不同炮制方法对荞麦七有效成分含量的影响*

王晓梅，祖 蕾

(宝鸡文理学院，陕西省植物化学重点实验室，陕西 宝鸡 721013)

荞麦七是蓼科翼蓼属植物翼蓼(PteroxygonumgiraldiiDamm. et Diels)的块根，也是陕西秦岭山“太白七药”之一的著名草药，其性较寒，味酸，较苦涩，具有止血、除湿、凉血、解毒等功效[1-2]。据报道，荞麦七中含有黄酮类化合物，蒽醌类化合物，萜类化合物和多糖等化学成分[3-6]。同时研究发现，这些化合物也具有不同的生物活性如抗氧化、抗肿瘤、抗炎和抗菌作用等[7-10]。

中药的炮制能够改变药材的理化性质而使其药性改变，从而影响其有效成分的释放性，疗效和毒性等[11-13]。有关荞麦七化学成分的报道比较常见，而对药材炮制相关的研究则较为有限。因此，本文通过研究炮制前后荞麦七有效成分含量的变化，对醋炙、酒炙、盐炙和麸炒四种炮制方法进行比较，为荞麦七炮制工艺的可控性与规范化提供依据。

1 实 验

1.1 材料、仪器及设备

荞麦七,陕西省宝鸡市太白山区；黄酒，陕西秦洋长生酒业有限公司；大黄酚(纯度>98%)，北京索莱宝科技有限公司；槲皮素(纯度>98%)，北京索莱宝科技有限公司 ；磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，甲醇，95%乙醇，三氯甲烷，铁氰化钾，三氯乙酸，三氯化铁，三羟甲基氨基甲烷，邻苯三酚，均为分析纯。

UV-1800分光光度计，湖南创特科技发展有限公司；GZX-GF101-1-BS-Ⅱ电热恒温鼓风干燥箱，广东沪瑞明仪器有限公司；JP-100洁盟牌超声波清洗器(600 W),广东市科洁盟实验仪器有限公司；SHHW21.420AⅡ三用恒温水箱,苏州江东精密仪器有限公司；SHB-Ⅲ 循环水式多用真空泵,西安泰康生物科技有限公司。

1.2 荞麦七样品制备

1.2.1 荞麦七炮制品的制备

将厚片状的荞麦七捣碎处理为大小基本均匀的颗粒，按照荞麦七颗粒与辅料的比例为4:1加样后搅拌均匀，待辅料被完全吸尽后，放入炒制容器，文火炒至荞麦七颗粒呈深褐色，取出晾干。辅料分别为米醋，黄酒和10%NaCl依次炮制得荞麦七醋制品，酒制品和盐制品。麸炒品制备方法如下：先用中火将锅烧热后将麦麸均匀撒入锅中，至起烟时投入荞麦七，荞麦七和辅料比例为8:1，快速均匀翻动炒至荞麦七颜色变深后，挑出药品。上述各种炮制品均需由粉碎机分别粉碎备用。

1.2.2 荞麦七麸炒品提取物的制备

取炮制的荞麦七麸炒品20 g，加入95%乙醇400 mL超声提取30 min，静置移取上清，沉渣再次相同方法提取，合并两次上清液，加热浓缩，干燥备用。

1.3 大黄酚标准曲线的绘制

分别配制大黄酚浓度为25、50、75、100、125 mg/L的溶液，以甲醇为参比在波长323 nm处测定吸光度。测得标准曲线回归方程为：Y=0.00369X-0.06386，R2=0.9934(图1)。

图1 大黄酚标准曲线

1.4 荞麦七样品中蒽醌类含量的测定

分别称取上述炮制前和炮制后的荞麦七颗粒，加入甲醇，超声提取1 h，静置过滤。滤液旋蒸除去溶剂后，加入8%盐酸10 mL，超声处理2 min使其充分混合，加入三氯甲烷10 mL，超声1 h后酸液用三氯甲烷萃取，重复萃取3次，合并三氯甲烷层，用适量蒸馏水将三氯甲烷洗涤至中性，减压过滤，干燥，将所得固体用甲醇溶解，摇匀过滤，取滤液进行测定，以甲醇为参比在323 nm处测吸光度，根据方程Y=0.00369X-0.06386计算蒽醌的含量。

1.5 槲皮素标准曲线的绘制

分别配制槲皮素浓度为10、20、40、60、80、100 mg/L的溶液，以95%乙醇为参比，在374 nm波长处测定吸光度，测得标准曲线回归方程为Y=0.01501X+0.17185，R2=0.99632(图2)。

图2 槲皮素标准曲线

1.6 荞麦七样品中黄酮含量的测量

分别称取上述炮制前和炮制后的荞麦七颗粒，加入95%乙醇，室温超声提取30 min，过滤，留取滤液，滤渣再次提取、过滤，合并两次滤液，以95%乙醇为参比溶液，在374 nm处测定吸光度。根据标准曲线方程Y=0.01501X+0.17185计算黄酮的含量。

