家畜口蹄疫的免疫抗体检测方法

张 梦

贵州省黔西南州兴仁市农业农村局，贵州黔西南 562300

口蹄疫主要发生于偶蹄动物，因此家畜的发病概率较高，给养殖户带来较大的经济损失。目前该病主要发生在寒冷的冬季和初春，死亡率比较高，已经被世界卫生组织认定为烈性动物传染病。目前主要采用疫苗免疫来进行该病的防控，借助于免疫抗体检测能够更准确的掌握家畜的免疫效果，以便可以及时查漏补缺，降低口蹄疫对家畜的影响，保障养殖户的经济效益不受损害。

1 口蹄疫以及免疫抗体检测概述

口蹄疫是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄动物共患的急性、热性、接触性传染病，在家畜养殖中，口蹄疫的发生以牛为首（外来种奶牛、黄牛、牦牛皆极易感染，水牛稍次），其次为猪，再次为绵羊、山羊和骆驼。其中犊牛和仔猪不但易感且死亡率也较高，而且口蹄疫的毒力强弱也会受到季节、气温、地理环境、自然条件等因素的影响，差异比较明显，就当前的兽医临床实践来看，在口蹄疫流行的情况下，牛群的发病率为90%～100%，病毒通过猪3代后发病率高达50%～100%，而羊群发病率较低，为20%～50%，同样症状也会比较轻。

在口蹄疫防控中所采取的主要手段就是疫苗免疫，已经研发成功的口蹄疫疫苗种类主要包括常规灭活疫苗、基因工程疫苗、DNA 疫苗、合成肽疫苗、重组活载体疫苗、可饲疫苗等，其中灭活疫苗是我国重要采取的免疫措施，而我国实行的是强制免疫，每年都需要投入大量的人力、物力、财力等进行免疫工作。但实际上，由于口蹄疫病毒的免疫原性比较弱，再加上受到其他多种因素的影响，因此，临床中免疫效果不理想甚至免疫失败的现象屡见不鲜。而免疫抗体检测能够充分掌握动物机体内的抗体水平，从而更好的评估免疫工作的效果，对基层工作部门来说也能够及时掌握免疫注射工作的成效，衡量区域内的疫情风险水平等，从而做好该病的预防工作，降低口蹄疫对家畜养殖产业的负面影响，为养殖户的经济效益获得提供坚实的保障[1]。

2 家畜口蹄疫的免疫抗体检测方法

2.1 中和抗体

当病原微生物入侵机体中的细胞时，病原体自身表达的特定分子首先会与细胞上的受体结合，以此起到感染细胞的作用，并且还能够在细胞中进一步进行扩增，B 淋巴细胞会产生中和抗体，这样在病原微生物侵入机体时就能够及时产生相应的抗体来改变病毒表面构型，从而阻止病毒吸附于易感细胞，以此可以有效的组织病毒进入到健康的细胞中。同时巨噬细胞还能够吞噬并清除病毒与中和抗体形成的免疫复合物，如果是有包膜的病毒表面抗原与中和抗体结合后也会激活补体，最终会使得病毒溶解。采用病毒中和试验来进行免疫抗体检测也是世界动物卫生组织所推荐的标准防范，但是该实验中所使用的病毒必须是具有感染性的活病毒。

2.2 结构蛋白抗体

动物机体的免疫系统会识别进入机体的异己蛋白质，并会产生相应的抗体，从而阻断病原微生物，通过注射灭活疫苗主要就是通过改造已经没有了病毒的毒性，但实际上并非所有的结构抗体都有抗病毒的作用。以此为基础可以采用以下几种方式进行免疫抗疫检测。

2.2.1 液相阻断ELISA 抗体检测试验（国际贸易指定法）

口蹄疫液相阻断ELISA 抗体检测技术具有良好的敏感性、快速诊断性和可重复性,与攻毒保护有很好的相关性,现被广泛应用于口蹄疫免疫抗体水平的检测过程中，其在实际应用中还展现出安全性高、适用范围广等优势，能够摆脱对细胞培养和实验动物的依赖，因此普通的应用实验室就可以进行该实验。其在实际应用中主要有两个作用：一是可以检测口蹄疫非免疫动物特异性抗体；二是可以监测免疫抗体，评价口蹄疫疫苗的免疫效力，从而为免疫工作的开展提供科学的依据[2]。

