HMGA1、S100A4与子宫内膜癌浸润、转移及顺铂耐药的相关性

郭 玮 孙丽莎

子宫内膜癌为常见生殖道肿瘤，近年来该肿瘤发病率逐渐增高，且发病趋于年轻化，对女性生命健康有严重危害[1-2]。研究显示，肿瘤分期、转移等为子宫内膜癌患者病情进展与预后的危险因素[3]。目前临床评估患者病情与预后主要依据病理和影像学等检查结果，缺少高效特异性肿瘤标志物。高迁移率族蛋白A1 (HMGA1)在上皮恶性肿瘤细胞中呈高表达，与癌症进展与预后密切相关，但临床关于其在子宫内膜癌中研究较少[4]。S100钙结合蛋白A4(S100A4)为钙离子结合家族成员，可参与细胞增殖分化等过程[5]。研究发现，S100A4在子宫内膜癌、乳腺癌等多肿瘤发生发展中发挥作用[6]。化疗为子宫内膜癌常见治疗方式，其中顺铂具有良好疗效，但易产生耐药性而抑制治疗效果[7]。故寻找预防且逆转子宫内膜癌的顺铂耐药性有效途径为临床研究重点。本研究分析了HMGA1、S100A4表达与子宫内膜癌组织浸润、转移和顺铂耐药间的关系，旨在提供参考。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2019年5月至2021年5月于我院行手术切除的96例子宫内膜癌组织标本，患者年龄为35～76岁，平均(53.22±11.27)岁；绝经52例，未绝经44例。纳入标准；符合《子宫内膜癌诊断与治疗指南(第四版)》标准[8]，且经手术病理确诊为子宫内膜癌；初诊患者；纳入前无放化疗治疗，无手术禁忌。排除标准：心肝肾等器官病变患者；合并其他恶性肿瘤患者；造血功能障碍患者；精神疾病患者。根据国际妇产科联盟(FIGO)分期[9]分为Ⅰ期63例、Ⅱ期13例、Ⅲ期11例、Ⅳ期9例；WHO子宫内膜癌分期标准：G1级47例，G2+G3级49例；63例子宫肌层浸润深度不足1/2，33例浸润深度≥1/2；淋巴结转移9例：盆腔转移4例、腹主动脉转移5例，未转移87例。另选因子宫内膜增生手术切除的病理子宫组织标本45例作为对照组，患者年龄为36～72岁，平均(51.37±10.16)岁；绝经27例，未绝经18例。两组资料无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

HMGA1表达检测方法：收集受试者空腹静脉血，经抗凝处理后，提取受试者外周血RNA，采用逆转录试剂盒(来源于Takara公司)获取cDNA，产物电泳鉴别，采用RT-PCR检测HMGA1表达。反应体系：PCR buffer为6.5 μL，其上下游引物均为2 μL，荧光探针为1 μL，Taq为9.5 μL，cDNA设为5 μL。反应条件：94 ℃预变性5 min；再于94 ℃变性10 s，在64 ℃退火25 s，于72 ℃延伸45 s，重复以上40个循环。引物与探针来源于南京金斯瑞生物科技有限公司。

S100A4表达检测：组织标本固定，石蜡包埋后切片；DAB显色后用苏木精复染，梯度脱水后，二甲苯透明并封固；按说明书操作步骤，S100A4兔抗体购于Epitomics公司。

1.3 S100A4阳性判断

子宫内膜腺的上皮细胞质或细胞核中有棕黄色颗粒则可判断为阳性。计分标准：切片随机选取5个视野，于显微镜下计算每个视野内腺上皮细胞数与阳性细胞数比例。阳性细胞数计分：阳性细胞占比为0为阴性，计0分；不足10%计1分；10%～25%计2分；26%～50%计3分；超过50%计4分。染色程度计分：未染色计0分，呈淡黄色计1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两项计分相乘分数≥3分表示阳性，反之为阴性[10]。

1.4 术后随访

患者术后接受顺铂化疗，参照WHO肿瘤药物客观疗效评估标准：完全缓解(CR)或部分缓解(PR)为化疗有效，稳定(SD)或疾病进展(PD)为化疗无效。经1年随访显示，12例化疗无效，84例化疗有效。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 两组HMGA1、S100A4表达比较

子宫内膜癌组HMGA1表达水平高于对照组(P<0.05)，且S100A4阳性表达率高于对照组(P<0.05)，见表1。

2.2 子宫内膜癌组织HMGA1、S100A4表达与临床病理参数关系分析

子宫内膜癌组织HMGA1、S100A4表达情况在不同年龄中差异无统计学意义(P>0.05)，在组织学分级、FIGO分期、肌层浸润程度、有无淋巴结转移、对顺铂有无耐药方面，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 子宫内膜癌组织中HMGA1、S100A4表达与临床病理参数的关系

