明胶颗粒凝集试验联合酶联免疫吸附试验在梅毒检测中的应用价值分析

刘博，刘志强（.天津市河西区妇幼保健计划生育服务中心检验科，天津 3000；.牙克石市绰河源镇中心卫生院检验科，内蒙古 牙克石 050）

梅毒是一种系统性、慢性的性传播疾病，主要是因感染梅毒螺旋体导致，感染后症状表现较为复杂，早期可对皮肤、黏膜等组织造成侵犯，若未及时治疗，可进一步损害心血管、中枢神经系统，致死率较高［1-2］。梅毒螺旋体病毒具有极强的感染性，使艾滋病传播风险大大增加，并且会进行母婴传播，导致先天性梅毒、自发流产发生，对人口质量造成不良影响［3］。迄今为止，临床仍缺乏能够预防梅毒传播的疫苗，且梅毒螺旋体存在一定的再感染性，需尽早明确诊断，一旦确诊后积极施治，以控制梅毒传播。目前临床诊断梅毒方法较多，以实验室检查为主要手段，其中病原体检测为常用的诊断方法，但因其对二期梅毒、潜伏期感染特异性较差，且梅毒螺旋体无法进行体外人工扩增培养，导致存在一定不足［4-5］。近些年，血清学方法成为诊断梅毒的重要方法，明胶颗粒凝集试验（TPPA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）均为常用方法，均具有操作简单、实用性强等优势，但前者特异性较高，后者灵敏度高，两种方法各有利弊，可导致结果不一致［6］。若能将TPPA、ELISA联合用于梅毒检测，或许能够提高诊断效能。本研究旨在探讨TPPA联合ELISA在梅毒检测中的应用价值。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2020年1月至12月我中心检验科进行梅毒筛查的16 000例检查者，其中男8 723例、女7 277例；年龄18～65（39.52±3.81）岁；体重40～87（68.31±6.25）kg。本研究经我院医学伦理委员会审核批准（审批号：20191201A）。纳入标准：（1）所有入选者均自愿进行梅毒筛查，进行TPPA、ELISA检测；（2）年龄≥18岁；（3）所有受检者均意识清晰，可配合临床检查；（4）自愿签署知情同意书。排除标准：（1）既往有梅毒确诊史；（2）伴有系统性免疫病变；（3）近期接受抗生素治疗；（4）伴有恶性病变或精神疾病；（5）无法进行正常交流；（6）人类免疫缺陷病毒呈阳性。

1.2 方法所有入选者均进行TPPA、ELISA检测，于入院当天采集5 ml空腹静脉血，室温静置凝固后进行离心操作，使用上海安亭科学仪器厂生产的离心机实施离心操作，型号为TDL-5-1，取上清液备用。TPPA法：分别将100、25、25、25 μL标本稀释液滴入微量反应板的第1、2、3、4孔内，并在第1孔内加入25 μl待检血清，以2倍进行稀释，直至4孔中，并将未致敏粒子25 μl与致敏粒子25 μl滴入第3、4孔，使用上海旌派仪器有限公司生产的微量振荡器混合振荡30 s，盖上盖子，在室温下放置2 h。利用上海肯强仪器有限公司生产的显微镜（CX21FS1型）观察粒子形态，判断标准：阳性：粒子形成大环，边缘杂乱；阴性：粒子聚集成圆形，为纽扣状，边缘平滑。所用试剂盒购自日本富士生物制品株式会社。ELISA法：待标本恢复至室温后，在反应孔内对应加入待测标本、阳性及阴性对照，在37℃下进行温育，时间以1 h为宜。在Bio-Rad Laboratories公司生产的1575酶标仪自动洗板机中使用相应洗涤剂反复洗板5次，并用吸收纸充分拍干反应板，将50 μl底物A、B加入每孔内，摇晃均匀，避光放置，温度以37℃为宜，时间为半小时。随后在每孔内加入终止液50 μl，混匀，使用双波长450 nm/630 nm的酶标仪读取吸光度（A）值。判断标准：阳性：A值超过临界值；阴性：A值低于临界值。两种方法任意一种检出阳性即可判定为联合检测阳性。

1.3 临床观察指标以镀银染色检测以及症状体征等综合检查结果作为金标准，分析TPPA、ELISA单项及联合诊断梅毒的临床价值。诊断效能计算公式：a为真阳性，d为真阴性，c为假阳性，b为假阴性。准确度=（a+d）/n，灵敏性=a/（a+c），特异性=d/（b+d），阳性预测值=a/（a+b），阴性预测值=d/（c+d）。

