洋金花生品、炮制品的急性毒性和亚慢性毒性比较分析*

高杨 李娅 秦昆明 杨超 孙戡平 刘晴, 郑琳玉, 蔡宝昌, 金俊杰**

(1.南京中医药大学附属南京市中西医结合医院，江苏 南京 210014；2.南京中医药大学附属南京海昌中药集团有限公司，江苏 南京 210061；3.南京海源中药饮片有限公司，江苏 南京 210061；4.南京中医药大学 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心，江苏 南京 210023)

洋金花Daturaeflos为茄科植物白花曼陀罗DaturametelL.的干燥花，性味，辛温；有毒[1]。洋金花为《中国药典》2020年版一部收藏品种，只包含生品洋金花。洋金花炮制品制洋金花，只有《上海市中药饮片炮制规范》[2]收载：将生洋金花用生姜汁拌匀，待吸透，略润，切成1～2 mm细丝，置锅内，炒干，趁热喷洒白酒，拌匀，稍闷，晾干(每生洋金花100 kg，用生姜25 kg打汁，60°白酒12.5 kg)。项目组已对制洋金花的炮制工艺进行优化研究[3]，得出以东莨菪碱含量和水分含量的综合评分为指标，采用正交试验考察生姜打汁后加水量、闷润时间、炒制温度、炒制时间4项指标，确定制洋金花的最佳炮制工艺，筛选出制洋金花的最佳工艺参数为生姜打汁后加水量3倍，闷润时间40 min，炒制温度270～300 ℃、炒制时间5 min，炮制后的洋金花有酒香气和微姜味。临床上内服中毒报道多由误服或用量过度所导致，临床上报道洋金花急性中毒6例[4]。目前未见洋金花炮制品制洋金花急性毒性和亚慢性毒性实验研究报道，对制洋金花的毒性实验研究可以扩大制洋金花的用药范围，提高制洋金花的用药安全性，更好地将制洋金花运用于临床以及提供更好的用药合理性，本研究对洋金花生品和炮制品进行急性毒性和亚慢性毒性实验研究。

1 仪器与材料

1.1仪器 JJ600A型电子天平[美国双杰兄弟(集团)有限公司];JYZ-D57榨汁机(九阳股份有限公司)。

1.2药材 洋金花(产地安徽)和生姜(产地山东)，购自南京海源中药饮片公司(以下简称海源)。洋金花10批(产地分别为内蒙、安徽、吉林、河北、广西、山东、山西、河南、广东、江西)，购自安国市聚福中药材有限公司(以下简称聚福)。洋金花经南京海源中药饮片有限公司首席质量官执业中药师丁斐鉴定，为茄科植物白花曼陀罗DaturametelL.的干燥花。

1.3实验动物 ICR小鼠92只，雌雄各半，体重18～22 g，SPF级，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供，动物生产许可证号：SCXK(苏)2017-0001，动物质量合格证号：201912724。

2 方法

2.1制洋金花样品制备[3]取50 g洋金花样品(海源1批，聚福10批)，用生姜12.5 g打汁后加3倍水，25 ℃下闷润40 min后切碎，在270～300 ℃下炒制5 min，29～30 ℃下喷洒6.25 g的60°白酒后，25 ℃下闷30 min，晾干。

2.2洋金花水提取物制备 洋金花样品(海源1批次)，剪碎，用8倍体积的纯化水于圆底烧瓶内浸泡0.5 h，电热套加热，回流提取，药液沸腾后调整温度至药液微沸，继续煮1 h后，滤过药液，重复2次，将滤液合并浓缩，得到洋金花水提取物，生药含量浓度1 g·mL-1。

2.3制洋金花水提取物制备 以制洋金花样品(海源1批，聚福10批)，剪碎，用8倍体积的纯化水于圆底烧瓶内浸泡0.5 h，电热套加热，回流提取，药液沸腾后调整温度至药液微沸，继续煮1 h后，滤过药液，重复2次，将滤液合并浓缩，得到洋金花水提取物，生药含量浓度1 g·mL-1。

