重症肌无力患者血清PD-1、TLR4、IL-23水平与病情严重程度相关性及其预测效能分析

任莹莹

河南科技大学第一附属医院(河南 洛阳 471000)

重症肌无力(MG)是一种抗体介导、与T细胞功能密切相关的慢性自身免疫疾病,主要临床表现为肌无力,部分发生肌无力危象患者可具有较高的死亡风险[1]。目前临床已经能够根据不同抗体类型对MG进行分析,但MG具体发病机制并未完全阐明。相关研究显示,T细胞激活需协同刺激信号来参与反应,而程序性死亡受体1(PD-1)是一种重要的负性协同刺激分子[2]。此外,白细胞介素-23(IL-23)可刺激辅助性T细胞(Th17)参与机体免疫反应,而Th17在MG发生发展过程中起到重要作用[3]。Toll样受体4(TLR4)是一种参与天然免疫系统的模式识别受体,目前已经发现其参与了多种自身免疫性疾病和炎症疾病的发生发展[4]。故本次研究旨在探讨血清PD-1、TLR4、IL-23水平与MG患者病情严重程度关系及对MG发生危象的预测价值,以期为MG临床诊疗提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年1月到2021年1月我院收治的91例MG患者作为MG组,纳入标准:(1)确诊为MG,参考《中国重症肌无力诊断和治疗专家共识》[5],典型肌无力症状,低频重复神经电刺激显示波幅递减>10%;(2)采血检测前未使用免疫抑制剂或胆碱酯酶抑制剂治疗;(3)患者知情并签署同意书。排除标准:(1)合并慢性脱髓鞘性多发性神经疾病、Guillain-Barra综合征、Lambert-Eaton综合征患者;(2)合并甲亢、甲减、糖尿病等其他可引发外周神经病变患者;(3)存在其他自身免疫疾病;(4)妊娠或哺乳妇女;(5)患者临床资料不全或中途离院、转诊者。另选91例体检健康人员作为对照组。MG组,男23例,女68例,年龄18～75(38.14±6.85)岁;对照组,男27例,女64例,年龄19～72(37.95±7.04)岁。两组一般资料比较无统计学差异(P>0.05)。本研究经我院医学伦理委员会审核通过。

1.2方法 采集所有受试者晨起空腹静脉血4mL,以3000r/min离心15min取上清液,采用ELISA法检测其血清PD-1、TLR4、IL-23水平,试剂盒均来自于美国Thermo Fisher Science公司。比较MG患者与对照组血清PD-1、TLR4、IL-23水平差异,同时按MGFA分型[3]将患者按照病情严重程度分为Ⅰ-Ⅴ型,比较不同病情严重程度患者血清PD-1、TLR4、IL-23水平。记录患者住院期间发生危象情况:以住院期间因肌无力症状出现自主呼吸功能障碍需要进行机械通气者作为出现危象,建立ROC曲线分析血清PD-1、TLR4、IL-23水平对发生危象的诊断价值。

2 研究结果

2.1各组血清PD-1、TLR4、IL-23水平 MG组血清PD-1、TLR4、IL-23水平高于对照组,且随MG病情严重程度增加,PD-1、TLR4、IL-23水平逐渐升高(P<0.05),见表1。Spearman相关性分析显示,血清PD-1、TLR4、IL-23水平与MG患者病情严重程度呈正相关(r=0.741、0.844、0.785,P<0.001)。

表1 各组血清PD-1、TLR4、IL-23水平[n(%)]

2.2血清PD-1、TLR4、IL-23水平与发生危象关系 发生危象患者血清PD-1、TLR4、IL-23水平高于无危象患者(P<0.05),见表2。

表2 血清PD-1、TLR4、IL-23水平与发生危象关系

2.3血清PD-1、TLR4、IL-23水平对发生危象的预测价值 血清PD-1、TLR4、IL-23预测MG患者发生危象的AUC分别为0.799、0.739、0.722,三者联合检测的AUC为0.873,高于单一检测指标(P<0.05),见表3。

表3 血清PD-1、TLR4、IL-23水平对发生危象的预测价值

3 讨论

MG发病机制涉及自身抗体和细胞免疫,参与其中细胞因子众多[6-7]。既往研究多报道存在多种分子参与MG的发生发展,且能根据不同抗体表达情况将患者分为不同亚型,但目前临床上MG发病机制尚未完全阐明,且部分患者治疗效果并不十分理想[8],探究MG相关细胞因子表达情况有助于为临床治疗提供新的靶点。

本次研究显示,MG组血清PD-1、TLR4、IL-23水平高于对照组,且随MG病情严重程度增加,PD-1、TLR4、IL-23水平逐渐升高,提示MG患者存在明显PD-1、TLR4、IL-23上调,且与患者病情严重程度有关。PD-1多表达在激活的T细胞、B细胞、单核细胞等免疫细胞表面,与其配体结合后能使活化的T细胞无法及时获得足够强大的负性调控信号,引发T细胞过度活化增殖,从而对自身抗原造成持续的免疫反应和组织损伤[9-10]。Dalakas等人[11]研究发现血清PD-1表达水平与MG患者年龄存在一定相关性,且在早发型患者中表达水平低于晚发型患者,提示PD-1可能参与了MG的发生发展过程,与本次研究结果一致。TLR4是Toll样受体家族成员之一,能通过识别病原体相关分子模式而参与天然免疫。MG是与胸腺功能密切相关的自身免疫疾病,目前已经发现多种Toll样受体在MG患者体内表达上调[12]。且多项研究认为Toll样受体能激活MyD88-IRAK/TRAF6-NF-kB信号通路,诱导IL-6、IL-23等多个促炎细胞因子表达,而该通路异常被认为可能是MG发病的重要机制之一[13]。IL-23是Th17细胞分泌的促炎细胞因子,能通过核因子-kB(NF-kB)信号通路[u5]产生促炎因子和趋化因子,提示IL-23可能通过该机制参与MG的病情进展[14]。目前临床靶点为IL-23的单克隆抗体已经应用于银屑病、类风湿性关节炎等多种自身免疫疾病中,推测IL-23拮抗剂或许也能为MG治疗提供新的思路[15]。Spearman相关性分析显示,血清PD-1、TLR4、IL-23水平与MG患者病情严重程度呈正相关,验证了此三者与MG病情严重程度相关。而MG患者发生肌无力危象往往提示预后不良,本次研究中发生危象患者血清PD-1、TLR4、IL-23水平高于无危象患者,提示MG患者血清PD-1、TLR4、IL-23水平上调更能提示预后不良,这可能与此类患者病情更为严重有关。建立ROC曲线分析,发现血清PD-1、TLR4、IL-23预测MG患者发生危象的AUC分别为0.799、0.739、0.722,三者联合检测的AUC为0.873,高于单一检测指标,提示三者对MG患者预后不良均具有较好的预测价值,且三者联合检测预测效能更高,提示血清PD-1、TLR4、IL-23水平可作为预测MG预后的评估指标,监测此三者的水平变化具有重要的临床意义。

综上所述,MG患者血清PD-1、TLR4、IL-23水平明显上调,且与病情严重程度呈正相关,对预测MG预后具有一定的临床价值。本次研究尚有不足之处,首先受到医院规模限制纳入样本量较少,后续计划将纳入更多样本量进行分析,必要时可增加多中心病例来源进行进一步研究,此外,本次采用的是ELISA作为血液中指标的检测方法,后续可增加放射免疫、免疫印迹实验等多种方法进行验证以提高检测结果的准确度,具体情况有待进一步的研究和论证。