华安县鸭场11 种病毒感染的监测与分析

陈燕慧

（福建省华安县动物疫病预防控制中心，福建漳州 363800）

近年来，我国鸭饲养规模和数量发展迅速，同时鸭病也呈现越来越复杂的流行趋势，继发、并发等共感染病例越来越多[1]。华安县养鸭业主要集中于湖林乡、华丰镇和仙都镇等9 个乡镇，蛋鸭品种主要为麻鸭、金定鸭，主要免疫接种鸭病毒性肝炎卵黄抗体、重组禽流感（H5+H7）三价灭活疫苗、鸭瘟弱毒疫苗和禽坦布苏病毒疫苗；肉鸭品种主要为番鸭、半番鸭，主要免疫接种番鸭细小病毒弱毒疫苗、鸭病毒性肝炎卵黄抗体、重组禽流感（H5+H7）三价灭活疫苗、小鹅瘟弱毒疫苗和鸭瘟弱毒疫苗。

为全面了解华安县鸭场疫病病毒感染情况，2021年1 月—2022 年5 月对全县境内规模肉（蛋）鸭场开展了疫病调查及抽样检测，以PCR/RT-PCR 方法分别进行禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）、呼肠孤病毒（Duck reovirus，DRV）、鸭瘟 病毒(duck plaque virus，DPV)、鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus，DHV)、番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus，MDPV)、禽坦布苏病毒（Avian tembusu virus，ATV)、鸭副黏病毒(Avian paramyxovirus，APMV)、鸭腺病毒(Duck adenovirus，DAdV)、鹅细小病毒(Goose par vovirus,GPV)、鸭星状病毒((Duck astrovirus，DAstV)和鸭圆环病毒（duck circovirus，DuCV）等11 种病毒的病原学检测，以期为华安县鸭病毒性疫病的诊断与防控提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 样品采集和信息记录

于2021 年1 月—2022 年5 月，对华安县内存栏2000 只以上规模肉（蛋）鸭场（覆盖9 个乡镇20 个肉鸭场、21 个蛋鸭场，共约12.3 万只鸭）进行采样，每个鸭场随机采集咽喉/泄殖腔双拭子样品（以下简称拭子样品）50 份、场内污水样品5 份，拭子样品采集后放入含有双抗的保存液中；所有样品置于冰盒尽快送往实验室进行处理。在采集样品的同时对鸭场饲养的肉（蛋）鸭品种、日龄、养殖规模、养殖模式、鸭的来源、饲料、饮水来源、免疫情况、当时发病情况及既往病史等方面进行调查；从病鸭场（根据现场调查生产数据及养殖者反馈情况，主要根据鸭群临床症状，包括饮水和采食量是否异常，鸭群是否有死亡，蛋鸭是否有减蛋，是否存在生长不良等异常情况来定义）采集心、肝、脾、肺等组织样品置于冰盒中尽快送检，分别采集2 个肉鸭场、1 个蛋鸭场生长发育不良鸭组织样品各9 份和2 份，以及5 个肉鸭场病（死）鸭组织样品15 份(每个场各3 份)、3 个蛋鸭场病（死）鸭组织样品10 份（各3、3 和4 份）和相关信息，详见表1。

表1 所采样品份数 单位：份

1.2 检测方法

参照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T 18936-2020）等行业标准或地方标准，对采集的待检样品分别进行AIV[2]、DPV[3]、DHV[4]、DRV[5]、MDPV[5]、ATV[6]、APMV[7]、DuCV[8]、DAdV[9]和GPV[5]10 种病毒核酸的检测；参照张蕊等报道设计合成鸭星状病毒(DAstV)引物，开展DAstV 病毒核酸检测[10]。病毒核酸提取按北京全式金生物技术有限公司Easy Pure Viral DNA/RNA Kit 试剂盒操作进行，获得的核酸样品用Easy Script One-Step RT-PCR SuperMix 或2×Easy-Taq PCR SuperMix 试剂盒说明书进行RT-PCR 或PCR扩增。阴阳性对照、反应体系及条件等分别按以上标准或文献执行。

