C-C 基序趋化因子样受体2、胰岛素样生长因子2在前列腺癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系

罗斌，王博，陈立华，周恒毅

洛阳市第一人民医院泌尿外科，河南 洛阳 471000

前列腺癌是发生在前列腺的上皮性恶性肿瘤，临床主要表现为腰痛、尿急、尿频、尿痛、排尿困难等症状。据统计，前列腺癌已成为影响男性生命健康的恶性肿瘤之一，且该病的发病率随着患者年龄增长而逐渐上升。近年来前列腺癌发病率和病死率均逐年上升[1]。临床主要采用前列腺癌根治术或放疗治疗前列腺癌，疗效较佳，早期前列腺癌可得到治愈，但晚期前列腺癌无法治愈，多以保守治疗为主，以延长患者的生存期，改善生活质量[2]。早期前列腺癌进展缓慢，但早期不易发现导致无法及时治疗，确诊时多已进展至晚期，失去了最佳的治疗时机。因此，临床亟需找到一种有效的诊断前列腺癌的方法[3]。本研究探讨C-C基序趋化因子样受体2（C-C motif chemokine receptor like 2，CCRL2）、胰岛素样生长因子2（insulin like growth factor 2，IGF2）在前列腺癌中的表达及与患者临床特征及预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年3月至2020年6月洛阳市第一人民医院收治的前列腺癌患者。纳入标准：①符合《中国前列腺癌早期诊断专家共识》[4]中前列腺癌的诊断标准，经病理学检查确诊；②临床资料完整；③既往均未接受过内分泌治疗或放疗。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②合并精神障碍，无法配合研究；③合并严重自身免疫性疾病及心功能不全。依据纳入和排除标准，本研究共纳入101例前列腺癌患者，年龄53～83岁，平均（67.51±8.41）；Gleason评分评估分化程度：中高分化43例，低分化58例；Whitmore-Jewett法进行临床分期：A～B期66例，C～D期35例。本研究经医院伦理委员会批准通过，所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 免疫组化法检测CCRL2、IGF2的表达情况

取101例前列腺癌患者的前列腺癌组织及距肿瘤组织3 cm处的癌旁组织，石蜡包埋和切片处理待检，检测前于65℃火中放置标本焙烧60 min，使用二甲苯、乙醇进行脱蜡、脱水处理后，将标本浸泡于3%过氧化氢中20 min，封闭其内源性过氧化物酶活性。高压枸橼酸盐抗原修复，温水清洗后使用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）清洗3次，每次5 min，同时在其中滴加10%血清以阻断非特异性结合，37℃孵育箱10 min。添加一抗羊抗人IGF2多克隆抗体、一抗兔抗人CCRL2多克隆抗体（稀释浓度为1∶100），4℃孵育过夜，PBS再次清洗，滴加生物素二抗兔抗羊免疫球蛋白G及兔抗人CCRL2多克隆抗体，37℃孵育10 min，PBS清洗3次后，滴加过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液孵育10 min，使用二氨基联苯胺进行荧光显色，苏木素复染，脱水、干燥后使用中性树脂封片，用PBS代替一抗作为阴性对照。

结果判定：观察细胞的染色情况，细胞质出现棕黄色或棕褐色，或其他染色明显强于背景色为阳性细胞，选取5个不同视野进行全面观察，每个视野中细胞应不低于200个，观察完成后计算每个视野中阳性细胞所占比例。阳性细胞所占比例﹤5%为阴性，阳性细胞所占比例为5%～50%为弱阳性，阳性细胞所占比例﹥50%为强阳性，其中弱阳性、强阳性均判定为阳性。

1.3 随访

采用门诊复查、微信或电话的方法对所有患者进行为期1年的随访，随访时间截至2021年6月，记录患者的复发情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件对所有数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；前列腺癌患者预后复发的影响因素采用多元Logistic回归分析；以P﹤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CCRL2、IGF2表达情况的比较

前列腺癌组织中CCRL2、IGF2的阳性表达率均明显高于癌旁组织，差异均有统计学意义（P﹤0.01）。（表1）

表1 前列腺癌组织和癌旁组织中CCRL2、IGF2表达情况的比较[n（%）]

