HE4和T淋巴细胞亚群在上皮性卵巢癌化疗前后的变化及其诊断价值

古丽加那提，袁 华，蒋丽萍，赵绍杰，杨 蕊

(无锡市妇幼保健院妇科，江苏 无锡 214000)

上皮性卵巢癌是卵巢癌中最常见的类型，目前肿瘤细胞减灭术后辅以铂类化疗是其治疗的主要方法，但大多数患者会在治疗后出现复发及耐药的情况[1]。研究表明血清人附睾分泌蛋白4(human epididymis protein-4，HE4)是近年来发现的敏感卵巢癌肿瘤标志物之一，其血清水平可作为监测卵巢癌患者化疗后复发情况的预测指标[2]。同时，卵巢癌患者外周血T淋巴细胞亚群的表达也可反应肿瘤的进展情况[3]。本研究比较了卵巢癌患者化疗前及不同疗程化疗后血清HE4水平及血T淋巴细胞亚群的表达，旨在探究HE4和T淋巴细胞亚群在卵巢癌患者治疗过程中的应用价值，以期为患者的治疗效果评估及预后的判断提供帮助。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选择2019年2月至2020年12月在无锡市妇幼保健院收治的经手术和病理检查确诊的68例卵巢癌患者为观察组，其中卵巢浆液性癌31例，粘液性腺癌9例，子宫内膜样癌8例，其他卵巢恶性肿瘤20例。纳入标准：①符合上皮性卵巢癌诊断标准；②无其他基础性疾病；③临床和CT影像资料完整。排除标准：①病理诊断结果为交界性肿瘤的患者；②合并其他恶性肿瘤的患者；③合并有严重的心脏、肝、肾功能障碍的患者；④对本研究所用药物过敏或不耐受的患者。本研究根据国际妇产科联盟制定的分期标准对患者进行分期，其中I期14例，II期9例，III期33例，IV期12例。患者的年龄为36～75岁，平均年龄为(53.47±12.18)岁。所有入组患者在进行肿瘤细胞减灭术后两个月内予以化疗，化疗方案为铂类+紫杉醇类的一线化疗，每3周为一个疗程。另选取在我院门诊进行体检的66例健康女性作为对照组，其年龄为35～77岁，平均年龄为(54.78±11.69)岁，两组研究对象年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究获得本院伦理委员会批准，所有患者均签署了知情同意书。

1.2 标本的采集与处理

所有研究对象于术后及每个化疗周期入院前后在空腹状态下采集静脉血3～5mL。在室温下静置30min，并于3 000r/min离心15min后收集上血清，将血清置于-80℃冰箱中保存备用。

1.3 血清HE4检测

使用酶联免疫试剂盒(LD公司，德国)检测血清样本中HE4的浓度，实验操作均严格按照试剂盒的说明进行，阳性判定标准为HE4>150pmol/L。

1.4 外周血T淋巴细胞亚群的检测

将2mL的静脉血注入到淋巴细胞分离液中，并于1 500r/min离心10min后收集淋巴细胞层，用PBS缓冲液漂洗、离心2次后将细胞数调整为106个/mL，备用。取100μL淋巴细胞液，向其中加入10μL的相应抗体液，于1 500r/min离心15min后用PBS缓冲液漂洗、离心1次，接着向其中加入500μL PBS，并通过流式细胞仪检测CD3+、CD4+及CD8+的细胞水平。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 术后化疗前患者血清HE4水平

与对照组相比，观察组患者术后化疗前的血清HE4水平显著升高(t=5.078，P=0.012)，见图1。

2.2 术后化疗前患者外周血T细胞亚群水平

与对照组相比，观察组患者术后化疗前的外周血T淋巴细胞CD4亚群显著减少，CD8亚群显著增加，CD4+/CD8+比值显著下降(t值分别为-2.371、-5.064、-3.823，P<0.05)，见表1。

注：*P<0.05图1 术后化疗前患者血清HE4水平与对照组的比较Fig.1 Comparison of serum HE4 level between the patients before postoperative chemotherapy and the control group

表1 术后化疗前患者血清T细胞亚群水平与对照组的对比Table 1 Comparison of serum T cell subsets levels between the patients before postoperative chemotherapy

2.3 术后各化疗周期患者血清HE水平的变化

与术后化疗前相比，卵巢癌患者血清中HE4水平随化疗次数的增加而显著降低(t值为2.453～6.785，P<0.05)，在第5次化疗后基本可恢复至正常，见图2。

注：*与术后化疗前比较，P<0.05；#与第1疗程结束比较，P<0.05；&与第2疗程结束比较，P<0.05；△与第3疗程结束比较，P<0.05；@与第4疗程结束比较，P<0.05图2 术后各化疗周期患者血清HE水平的变化Fig.2 Changes of serum HE level in patients with various chemotherapy cycles after operation

2.4 术后各化疗周期患者外周血T细胞亚群水平的变化

与术后化疗前相比，术后化疗第1～4疗程结束时CD4+和CD4+/CD8+的水平显著降低(t值为2.546～5.908，P<0.05)，而CD8+的水平显著升高(t值为2.219～5.304，P<0.05)。从第5疗程结束开始，患者的CD4+、CD8+和CD4+/CD8+等细胞免疫学指标水平有所恢复，见表2。

表2 术后各化疗周期患者血清T细胞亚群水平的变化Table 2 Changes of serum T cell subsets in patients with various chemotherapy cycles after