1.3 结果判定

病毒感染阳性场判定：本研究对采集样品所在鸭场或鸭群疫苗及药物使用情况均有详细调查；PCR 检测为阳性，且该鸭群或所在鸭场已经免疫过相应活疫苗的样品，进一步送福州铂尚生物技术有限公司进行基因序列测序，对获得序列进行比对分析，以确定是否为疫苗株。只要检出为野毒的1 份以上11 种病毒中的某一病毒核酸阳性样品，则判定该场为病毒感染阳性场。

2 结果

2.1 样品总体检测结果

从表2 可知，华安县41 个肉（蛋）鸭养殖场2291 份待检样品进行11 种病毒核酸检测结果显示，608 份样品中检出病毒核酸阳性，样品总阳性率26.55%（608/2291），共检出7 种病毒，病毒核酸阳性率从高到低依次为DuCV、ATV、DRV、DAstV、H9N2-AIV、DAdV 和MDPV，分别为15.62%、5.67%、2.58%、3.27%、3.97%、0.92%和0.35%。以DuCV 感染率最高。

表2 所有待检样品11 种病毒核酸检测结果 单位：%

有36 个养鸭场检出病毒核酸阳性，场群阳性率87.81%（36/41)，表明华安县41 个养鸭场中有36 个场存在不同程度的病毒感染。场阳性率最高也为DuCV，为56.09%，之后依次为ATV、H9N2-AIV、DAstV、DRV、DAdV 和MDPV，分别为31.71%、17.07%、14.63%、7.32%、4.88%和2.44%。未检出DPV、APMV、DHV 和GPV4 种病毒。

2.2 不同用途鸭场检测结果

2.2.1 肉鸭场检测结果

20 个肉鸭场的1000 份咽喉/泄殖腔拭子检测结果显示，来自肉鸭场的拭子样品检出6 种病毒即DuCV、DRV、ATV、DAstV、DAdV 和MDPV 核酸阳性，阳性率依次为19.1%、7.7%、2.4%、2.4%、1.3%和0.5%，肉鸭场污水样品中检出5 种病毒即DuCV、ATV、DRV、DAstV 和DAdV，阳性率依次为41%、7%、5%、4%和2%，详见表3。

2.2.2 蛋鸭场检测结果

21 个蛋鸭场的1050 份咽喉/泄殖腔拭子样品检测结果显示，来自蛋鸭的咽喉/泄殖腔拭子样品检出5种病毒即DuCV、ATV、H9N2-AIV、DAstV 和DAdV，阳性率自高到低依次为7.24%、6.48%、4.95%、3.91%和0.38%，蛋鸭场污水样品中检出5 种病毒即DuCV、ATV、H9N2-AIV、DAstV 和DAdV，阳性率依次为25.71%、17.14%、6.67%、5.76%和1.9%，详见表3。

表3 肉鸭场、蛋鸭场所采样品11 种病毒核酸检测阳性率 单位：%

2.3 不同健康状况鸭群及场地所采样品检测结果

在鸭病调查中发现，41 个肉（蛋）鸭场中有8 个鸭场（5 个肉鸭场、3 个蛋鸭场）出现病（死）鸭，3个蛋鸭场病（死）鸭组织样品中仅检出ATV 阳性，5个肉鸭场病（死）鸭组织样品中3 个场检出DuCV 和DRV 核酸双阳性、1 个场检出MDPV 和DuCV 核酸双阳性、1 个场检出ATV 阳性。对8 家发病鸭场与33 家未发病鸭场检测结果进行统计，结果见表4。由表4 可知，来自发病鸭场拭子样品及其场内污水样品中检出的病毒种类更多、病毒感染的阳性率更高，尤其是ATV、鸭DRV 和DuCV3 种病毒更为明显。