2.3 多因素分析

经logistics分析，HMGA1、S100A4高表达是子宫内膜癌组织肌层浸润≥1/2、淋巴结转移、对顺铂耐药的危险因素(P<0.05)，见表3。

表3 HMGA1、S100A4高表达的多因素分析

2.4 相关性分析

经相关性分析，HMGA1高表达、S100A4阳性表达与肌层浸润深度、淋巴结转移、对顺铂耐药呈正相关(P<0.05)。见表4。

表4 相关性分析

3 讨论

子宫内膜癌发病率仅次于宫颈癌，多数患者早期经手术治疗具有良好预后，但晚期患者由于淋巴结转移导致其预后较差，复发率高[11-12]。子宫内膜癌发病机制尚不明确，随着遗传学、分子生物学等发展，有研究指出子宫内膜癌与原癌基因、抑癌基因等异常表达有关[13]。围绝经期女性的子宫内膜癌发病率高，部分患者未重视该阶段阴道出血而错失最佳治疗时机，导致后期治疗的复发与转移风险增加，不仅影响生活与治疗结果，对生命也造成威胁。故寻找子宫内膜癌的诊断预测癌细胞标志物并为患者制定有效措施以提高预后具有重要意义。

HMGA1为高迁移率蛋白超家族成员，位于真核细胞中，是非组蛋白染色体结合蛋白，在多种肿瘤细胞的染色体断裂的簇集区有定位，其中在妇科肿瘤中有特异性表达[14]。本研究中子宫内膜癌组HMGA1表达水平高于对照组，表示子宫内膜癌患者外周血HMGA1异常高表达。许海莺[15]研究显示，乳腺癌患者病灶组织与血清中HMGA1表达高于乳腺良性肿瘤者，与本研究结果类似。S100A4为多肽蛋白，由多个氨基酸组成，其分子量在11.5 kD。国外研究显示，S100A4对细胞凋亡有抑制作用，促进癌细胞增殖，影响细胞骨架排卵，对肿瘤转移有促进作用[16]。既往研究显示，S100A4在膀胱癌、胰腺癌等多肿瘤组织中呈高表达状态，可作为有效肿瘤预后标志物[17]。S100A4在卵巢癌中可正向调节，影响患者预后，该结果可推测S100A4对子宫内膜癌发生发展也有类似作用。由于国内外有关S100A4蛋白在子宫内膜癌中表达及与患者预后关系的研究较少。本研究通过免疫组化法检测子宫内膜癌与对照组织中S100A4表达情况显示，子宫内膜癌组S100A4阳性率高于对照组织。

本研究通过比较不同临床病理参数间的HMGA1、S100A4表达情况，结果显示HMGA1、S100A4表达在组织学分级、FIGO分期、肌层浸润程度、有无淋巴结转移、对顺铂有无耐药方面具有显著差异，后经多因素分析显示，子宫内膜癌组织肌层浸润≥1/2、淋巴结转移、对顺铂耐药为HMGA1、S100A4高表达的危险因素[18]。化疗为子宫内膜癌治疗主要手段，顺铂为化疗一线药物，其药敏性为改善患者预后与生活质量关键因素。铂类药物是临床广泛使用于子宫内膜癌的化疗药，但其化疗效果不佳，文献显示单独使用顺铂化疗的有效率仅在30%，联合化疗可提高疗效，但也增加毒性反应[19]。如何提高顺铂化疗敏感性以克服其耐药性为子宫内膜癌的治疗研究重点。顺铂为一线化疗药，是肿瘤患者术后常用药物，其中最为突出的抗癌机制为DNA损伤、抑制DNA合成及有丝分裂并诱导细胞凋亡以杀灭癌细胞[20]。少数患者对顺铂有反应，提示肿瘤中有高异质性与显著顺铂耐药群，可能随顺铂治疗时间延长、剂量增加而产生一定耐药性，导致治疗失败[21]。本研究中顺铂耐药组织HMGA1表达水平、S100A4阳性表达率均高于敏感者，提示HMGA1、S100A4高表达可能为导致子宫内膜癌顺铂耐药原因之一。经相关性分析，HMGA1高表达、S100A4阳性表达与肌层浸润深度、淋巴结转移、对顺铂耐药呈正相关，提示观察HMGA1、S100A4表达水平可对子宫内膜癌患者预后具有一定判断价值。

综上所述，HMGA1、S100A4在子宫内膜癌中高表达，浸润深度、淋巴结转移与顺铂耐药为其危险因素，可作为评估子宫内膜癌预后有效指标。