成分的溶出曲线。结果表明不同厂家、不同批号血塞通片在同一介质中的溶出差异较大，且存在溶出不充分现象，可能与制剂的原辅料质量优劣及生产工艺有关。本研究可促进生产企业对中药制剂生产工艺进行改进，提高产品质量，同时可为药品质量控制及质量标准提升提供依据。