2 结果

2.1 检查结果分析16 000例受检者，经临床综合检查发现，有11例确诊为梅毒患者。

2.2 TPPA、ELISA单项及联合诊断效能TPPA、ELISA联合诊断的灵敏度100.00%（11/11）、特异度99.94%（15 980/15 989）、准确度99.94%（15 991/16 000）、阳性预测值55.00%（11/20）、阴性预测值100.00%（15 980/15 980）均高于TPPA（63.64%、99.53%、99.51%、8.54%、99.97%）、ELISA（54.55%、99.60%、99.57%、8.57%、99.97%）单独检测，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1、2。

表1 TPPA、ELISA单项及联合诊断结果（n）

3 讨论

梅毒为常见的性传播疾病，传染性较强，传播方式以性接触、血液、母婴等为主，梅毒螺旋体进入人体后，可随血液转移到身体各处，临床表现呈多样性，且较为复杂，可损伤皮肤黏膜及多个脏器，危害性较大［7］。梅毒感染早期以外生殖器部位的硬下疳为主要表现，随着病情进展可引发全身性梅毒疹或扁平湿疣，晚期时还会出现心血管、骨骼、眼睛等多个部位较为严重的病变。尽早明确诊断、及时展开针对性治疗是控制病情、改善预后的关键［8］。随着性观念越来越开放，梅毒发病率呈现出明显升高趋势，因其表现复杂，临床诊断难度较大，误诊漏诊情况频发，影响临床防治效果。

表2 TPPA、ELISA单项及联合诊断效能比较[n（%）]

目前临床诊断梅毒以血清学方法为主，甲苯胺红不加热血清反应素使用、快速血浆反应试验均为常用的检测方法，敏感性较高，且操作简便，已被广泛用于临床，但系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等非梅毒患者体内也会存在反应素，导致生物学阳性较高［9］。另外，反应素较特异性抗体出现的时间更晚，对于早期梅毒诊断准确率不理想，临床应积极寻找准确、便捷的检测方法。TPPA、ELISA均是通过测定血清中的梅毒特异性抗体而判断患者是否存在梅毒，是近些年常用的检测方法。TPPA具有操作简单、结果可靠等优势，试剂稳定性好，对仪器无特殊需求，应用价值较高［10］。但该方法试剂较贵，且检测中需要对样本进行稀释，在大样本的检测中不适用，检测结果通过肉眼观察，无法保存原始数据，仍存在一定局限性［11］。ELISA操作简便，价格低廉，结果易分辨，且可作为资料进行存储，适用于大样本筛查。但经临床广泛应用发现，ELISA检测时假阳性、假阴性较高，影响检测准确率，可能与检测时所用的抗原成分效价、纯度以及抗原种类有关，单纯使用该检查方法易出现误诊［12］。近些年，临床为提高梅毒诊断准确性，主张使用两种方法联合诊断，以弥补单一诊断方法的不足［13］。本研究结果显示，16 000例受检者，经临床综合检查发现，有11例确诊为梅毒患者。TPPA、ELISA联合诊断的灵敏度100.00%（11/11）、特异度99.94%（15 980/15 989）、准确度99.94%（15 991/16 000）、阳性预测值55.00%（11/20）、阴性预测值100.00%（15 980/15 980）均高于TPPA、ELISA单独检测。表明梅毒筛查中使用TPPA、ELISA联合检测可提高诊断效能，弥补单一检测存在的不足，为临床诊断提供更多参考依据，临床应用价值较高。颜晓林［14]等研究显示，与单纯ELISA检查相比，ELISA联合TPPA筛查梅毒的诊断效能均更高。ELISA法适用于大批量梅毒筛查中，TPPA法的特异性及敏感性高，可作为确认试验，联合使用可提高梅毒诊断准确率、灵敏度、特异度，与本研究结果存在相似之处，进一步佐证联合诊断的应用价值。通过本次研究发现，ELISA法操作及检测均为自动化，其结果受影响因素较少，相对更加客观，是筛查大批量标本的首选方法。TPPA法可测定梅毒螺旋体抗体效价，其结果不受生物因素影响，特异度较好，其应用价值已受到临床认可，但结果评判的主观性较高，无法实现自动化评价，价格也相对较高，限制其大规模使用。TPPA、ELISA两者之间存在一定相关性，且各有利弊，临床可结合样本数量、检测目的等多方面合理选择检测方法，必要时可将两种方法联合使用，起到相互补充的作用，以提高诊断准确率，降低漏诊、误诊发生［15］。

综上所述，梅毒筛查中使用TPPA、ELISA联合检测可提高诊断效能，弥补单一检测存在的不足，为临床诊断提供更多参考依据，具有较高的应用价值。