武汉地区汉族T2DM患者PPARγ2基因多态性与高脂血症易感性的相关性研究*

盛 碧，夏 晶，安 靖，王 雄，吴金虎，陈永刚，孟军华，陈 灵

武汉市第三医院药学部，湖北武汉 430060

2型糖尿病(T2DM)是以高血糖和脂类代谢紊乱为主要特征的复杂性疾病[1]。血脂水平升高会加重T2DM患者血管内皮细胞功能的损伤而导致动脉粥样硬化，高血脂水平是T2DM患者发生心脑血管疾病的重要危险因素[2-3]。因此，多角度分析与T2DM患者糖脂代谢的相关因素，以期发现潜在的治疗靶点尤为重要。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)是核激素受体家族中的配体激活受体，具有PPARγ1，PPARγ2和PPARγ3三种亚型，其中PPARγ2亚型参与脂肪细胞分化，对脂质代谢有重要影响[4]。rs1801282位点是PPARγ2基因最常见发生突变的位点，PPARγ2外显子B密码子12中脯氨酸(CCA)发生丙氨酸(GCA)突变导致了rs1801282位点多态性[5]。目前，国内外关于PPARγ2基因rs1801282位点多态性与脂代谢紊乱之间的相关性仍不确定[6]。本研究旨在研究武汉地区汉族T2DM患者PPARγ2基因多态性，探讨PPARγ2基因多态性与该类人群发生高脂血症的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 本研究为回顾性分析。选取2018年1月至2019年6月在武汉市第三医院行PPARγ2基因检测且无血缘关系的汉族T2DM患者为研究对象。通过医院临床药学美康信息管理系统和医院信息管理系统查阅电子病历，收集患者的临床资料，包括年龄、性别及总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、尿酸、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平。纳入标准：T2DM诊断均符合1999年世界卫生组织修订的糖尿病诊断及分型标准；高脂血症诊断标准符合《中国成人血脂异常防治指南(2016修订版)》，即TC≥6.2 mmol/L和(或)TG≥2.3 mmol/L。排除标准：严重心脑血管疾病、免疫性疾病、恶性肿瘤患者；妊娠期或哺乳期患者；严重肝、肾功能障碍患者。符合纳入、排除标准的患者共122例，根据是否并发高脂血症将患者分为两组，其中57例T2DM并发高脂血症患者作为研究组，65例T2DM患者作为对照组。所有患者均签署知情同意书。

1.2方法 采用荧光染色原位杂交技术检测PPARγ2基因rs1801282位点多态性，具体方法：取200 μL患者外周静脉血，加入1 mL氯化铵(北京华夏时代基因科技发展有限公司)，用于裂解红细胞，混匀后静置5 min，将混合液3 000 r/min离心5 min，得到沉淀在离心管底部的白细胞。将白细胞沉淀用红细胞裂解液冲洗2～3次，去除上清液后加入30 μL核酸纯化试剂(北京华夏时代基因科技发展有限公司)混匀。根据检测的目的基因，取1.5 μL待测白细胞标本加入至相对应的测序反应试剂(北京华夏时代基因科技发展有限公司)管中，混匀后上机检测(TL998A荧光检测仪，西安天隆科技有限公司)并进行结果判读。

2 结 果

2.1PPARγ2基因rs1801282位点基因型及等位基因检测结果 PPARγ2(rs1801282)基因型包含野生型CC及突变型CG、GG。122例T2DM患者中，CC型107例(87.7%)，CG型15例(12.3%)，未检出GG型。C、G等位基因的频率分别为93.9%(229/244)和6.1%(15/244)。122例T2DM患者CC型、CG型、GG型基因型理论例数分别为107.6、14、0.4例，PPARγ2基因rs1801282位点基因型分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05)。

2.2两组一般资料及PPARγ2基因rs1801282位点基因型比较 研究组TC、TG、LDL、HbA1c水平高于对照组，HDL水平低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；两组性别构成、年龄，ALT、AST、尿酸水平，以及PPARγ2基因rs1801282位点基因型比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组一般资料及PPARγ2基因型比较

2.3不同PPARγ2基因rs1801282位点基因型T2DM患者血脂水平比较 CC型与CG型T2DM患者的TC、TG、HDL、LDL水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 不同PPARγ2基因rs1801282位点基因型T2DM患者血脂水平比较

2.4T2DM患者并发高脂血症相关危险因素的Logistic回归模型分析 将T2DM患者是否并发高脂血症作为因变量，将表1中差异有统计学意义的指标TC、TG、HDL、LDL、HbA1c作为自变量建立Logistic回归模型。因研究组与对照组尿酸水平比较的P值近似0.05，故将尿酸作为自变量纳入分析；同时为了验证rs1801282位点基因型对T2DM患者并发高脂血症有无影响，也将rs1801282位点基因型作为自变量纳入分析，分析结果显示，TG、尿酸可能是T2DM并发高脂血症的独立危险因素[OR=8.250(95%CI:2.801～24.304)、1.008(95%CI:1.001～1.015)，P<0.05]。见表3。