1.7 荞麦七还原力的测定

分别配制浓度为0.004、0.008、0.016、0.032、0.064、0.125和0.25 mg/mL的荞麦七麸炒品提取物的水溶液，取1 mL加入pH 6.6的磷酸缓冲液1 mL，1%铁氰化钾溶液1 mL，摇匀，置于50 ℃的水浴锅中20 min，然后加入10%三氯乙酸溶液2 mL， 3000 r/min 离心10 min，取上清液2.5 mL加入2.5 mL蒸馏水，0.1%的FeCl3溶液0.5 mL，摇匀，静置5 min后以蒸馏水为参比，在700 nm波长测定吸光度，平行测定三次，取平均值。

1.8 荞麦七麸炒品对邻苯三酚自氧化作用的抑制

1.8.1 邻苯三酚自氧化时间的测定

向10 mL试管中加入pH 8.2的0.1 moL/L Tris-HCl缓冲液3.6 mL，双蒸水4 mL，混匀，于25 ℃的水浴中放置20 min后立即加入3 mmoL/L的邻苯三酚溶液0.2 mL，快速摇匀后以蒸馏水为参比，在345 nm波长处测定吸光度，每30 s测一次，以吸光度稳定的时间34 min时测定的吸光度值作为空白对照。

1.8.2 荞麦七麸炒品提取物对邻苯三酚自氧化的抑制作用

向10 mL试管中加入pH 8.2的Tris-HCl缓冲溶液3.6 mL 与双蒸水3 mL，摇匀，在25 ℃的水浴中放置20 min后依次加入浓度为 0.25、0.5、1.0、1.5和2.0 mg/mL的荞麦七麸炒品提取物溶液1 mL，即刻加入备用的邻苯三酚溶液0.2 mL，室温静置34 min，以样品溶液为参比，在345 nm波长处测定吸光度，平行测定三次，取平均值。根据公式(1)计算抑制率。

抑制率=(A0-A)/A0×100%

(1)

式中：A0为空白对照的吸光度值;A为样品吸光度值。

2 结果与讨论

2.1 炮制前后荞麦七中总蒽醌含量的变化

由图3可看出，荞麦七的不同炮制品中蒽醌的提取量各有不同，生品，醋炙品，盐炙品，酒炙品和麸炒品提取的总蒽醌含量分别为：118.5 mg/L，147.3 mg/L，186.6 mg/L，118.3 mg/L和243.8 mg/L。未炮制的生品中蒽醌的提取量最低，麸炒品中的蒽醌量最高，其次为盐炙品，再次为醋炙品，酒炙品中蒽醌量低于其它炮制品，与生品中含量接近。由结果可知，选择合适的方法对荞麦七进行炮制可以显著提高提取样品中蒽醌的含量。

图3 不同荞麦七炮制品的蒽醌含量

2.2 炮制对荞麦七总黄酮的影响

由图4可知，荞麦七各种炮制品中黄酮的提取量多略有偏低，生品，醋炙品，盐炙品，酒炙品和麸炒品提取的总黄酮含量分别为86.5 mg/L，62.4 mg/L，72.6 mg/L，70.5 mg/L和85.4 mg/L，仅麸炒品中的黄酮含量与生品相当。综合上述蒽醌提取实验可知，采用麸炒的炮制方法有利于提高样品中蒽醌含量，而同时对黄酮含量也不会带来影响。

图4 不同荞麦七炮制品的黄酮含量

2.3 荞麦七麸炒品的还原力

由结果可知，荞麦七麸炒品在很低浓度时即显示了还原能力，7个浓度下的吸光度值分别为0.182，0.189，0.221，0.257，0.679，0.982和1.668。从图5可以看出，当浓度在0.004 mg/mL至0.032 mg/mL范围内，还原作用逐渐增强，但增加幅度不大，当浓度到达0.032 mg/mL以上时，还原作用显著增强。

图5 荞麦七麸炒品不同浓度提取物的还原力

2.4 荞麦七麸炒品对超氧阴离子自由基的抑制作用

由图6可知，荞麦七麸炒品提取物对邻苯三酚自氧化生成的超氧阴离子具有明显的抑制作用，抑制作用随着样品浓度的增大而增强，当浓度分别为0.25、0.5、1.0、1.5 和2.0 mg/mL时，抑制率依次为18.3%，35.5%，59.6%，68.4%和76.8%。在浓度小于0.5 mg/mL时，抑制作用较弱，而当样品浓度达到1.0 mg/mL以上，抑制率接近60%，在2.0 mg/mL时，抑制率最高可达76.8%。相比之前的报道[9]，在相同样品浓度下，本实验的结果与没有经过炮制的荞麦七提取物抗氧化研究相比，对超氧阴离子自由基的抑制率有所提高。由此可以看出，麸炒品中蒽醌含量的提高有助于荞麦七抗氧化作用的增强。

图6 不同浓度荞麦七麸炒品提取物对超氧阴离子自由基的抑制率

3 结 论

使用醋炙、酒炙、盐炙、麸炒四种不同方法分别对荞麦七进行炮制，对比炮制前后的样品发现四种炮制方法均可提高荞麦七中蒽醌的含量，但不能提高黄酮含量。由于麸炒品的蒽醌提取量最高，选择荞麦七麸炒样品进行抗氧化实验发现，当样品提取物浓度在0.032 mg/mL以上时，即能表现出较强的还原能力；浓度在2.0 mg/mL时，对超氧阴离子自由基的抑制率可达76.8%。这一结果表明，适当的炮制手段可以有效提高荞麦七的抗氧化作用。