注射前列腺素对甘肃高山美利奴细毛羊超数排卵效果的影响

2022-11-17马文奎王建魁李广栋孙光泽肖西山刘建斌邓学梅阿布力孜吾斯曼刘国世

中国畜牧杂志 2022年11期

马文奎，王建魁，李广栋，吴昊，孙光泽，高爽，李瑞，肖西山，刘建斌，邓学梅，阿布力孜·吾斯曼，刘国世*

（1.新疆农业大学动物科学学院，新疆乌鲁木齐 830052；2.中国农业大学动物科学技术学院，北京 100193；3.内蒙古草原金峰畜牧有限公司，内蒙古赤峰 024000；4.北京农业职业学院畜牧兽医系，北京 102400；5.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，甘肃兰州 730050）

胚胎移植技术可充分发挥优良母畜在家畜品种改良和种群扩繁中的潜力[1]，还可使优质种畜基因稳定遗传下去，有效缩短世代间隔[2-5]，是普遍使用的快速扩繁手段[6]。前列腺素在调节母畜发情、超数排卵、人工流产等羊业生产环节中起着至关重要的作用[7-8]。当前技术人员不能借助现有的B 超仪器将30 d 以内的胎儿检测出来，因此对甘肃高山美利奴细毛羊埋栓前进行前列腺素处理，不但可以起到人工流产的作用，而且可以治疗繁育障碍，还能提高同期发情和胚胎移植效率。但在胚胎移植中采集到的胚胎质量会影响胚胎移植的整体效果[9]，因此在手术冲胚后对收集到的胚胎进行统计、分析和鉴定获得的高质量胚胎能显著提高胚胎移植效率。本实验旨在探究甘肃高山美利奴细毛羊在CIDR 埋栓前14 d 注射前列腺素是否会提高排卵效率，以期为提高羊良种繁育效率提供参考。

1 材料和方法

1.1 实验动物选用内蒙古赤峰市草原金峰畜牧有限公司12 只甘肃高山美利奴细毛羊作为供体，体重在45～76 kg，年龄2～3 岁,体况良好，无繁殖疾病。选用膘情良好，无繁殖疾病的2～3 岁乌珠穆沁羊做受体，供受体胎次均为3～5 胎。采精公羊性欲旺盛，精液品质检查优良，精子活力0.6 以上。

1.2 实验药品与试剂促卵泡素（Follicle-Stimulating Hormone，FSH）、促黄体素（Luteinizing hormone，LH）、孕马血清促性腺激素（Pregnant Mare Serum Gonadotropin，PMSG）、氯前列醇钠注射液（Prostagla ndin，PG）均由宁波三生生物科技有限公司生产；阴道栓CIDR：购买新西兰产EAZI-BREED-CIDR，20 个/袋；Holding 培养液：新西兰生产，50 mL/袋；75%酒精、碘伏、高浓度新洁尔灭、磺胺、维生素AD、林可霉素、生理盐水等为国产。

1.3 设备和器械采精设备（假阴道）、精液品质检测显微镜、内窥镜输精设备、手术架、冲卵管、恒温板、体视镜（检胚）、手术刀柄、直剪、止血钳、子宫钳、创巾钳等。

1.4 供体羊超数排卵将试验羊分成试验组和对照组，均采用CIDR+FSH+PMSG 法。试验羊肌肉注射前列腺素1 mL（剂量0.2mg），注射后第14 天埋置CIDR 栓，同时肌肉注射3～5 mL 维生素AD。埋栓后第10 天开始注射FSH，根据体重和手术次数调控剂量，总剂量区间为300～500 IU/ 只，4 d 8 针注射法依次递减，第13 天注射最后1 针（第7 针）FSH 时同时取出CIDR 栓，取栓后12 h 注射PMSG，剂量330～450 IU/只。

1.5 供体羊配种供体羊在取栓后48～54 h 进行内窥镜人工输精。提前组装好内窥镜输精设备。将无传染性疾病，性欲旺盛的供体公羊生殖器部位用卫生纸擦拭干净，找1 只发情母羊，利用假阴道采集精液。供体母羊仰卧保定，备好表皮，在距离乳房下侧6～8 cm 处进行微创打孔，一般左右两侧对称。最后左手持内窥镜进入羊腹腔找到子宫角，右手利用输精枪将公羊精液输入即可，子宫左右侧各输精0.2 mL。

1.6 胚胎收集和质量检测内窥镜输精后第5～6 天手术法从子宫角冲胚，回收胚胎。在40 倍体视显微镜下捡出胚胎，剔除未受精卵，观察受精卵状态、色泽、大小、数量、饱满度以及发育期和发育阶段。

1.7 受体羊的处理和腹腔镜胚胎移植采用CIDR+PMSG法处理，与供体同步埋栓，且同时撤栓，撤栓时肌肉注射PMSG，剂量330～450 IU/只,撤栓后24～36 h 试情，记录发情时间。供体在5～6 d 进行冲胚，受体通过腹部微创手术法进行移植，采用腹腔镜观察子宫两侧，单侧发现1～3个黄体则可进行移植，术后注射抗生素进行消炎。