2.4最大给药量急性毒性预实验 选取ICR小鼠4只，雌雄各半，体重为18～22 g，分笼饲养。实验前小鼠禁食24 h，以制洋金花(海源1批次)水提取物生药含量浓度1 g·mL-1，10 g小鼠体重最大灌胃给药体积0.4 mL，一次性灌胃给药，给药后给饲料，自由饮水，观察24 h，记录小鼠死亡情况，脱颈椎处死后，解剖观察脏器。给药后，小鼠饮食和活动正常，毛色正常，无死亡情况，解剖观察心、肺、胸腺、肝、脾、肾均正常，切开小鼠胃后，肉眼观察有饲料，未有制洋金花水提取物，给药前后的小鼠体重未出现大幅下降。

2.5最大耐受量急性毒性预实验 选取ICR小鼠8只，雌雄各半，体重为18～22 g，分笼饲养。实验前小鼠禁食24 h，以制洋金花(海源1批次)水提取物生药含量浓度1 g·mL-1，10 g小鼠体重灌胃给药体积0.4 mL，1 d内2次和3次灌胃给药，末次给药后给予小鼠饲料，自由饮水，观察24 h，均无小鼠死亡情况，各脏器正常，肉眼观察胃部有饲料，未有制洋金花水提取物。

由预实验结果可得，以1 d内给药3次的最大耐受量急性毒性预实验结果为依据开展最大耐受量急性毒性正式实验；以最大给药量急性毒性预实验结果为依据开展亚慢性期毒性正式实验。

2.6最大耐受量急性毒性正式实验 选取ICR小鼠56只，雌雄各半，分笼饲养，空白组8只，制洋金花(海源1批，聚福10批)水提物组各4只，洋金花(海源1批次)水提取物组4只。除空白组小鼠外，实验前小鼠禁食24 h，制洋金花(海源1批，聚福10批)水提取物给药组小鼠，以制洋金花(海源1批，聚福10批)水提取物生药含量浓度1 g·mL-1，10 g小鼠体重灌胃给药体积0.4 mL，1 d内3次灌胃给药，洋金花(海源1批次)水提取物组小鼠，以洋金花(海源1批次)水提取物生药含量浓度1 g·mL-1，10 g小鼠体重灌胃给药体积0.4 mL，1 d内3次灌胃给药，末次给药后给予饲料，小鼠自由饮水，观察7 d，记录小鼠体重和死亡情况，第7 d后，脱颈椎处死小鼠后，解剖观察小鼠脏器。

2.7亚慢性毒性正式实验 选取ICR小鼠24只，雌雄各半，分笼饲养，空白组8只，制洋金花(海源1批次)水提物组16只。除空白组小鼠外，实验前小鼠禁食24 h，制洋金花(海源1批次)水提取物给药组小鼠，以制洋金花(海源1批次)水提取物生药含量浓度1 g·mL-1，10 g小鼠体重灌胃给药体积0.4 mL，每天灌胃前禁食3 h，灌胃给药1次，给药后给予饲料，小鼠自由饮水，连续给药7 d，记录小鼠体重和死亡情况，末次给药24 h后，脱颈椎处死小鼠后，解剖观察小鼠脏器，称脾、肾重，记录脏器系数。

3 结果

3.1最大耐受量急性毒性正式实验结果 实验观察期间，各组小鼠饮食和活动正常，毛色光泽，生长良好，未见中毒表现，无死亡情况，7 d后处死小鼠，肉眼观察小鼠心、肺、胸腺、肝、脾、肾均正常，各器官均无异常，给药组各组小鼠体重呈上升趋势，组间无显著性差异。因此，以人60 kg体重及制洋金花临床最大用药量1.5 g，小鼠MTD>120 g·kg-1，相当于60 kg体重人用药量的4800倍，属无毒类。最大耐受量急性毒性正式实验结果见表1。