表4 不同健康状况鸭群及场地所采样品11 种病毒核酸检测阳性率 单位：%

2.4 病毒共感染情况

统计采自41 个肉（蛋）鸭场所有不同种类样品的病毒检测结果发现，除11 份生长不良鸭组织样品中均仅检出DuCV 阳性外，其余3 种类型样品中均存在不同程度、不同病毒的共感染现象，其中以DuCV共感染问题最为严重，检出的358 份DuCV 核酸阳性样品中存在2 种、3 种共感染的样品占29.89%（107/358），如有的个别蛋鸭场的咽喉/泄殖腔拭子样品、场内污水样品中均检出DuCV 与H9N2-AIV 或（和）ATV2（3）种病毒核酸阳性，5 个肉鸭场中有4个肉鸭场的病（死）鸭组织样品中，检出DuCV 和DRV 或MDPV 核酸双阳性。

3 结论与讨论

3.1 关于不同类型鸭场病毒感染情况

由表3 可知，肉鸭场咽喉/泄殖腔拭子和污水样品两种样品中携带病毒种类及其阳性率呈高度相关，表明肉鸭场内肉鸭消化道病毒感染与场内水中是否存在病毒及其种类有直接相关。

蛋鸭场咽喉/泄殖腔拭子样品及蛋鸭场污水样品中检出病毒均为DuCV、ATV、H9N2-AIV、DAstV 和DAdV，其中以DuCV 核酸阳性检出率最高，发现场内水样中病毒核酸阳性率均高于蛋鸭咽喉/泄殖腔拭子样品，这与有的蛋鸭群离地饲养及蛋鸭本身抗病力较肉鸭强有关。

本次检测发现，华安县蛋鸭群存在一定程度的H9N2-AIV 感染。有报道认为，我国低致病性H9亚型AIV 危害较为严重，可造成家禽发病甚至死亡，引起家禽免疫抑制，低致病性AIV 虽比高致病性AIV 危害小，但一旦发病往往给养殖场造成很大经济损失[11]；

3.2 （未）发病鸭群及场地所采样品检测结果分析

由表3 可知，与33 个未发病鸭场的相应样品检测结果比较，采自8 个发病鸭场鸭拭子样品及其场内污水样品中检出的病毒种类更多为两种病毒DRV 和MDPV；且病毒感染的阳性率明显更高，尤其是ATV、DRV 和DuCV3 种病毒更为明显，在发病鸭场、未发病鸭场样品中其检出阳性率分别为11.36%（50/440）和3.69%（67/1815）、18.64%（82/440）和0、31.59%（139/440）和10.8%（196/1815），进一步表明鸭群是否发病与场内环境卫生状况、水中是否带有病原直接相关，提示养殖者应充分认识到鸭场内环境卫生和消毒对鸭病防控的重要性。

3.3 生长不良鸭检测结果分析

研究报道，在我国养鸭生产中DuCV 感染的阳性率较高，尤其是生长不良、羽毛紊乱、体况消瘦鸭（其体重只有同群日龄未感染的健康鸭体重的1/2～1/3），其DuCV 感染的阳性率可高达81.2%，表明鸭生长不良、消瘦与DuCV 感染有关[12]。在本次鸭病调查中发现2 个肉鸭场、1 个蛋鸭场有生长发育不良鸭，其体重仅为同群中正常鸭体重的1/3，由表3 可知，其11 份组织样品中均仅检出DuCV 阳性，阳性率100%，表明华安县鸭群中生长发育不良鸭很可能与感染DuCV 有关。

3.4 病毒共感染检测情况分析

肉（蛋）鸭拭子样品、场内污水样品及病（死）鸭组织样品中均检出存在不同程度、不同病毒的共感染现象，其中以DuCV 共感染现象最为严重，在检出DuCV 核酸阳性358 份样品中，与DRV、H9N2-AIV、ATV 或（和）MDPV2（3）种病毒共感染核酸阳性的样品占29.89%（107/358），揭示华安县养鸭生产中存在较严重的DuCV 双重或三重共感染现象。