1.8 供受体羊术后管理供受体羊术后分栏喂养，保持足够饮水和饲料，圈舍内保持干燥整洁，防止术后感染，观察1～2 d，在胚胎移植后45 d 进行妊娠检查。

1.9 统计分析数据先用Excel 归类汇总，使用SPSS 26.0 统计软件进行单因素方差分析，结果如未特殊说明，均使用平均值±标准误进行表示，以P＜0.05 作为差异显著性判断标准。

2 结果与分析

2.1 注射前列腺素对甘肃高山美利奴细毛羊发情率和黄体数的影响由表1 可知，注射前列腺素对发情率、平均黄体数、平均左侧黄体数、平均右侧黄体数没有显著影响。试验组的发情率为100%，对照组为83.33%；试验组的平均黄体数为18.50 枚，对照组为14.66 枚；试验组的平均左侧黄体数为9.17 枚，对照组为7.33 枚；试验组平均右侧黄体数为7.67 枚，对照组为7.33 枚。

表1 注射前列腺素对甘肃高山美利奴细毛羊发情率和黄体数的影响

2.2 注射前列腺素对甘肃高山美利奴细毛羊回收胚胎数和可用胚胎数的影响由表2 可知，试验组的平均回收胚胎数、平均可用胚胎数以及胚胎回收率均高于对照组（P＜0.05）。注射前列腺素有利于胚胎移植中获得平均回收胚胎数、平均可用胚胎数和提高胚胎回收率。

表2 注射前列腺素对甘肃高山美利奴细毛羊回收胚胎数和回收胚胎率的影响

2.3 注射前列腺素对甘肃高山美利奴细毛羊受精率和胚胎质量的影响由表3 可知，试验组的受精率为91.18%，对照组为89.36%（P＞0.05）；试验组的平均桑椹胚数为5.33 枚，对照组为3.83 枚（P＞0.05），试验组的平均囊胚数高于对照组（P＜0.05）。注射前列腺素有利于提高胚胎移植中获得的囊胚数。

表3 注射前列腺素对甘肃高山美利奴细毛羊受精率和胚胎质量的影响

2.4 注射前列腺素对甘肃高山美利奴细毛羊受胎率的影响由表4 可知，妊娠率试验组85.06%，对照组81.58%（P＞0.05）。

表4 注射前列腺素对甘肃高山美利奴细毛羊受胎率的影响

3 讨论

3.1 同期发情效果分析同期发情技术可以追溯到20世纪50 年代，最初以孕激素和前列腺素联合使用为主。随着养殖业的发展，不同激素联合使用显著提高同期发情效果，因此研究制定同期发情方案成为了动物繁殖领域的焦点问题[10-11]。研究表明前列腺素在家畜同期发情过程中具有重要作用[12-13]，应用PMSG 结合前列腺素可以提高母牛同期发情效率[14]。胡雄贵等[15]证实使用前列腺素会提高母牛的发情率。邓缘等[16]使用PG+PMSG 法对54 只湘东黑山羊在2～5 d 内集中发情和配种，同期处理的发情率87.0%（47/54）显著提高。李芳芳等[17]对努比亚山羊同期发情中使用CIDR+PMSG+PG、CIDR+FSH+PG、PIDR+PMSG+PG3种同期方案，发情率分别为100%、100%、91.67%。邓缘等[16]在同期发情方案中，先注射前列腺素进行溶解黄体，使母羊处于同一发情生理阶段。李芳芳等[17]在同期发情方案中最后注射前列腺素，促进卵泡发育和排卵效果。在本研究中，埋植CIDR 栓前14d 注射前列腺素，溶解绵羊卵巢黄体，和邓缘等方案有类似功能，同期发情排卵数和卵母细胞质量显著提高。

3.2 超数排卵效果分析超数排卵技术是胚胎移植中的关键环节[18]。董志岷等[19]用CIDR+FSH+PMSG+PG对38 只杜泊羊进行超数排卵，平均冲胚7.52 枚，结果显示，注射PMSG 增加了内源促黄体素含量，促进了卵泡成熟和排卵后颗粒细胞黄体化，提高了超数排卵效果。本实验采用PG+CIDR+FSH+PMSG 进行，平均冲胚15.50 枚与上述不同，可能与供体年龄、输精方式等有关。本实验通过对高山美利奴羊进行超排处理，最终平均胚胎回收率为92.00%。冯新宇等[20]在超排时将 6针递减法（12.5 mL Folltropin-V）作为对照组；6 针递减法（10 mL Folltropin-V）为试验 I 组；采用 8 针递减法（12.5 mL Folltropin-V）为试验 II 组；不改变剂量和给药方式，仅将畜舍内温度降至零下18℃ 时为试验 III 组，结果表明，对照组、实验I 组、II 组、III 组胚胎回收率分别为93.12%、65.13%、73.83%、82.77 %。高峰等[21]采用二次前列腺素（PG）法、阴道栓（CIDR）+PG 法和CIDR+PMSG+PG 法对6 组湖羊进行同期发情试验，结果表明3 种方法中 CIDR+PMSG+PG 法同期发情效果较理想。冯新宇与高峰等在超数排卵中使用不同FSH 注射剂量、给药方式、环境温度、超排方案等[20-21]。本试验与冯新宇和高峰试验方案不同，取得的结果有所不同，可能是与品种、试验方法等不同导致。在本研究中，CIDR 埋栓前14 天进行注射前列腺素，发情率和高峰（93.2%）[22]的研究结果一致，胚胎回收率高于冯新宇[20]及高峰等[22]（55.60%）。