2.2 不同临床特征前列腺癌患者前列腺癌组织中CCRL2、IGF2表达情况的比较

不同年龄前列腺癌患者前列腺癌组织中CCRL2、IGF2阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P﹥0.05）；分化程度为低分化、临床分期为C～D期、远处转移前列腺癌患者前列腺癌组织中CCRL2、IGF2阳性表达率分别高于分化程度为中高分化、临床分期为A～B期、无远处转移患者，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。（表2）

表2 不同临床特征前列腺癌患者前列腺癌组织中CCRL2、IGF2表达情况的比较（n=101）

2.3 前列腺癌患者预后复发的影响因素分析

单因素分析结果显示，年龄可能与前列腺癌患者的复发情况无关（P﹥0.05）；分化程度、临床分期、远处转移情况、CCRL2表达情况和IGF2表达情况均可能与前列腺癌患者的复发情况有关（P﹤0.05）。多因素Logistic回归模型分析结果显示，分化程度为低分化、临床分期为C～D期、远处转移、CCRL2阳性表达和IGF2阳性表达均为前列腺癌患者预后复发的独立危险因素（P﹤0.01）。（表3）

表3 前列腺癌患者预后复发影响因素的单因素和多因素分析

3 讨论

前列腺癌患者早期无明显症状，确诊时多已进展至晚期且发生了远处转移，临床治疗难度较大，患者预后不良[5-8]。因此，寻找与前列腺癌发生发展有关的治疗靶点对早期前列腺癌的治疗有积极意义[9-11]。

本研究结果显示，前列腺癌组织中CCRL2、IGF2的阳性表达率均明显高于癌旁组织，分化程度为低分化、临床分期为C～D期、远处转移前列腺癌患者前列腺癌组织中CCRL2、IGF2的阳性表达率分别高于分化程度为中高分化、临床分期为A～B期、无远处转移患者，与既往研究结果相似[12-13]。表明CCRL2和IGF2参与了前列腺癌的发生发展及侵袭过程，表明CCRL2和IGF2的表达与患者临床特征有关。这是因为IGF是一种多肽类蛋白质，具有胰岛素样作用和促进生长等重要的生理作用，由肝脏、肾等器官或组织合成，存在于激素依赖的器官中。IGF2属于IGF家族成员，同样具有促胚胎细胞生长的作用，可促进细胞分裂形成胚胎，在生理条件下对胚胎的正常生长发育有重要作用。同时，IGF2作为自分泌生长因子，在病理条件下的过表达可促进细胞恶性增殖和转化。有研究表明，IGF2在前列腺癌细胞中过表达[14]。有研究显示，多种趋化因子诱饵受体[如Duffy抗原趋化因子受体（Dufffy antigen receptor for chemokine，DARC）、D6和ChemoCentryx趋化因子受体（ChemoCentryx chemokine receptor，CCX-CKR）]均可在前列腺癌细胞中表达，并在肿瘤细胞生长和转移中发挥重要作用[15]。CCRL2的结构与其他诱饵受体相似，因此其具有中断配体受体结合后信号转导的作用。CCRL2的配体包括CCL2（MCP-1）和CCL5（RANTES）等，在肿瘤新生血管生成、肿瘤细胞远处转移方面发挥重要作用。CCRL2是一种跨膜G蛋白偶联受体，具有将树突状细胞运输到外周淋巴结的关键作用，并广泛分布于许多组织和器官中，在肿瘤发生发展中发挥重要作用。研究表明，CCRL2阳性表达明显促进了肿瘤的复发和侵袭，同时，分化程度为低分化、临床分期为C～D期、远处转移、CCRL2阳性表达和IGF2阳性表达均为前列腺癌患者预后复发的独立危险因素。

综上所述，CCRL2、IGF2在前列腺癌组织中阳性表达率较高，且分化程度为低分化、临床分期为C～D期、远处转移、CCRL2阳性表达和IGF2阳性表达均为前列腺癌患者预后复发的独立危险因素。