血管内皮生长因子和p53基因在非小细胞肺癌组织中的表达及其与肿瘤血管形成的相关性

董 雷

(佳木斯市中心医院胸外科，黑龙江 佳木斯 154002)

非小细胞肺癌是支气管黏膜上皮或肺泡上皮的恶性肿瘤，多数患者年龄在65岁以上，但近年发病有年轻化倾向[1]。并且该病早期往往无任何症状，不易被诊断和发现，诊断时往往处于晚期，出现转移，增加治疗难度，且预后较差[2]。故早诊断、及时治疗非小细胞肺癌成为新的研究热点。血管内皮生长因子(VEGF)直接参与诱导肿瘤血管形成，成为诊断肿瘤的重要因子；肿瘤形成与p53基因的失活密切相关[3]。同时肿瘤血管是实体肿瘤生长、侵袭和转移的基础，肿瘤血管的密度(MVD)反映肿瘤的浸润和转移能力[4]。故研究VEGF和p53与MVD直接的相关性具有重要的临床意义。本文研究VEGF和p53在非小细胞肺癌组织中的表达，并分析其与肿瘤血管形成的相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料：选择2019年1月～2021年1月收治的42例非小细胞肺癌患者为研究对象，其中男26例，女16例；年龄47～70岁，平均(56.85±9.22)岁；肿瘤直径1.3～3.0 cm,平均(2.10±0.52)cm；鳞癌14例，腺癌28例；TNM分期：Ⅲ期31例、Ⅵ期11例；分化程度：高、中、低分别为10例、18例、14例。纳入标准：①经病理诊断确诊为非小细胞肺癌患者；②年龄45～70岁者；③生存期在6个月以上者；④知情本次研究者。排除标准：①伴有心脑血管疾病，肝肾功能不全者；②不能与医护人员正常沟通者；③TNM分期不明确者。本次研究经过本院医学伦理委员会同意。

1.2方法

1.2.1试剂及药品：VEGF鼠抗人单克隆抗体(批号190103)在福州迈新生物技术公司购买；p53单克隆抗体(批号181221)在上海超研生物科技有限公司购买。二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒及SP试剂盒均购于福州迈新生物技术。

1.2.2方法：VEGF和p53表达：用10%甲醛固定非小细胞肺癌、癌旁肺组织标本，用石蜡包埋，切薄片(厚度=4 μm)，用免疫组织化学SP染色。以实验室自制PBS代替一抗作阴性对照，用DAB显色。用已知VEGF和p53的阳性组织切片为阳性对照。

1.3VEGF和p53的判定：①VEGF表达的阳性判定标准：染色细胞膜或细胞质出现棕黄色颗粒判定为阳性细胞，其中400倍镜下阳性细胞数在25%以下判定为阴性，反之为阳性。p53表达的阳性判定标准：细胞核染色为棕黄色为阳性细胞、蓝色为阴性细胞，其中400倍镜下阳性细胞数在1%以下判定为阴性，反之为阳性。②临床病理主要参数：统计患者年龄、性别、组织学类型、TNM分期、分化程度、肿瘤直径。③微血管的判断：利用MVD计数法判定肿瘤血管形成程度。标本在低倍镜下选择3个微血管区域，然后在200倍镜下记下被CD34染成棕色的微血管数目，取平均值为MVD。

1.4统计学方法：运用SPSS22.0对数据进行分析，计量资料和计数资料比较分别采用t检验、方差分析和χ2检验，Spearman秩相关检验分析相关性，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1肺癌和癌旁组织标本VEGF和p53表达情况及MVD计数比较：相比癌旁组织标本，肺癌组织标本中VEGF和p53阳性表达率、MVD计数明显更高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 肺癌和癌旁组织VEGF和p53表达情况及MVD计数比较[n(%)，n=42]

2.2非小细胞肺癌组织中VEGF和p53表达、MVD计数与临床病理主要参数的关系分析：非小细胞肺癌组织中VEGF和p53表达、MVD计数与TNM分期、分化程度、肿瘤直径密切相关(P<0.05)。见表2。

表2 非小细胞肺癌组织中VEGF和p53表达、MVD计数与临床病理主要参数的关系分析[n(%)]

2.3非小细胞肺癌组织中VEGF和p53表达与MVD计数的相关性分析：经Spearman秩相关检验分析发现，非小细胞肺癌组织中VEGF和p53表达与MVD计数呈正相关性(r=0.793、0.856，P=0.017、0.008)。

3 讨论

肺癌是癌症死亡的主要原因，其中85%为非小细胞肺癌[5]。并且非小细胞肺癌化疗有效率较低，死亡率较高。早期诊断并及时进行手术治疗是最有效的治疗方式[6]。但是非小细胞肺癌发病过程较复杂，到目前为止其发病原因、早期诊断标志物、改善患者预后的标志尚不清楚。同时大量研究表明[7-8]，肿瘤的发展和转移与血管新生密切相关，且VEGF具有促进血管通透性、促进内皮细胞的增殖等重要的生物学功能；p53是肿瘤抑制基因，与DNA变异程度相关，当DNA变异较小时，p53促进细胞修复；反之会诱导细胞凋亡。

另外，MVD是一个反映恶性肿瘤生物学行为的重要参数，与恶性肿瘤的发生、转移及预后密切相关[9]。本研究结果发现，相比癌旁组织标本，肺癌组织标本中VEGF和p53阳性表达率、MVD计数明显更高。分析原因，非小细胞肺癌过度增殖，反馈性诱导p53蛋白的释放，加速血管生长，使得VEGF阳性表达率明显更高；并且VEGF能够通过与血管内皮上的相应受体结合，促进内皮细胞增殖，促进肿瘤血管生长；另外，VEGF可增加血管通透性，使内皮细胞迁移，诱导肿瘤血管生成，维持肿瘤的继续生长，对肿瘤转移具有促进作用，进而增加MVD计数。同时本研究进一步说明非小细胞肺癌发生、生长、转移与VEGF和p53阳性表达、MVD计数增加密切相关。

p53能够下调抑制血管增生的凝血栓蛋白，上调VEGF水平，促进肿瘤生长，进而促进肿瘤血管生长，使得MVD计数明显更高。故经Spearman秩相关检验分析发现，非小细胞肺癌组织中VEGF和p53表达与MVD计数呈正相关性。与吴开松等研究[10]的在非小细胞肺癌血管生成过程中，p53、VEGF 在调控肿瘤血管形成方面起重要作用相一致。

综上所述，在非小细胞肺癌组织中VEGF和p53阳性表达率较高，与肿瘤血管形成密切相关。