表3 T2DM患者并发高脂血症相危险关因素的Logistic回归模型分析

组别nTG(x±s,mmol/L)HDL(x±s,mmol/L)LDL(x±s,mmol/L)HbA1c(x±s,%)CC型(n)CG型(n)研究组572.6±1.31.2±0.23.0±0.98.7±2.0507对照组651.3±0.51.3±0.32.4±0.77.9±2.0578χ2/t/Z 7.461-2.134 4.1352.2040.000P<0.001 0.035<0.0010.0291.000

2.5不同地区PPARγ2基因rs1801282位点基因多态性 检索美国国家生物技术信息中心单核苷酸多态性(SNP)数据库，结果显示，欧洲人群PPARγ2基因rs1801282位点等位基因C、G的分布频率为88.7%、11.3%，非洲人群为98.6%、1.4%，亚洲人群为96.0%、4.0%。武汉地区T2DM患者等位基因C、G的分布频率为93.9%、6.1%,大致符合亚洲人群等位基因C、G的分布频率，但等位基因C分布频率高于欧洲人群，低于非洲人群，等位基因G分布频率低于欧洲人群，高于非洲人群。欧洲人群发生突变的等位基因G的分布频率为11.3%，高于亚洲人群和非洲人群的1.4%、4.0%，差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨 论

PPARγ在脂质代谢、葡萄糖稳态、胰岛素敏感性和炎症途径中起着重要作用，人类PPARγ基因位于3p25染色体上，具有9个外显子，其蛋白质产物具有3种亚型，即PPARγ1，PPARγ2和PPARγ3，其中PPARγ2在脂肪细胞中高度表达，其调控脂肪细胞增殖及TG稳态等过程，是关键的脂肪选择性PPAR亚型[7-9]。

本课题组对122例武汉地区T2DM患者PPARγ2基因rs1801282位点多态性进行了研究，结果显示，武汉地区T2DM患者中，主要基因型为野生型CC(87.7%)、突变杂合型CG(12.3%)，未发现突变纯合型GG；PPARγ2基因rs1801282位点基因型分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05)，表明该样本具有群体代表性；与其他地区人群比较显示，本研究中的T2DM患者等位基因C、G分布频率符合亚洲人群分布频率，但与非洲、欧洲人群分布频率存在一定差异，突变基因G在欧洲人群的分布频率要高于亚洲人群和非洲人群(P<0.05)，提示相对于亚洲和非洲人群，欧洲人群可能更易发生rs1801282位点突变。

本研究结果显示，T2DM患者及T2DM并发高脂血症组患者PPARγ2基因rs1801282位点基因型比较，差异无统计学意义(P>0.05)；CC型与CG型T2DM患者的TC、TG、HDL、LDL水平差异无统计学意义(P>0.05)；Logistic回归模型分析结果显示，PPARγ2基因rs1801282位点基因型不是T2DM患者并发高脂血症的独立危险因素，提示武汉地区PPARγ2基因rs1801282位点SNP可能与T2DM患者并发高脂血症易感性无明显关系。此前，亦有rs1801282位点基因多态性与血脂相关性报道，但结论不一。李秀丽等[10]报道PPARγ2基因rs1801282位点基因多态性与西北地区汉族T2DM及其一级亲属血脂水平具有相关性；另有报道称PPARγ基因rs1801282位点基因中CG基因型携带者比CC、GG基因型更易患高TG血症[11]；CARRILLO-VENIOR等[12]对PPARγ2基因多态性与血清脂质水平等常规生化指标进行分析，发现PPARγ2基因多态性与总研究人群的HDL之间存在关联，但对族群进行调整后，这种关联差异无统计学意义(P>0.05)。多个报道的研究结果不一致可能与样本量、患者标本的选择、种族、地域有关。在本研究中，虽然Logistic回归模型分析结果显示，尿酸可能是T2DM患者并发高脂血症的独立危险因素，但OR为1.008(95%CI:1.001～1.015)，已近乎为1，说明尿酸对T2DM患者高脂血症的发生几乎没有影响或影响很小，这与其他关于尿酸水平与糖尿病风险及血脂异常之间相关性仍不确定的结论基本一致[13-15]。本研究为回顾性分析且样本量较小，存在一定的局限性，统计结果可能存在偏倚，后续需进一步扩大临床样本量研究。

综上所述，武汉地区汉族T2DM患者PPARγ2基因rs1801282位点基因多态性与T2DM患者并发高脂血症无关。