2.5 HE4及CD4+/CD8+诊断卵巢癌的效能

ROC曲线显示，血清HE4诊断卵巢癌的曲线下面积(area under the curve，AUC)为0.964(95%CI：0.938～0.985)，CD4+/CD8+诊断卵巢癌的AUC为0.887(95%CI：0.829～0.945)，二者联合诊断卵巢癌的AUC为0.988(95%CI：0.974～1.000)，这提示联合检测有助于提高诊断效能。进一步分析HE4、CD4+/CD8+及二者联合对卵巢癌诊断的特异性和敏感性，结果发现HE4的敏感度和特异度分别为94.1%和90.0%，血清CD4+/CD8+的敏感度和特异度分别为82.4%和86.4%，二者联合的敏感度和特异度分别为98.5%和92.4%，见图3。

图3 血清HE4、CD4+/CD8+及二者联合诊断卵巢癌的ROC曲线Fig.3 ROC curves of serum HE4,CD4+/CD8+ and their combination in the diagnosis of ovarian cancer

3 讨论

3.1 HE4在卵巢癌中的应用

上皮性卵巢癌主要包括浆液性腺癌、粘液性腺癌、子宫内膜样腺癌、透明细胞癌等类型。HE4是近年来发现的一种肿瘤标志物，具有高灵敏度和高特异性等特点。已有研究表明HE4在检测恶性肿瘤疾病状态、观察患者疗效及反映复发情况等方面起着重要的作用[4-5]。Yang等[6]在一项研究中发现血清HE4浓度在卵巢癌患者中显著升高，其可与CA125互补用于早期上皮性卵巢癌的诊断。Scaletta等[7]的一项meta分析则发现HE4在卵巢癌患者血清中的表达与肿瘤分期和复发有密切关系。在本研究中我们发现与健康对照组相比，卵巢癌患者术后化疗前的血清HE4水平显著升高，且与术后化疗前相比，其血清中HE4水平随化疗次数的增加而显著降低，在第5次化疗后基本可恢复至正常，提示HE4可作为帮助评判疗效的有效血清学生物标志物。

3.2 T淋巴细胞亚群与卵巢癌患者疗效关系

在肿瘤发生、发展与转移的过程中，机体的免疫功能扮演着重要角色。研究显示，在机体对抗肿瘤的免疫反应中，由T淋巴细胞主导的细胞免疫发挥了重要作用[8-9]。T淋巴细胞是淋巴细胞中数量最多且功能最为复杂的一类细胞，主要通过胸腺的淋巴干细胞分化而来[10]。其主要分为两类亚群，一类是MHC-I类抗原限制的CD8+T细胞，其可抑制抗体的合成与分泌，使肿瘤逃脱免疫体统的攻击；另一类是MCH-II类抗原限制的CD4+T细胞，其数量可反映机体抗肿瘤免疫功能的变化；而CD3+T细胞则反映了CD4+和CD8+T细胞的整体水平。CD4+和CD8+T细胞之间相对稳定的状态是机体能进行正常免疫应答的关键，其比率对患者预后情况的预测具有重要的意义[11]。本研究结果显示，卵巢癌患者在肿瘤细胞减灭术后的化疗第1疗程结束时，外周血T淋巴细胞CD4亚群显著减少，CD8亚群显著增加，CD4+/CD8+比值显著下降。此外，术后化疗第1～4疗程结束时CD4+和CD4+/CD8+的水平显著降低，而CD8+的水平显著升高，从第5疗程结束开始，患者的CD4+、CD8+和CD4+/CD8+等细胞免疫学指标水平有所恢复，提示化疗在抑制机体免疫的同时还可恢复及平衡患者的免疫功能，随着化疗周期的延长，其对机体免疫的促进作用开始逐步显现。

3.3 HE4水平及T淋巴细胞亚群在诊断卵巢癌中的价值

卵巢癌属于女性生殖系统的恶性肿瘤之一，发病率虽低于宫颈癌和子宫体癌，但其复发率和死亡率极高，致死率位居生殖系统恶性肿瘤的首位[12]。由于卵巢癌的早期临床症状不典型，故难以被发现，80%患者就诊时已是晚期，常出现腹盆腔及远处转移[13]。因此，当前需要寻找一种灵敏、准确的诊疗评估手段，以对卵巢癌患者术后的化疗疗效进行评估。本研究分析了HE4、CD4+/CD8+及二者联合诊断卵巢癌的效能，结果显示血清HE4的曲线下面积为0.964，敏感度和特异度分别为94.1%和90.0%；外周血CD4+/CD8+的曲线下面积为0.887，敏感度和特异度分别为82.4%和86.4%；二者联合的曲线下面积为0.988，敏感度和特异度分别为98.5%和92.4%，提示联合检测有助于提高诊断价值，其效能优于单独使用的预测价值。健康女性血清中HE4的水平为60～150 pmol/L，其在上皮性卵巢癌患者中显著升高。研究表明HE4在鉴别卵巢良恶性肿瘤的特异性甚至高于CA125，且其与卵巢癌恶性特征及预后相关，可用于患者临床疗效的预测[14]。

综上所述，本研究通过对化疗前后卵巢癌患者血清HE4的浓度变化及T细胞亚群的变化进行分析，为患者临床疗效的监测及预后的判断提供了参考。但本研究的样本量较少，且受到回顾性研究的限制，使结果具有一定的局限性。今后我们仍需扩大样本量以进一步观察。