表1 最大耐受量急性毒性正式实验结果

3.2亚慢性毒性正式实验结果 实验观察期间，各组小鼠饮食和活动正常，毛色光泽，生长良好，未见任何中毒表现，无死亡，7 d后处死小鼠，肉眼观察小鼠心、肺、胸腺、肝、脾、肾均正常，各器官均无异常，给药组各组小鼠体重呈上升趋势，组间无显著性差异，脾脏和肾脏系数组间无显著性差异。因此，制洋金花以小鼠每日给药剂量以体表面积换算人(20 g小鼠体表面积为1，60 kg体重人体表面积等效量为346)每日给药剂量为276.8 g，显著大于临床用量1.5 g，是临床用量的184倍，临床7 d内使用制洋金花可以加大剂量使用。亚慢性毒性实验结果见表2。

表2 亚慢性毒性正式实验结果

4 讨论

对于毒性中药，既要在工艺优化，也要提高临床用药剂量安全性，达到减毒增效的目的[5-7]。在中药炮制减毒增效方面研究，从醋制减毒入肝、增效角度就来研究醋制中药[8]；汗渍法炮制了哥王药材中芫花素的含量有所降低，抗氧化活性增强，具有减毒增效效果[9]；去油制霜可影响美洲大蠊脂溶性成分含有量及小分子多肽Papp，可能是其减毒增效的机制[10]；黄精经过炮制后成分有显著变化，九蒸九制的黄精具有减毒增效的作用[11]。开展毒性药材动物实验必不可少，以急性毒性和亚慢性毒性试验联合开展，结果显示：按临床剂量使用地黄提取物是安全无毒的，夏枯草浸膏属于无毒级物质，翅果仁属于实际无毒物质，槐定碱具有一定毒性，但停止染毒30 d后肝、肾等实质器官损伤可得到恢复[12-16]。

通过最大耐受量和最大给药量急性毒性预实验分别进行研究，有助于急性毒性和亚慢性毒性正式实验合理设计，以1 d内给药3次的最大耐受量急性毒性预实验结果为依据开展最大耐受量急性毒性正式实验；以最大给药量急性毒性预实验结果为依据开展亚慢性期毒性正式实验。

最大耐受量急性毒性试验结果得出，洋金花生品和炮制品急性毒性试验小鼠MTD大于120 g·kg-1，最大耐受倍数为4800倍，属于无毒。给予洋金花和制洋金花后，小鼠均无毒性反应，组间体重无显著性差异，表明洋金花炮制前后毒性反应无差异。亚慢性毒性试验结果得出，制洋金花以小鼠每日给药剂量以体表面积换算人(20 g小鼠体表面积为1，60 kg体重人体表面积等效量为346)每日给药剂量为276.8 g，显著大于临床用量1.5 g，是临床用量的184倍，临床7 d内使用制洋金花可以加大剂量使用。

洋金花作为一种毒性药材，在毒性实验研究方面较少报道：洋金花对鲤、鳊和白鲢具有剂量致死性，白鲢致死剂量最低[17]；对家兔和豚鼠皮肤毒性试验表明无刺激性和致敏性[18]；洋金花静脉滴注大鼠，可以短暂兴奋，随即减弱，3 d恢复正常[19]；曼陀罗种子对小鼠的灌胃致死中量分别为19.05 g·kg-1和23.53 g·kg-1体重[20]。以上文献报道和本实验取得的研究结果分析洋金花对各种实验动物产生毒性反应、药材不同给药方式毒性反应和药材不同用药部位产生毒性反应进行比对，表明洋金花对鱼类毒性反应较大；药材不同给药方式毒性反应：静脉滴注>口服>经皮给药；药材不同用药部位毒性反应：种子的毒性大于花的毒性。本次实验中炮制前后的洋金花，急性毒性无差异，推测其毒性在动物整体毒性反应上表现不明显，可能在脏器长期蓄积有关，或者由于洋金花含有东莨菪碱成分和其用于外科麻醉的作用，多作用于中枢神经，下一步将继续开展制洋金花的毒性研究，同时查找出制洋金花中的毒性成分开展研究，特别是对中枢神经药效毒性作用。