2.2.2 正向间接血凝试验

正向间接血凝试验简单易行，适合基层单位应用。在实际应用中，抗原与其对应的抗体相遇且会在一定的条件下形成抗原抗体复合物，其分子团很小，肉眼看不见，然后需要将抗原吸附(致敏)在红血球表面，再与抗体结合，这时候可以发现红血球出现凝集现象，其灵敏度比较高，用于检测动物血清中的口蹄疫抗体水平有着较高的准确度。

2.2.3 VP1 结构蛋白抗体检测试验

当口蹄疫合成肽疫苗免疫后进行抗体检测时可采用VP1 结构蛋白抗体检测试验，其具有高效、特异、快捷及强悍的生物安全性等优点，但其在实际应用中与液相阻断ELISA 抗体检测结果存在差异。

3 家畜口蹄疫的免疫抗体检测流程

3.1 材料与方法

3.1.1 样品来源

检测血清主要来源于已经成功注射牛羊o 型-亚洲I 型口蹄疫双价灭活疫苗的牛血液样品与羊血液样品，在21 d 左右的时间进行血样提取，然后在实验中需要随机抽取检测血清，其中牛羊血清各抽取100 份。进行血清分离，并将其置于4 ℃左右的冰箱保存。注意严格分类存放，避免样品受到污染。

3.1.2 诊断试剂

选用诊断试剂为同一生产批号的口蹄疫O 型正向血凝抗原、阳性血清、阴性血清、稀释液以及O型口蹄疫液相阻断ELISA 检测试剂盒。

3.1.3 检测方法及结果判定

进行正向间接血凝试验，选取羊的血清，将抗原(或抗体)包被于红细胞表面，成为致敏的载体，然后与相应的抗体(或抗原)结合，从而使红细胞拉聚在一起，这时候会出现可见的凝集反应，如果抗体的效价高于1:32，即可视抗体为合格；按照O型口蹄疫液相阻断试验进行操作，如果被检血清的OD 值高出临界值，那么为阴性孔，如果低于临界值，就为阳性孔，需要注意的是，阳性孔的最高稀释度就是血清的抗体效价，如果高于1:64，可以认为抗体合格[3]。

3.2 结果

通过正向间接血凝检测，发现抽取的牛羊样本中，口蹄疫的免疫合格率分别为88%和86%，也就是说在所抽取的100 头牛和100 只羊中，分别有88 头和86 只羊的抗体检测是合格的。

3.3 分析

通过采用正向间接血凝检测以及液体阻断检测方法可以发现，此次检测结果基本相符，试验结果科学、可靠。

4 家畜口蹄疫的预防建议

口蹄疫对家畜危害较大，养殖户在养殖期间也需要加强预防工作，提高对口蹄疫的认识，降低该病的影响。一是要加强饲养管理工作，在养殖期间要为家畜营造一个良好的生长环境，制定科学的卫生消毒制度，保持干净的卫生，在寒冷的季节尤其要做好保温工作；二是要严格按照家畜的生长阶段提供营养充分且均衡的饲料，提高其自身的疫病抵抗能力；三是要重视疫苗免疫，养殖户应该结合养殖场的实际制定科学的免疫程序，在实际工作中，需要在每年夏秋对猪、牛、羊等家畜进行疫苗免疫，针对外来引种的家畜或者是流动的家畜也需要进行强制性的免疫工作，接种期间还需要做好疫苗过敏反应的处理，从而提高疫苗免疫效果。目前在免疫环节中，由于防疫员因文化、年龄等各方面的差异，或者是设备等方面的问题经常会导致免疫工作达不到预期效果，因此还需要村级动物防疫员充分发挥作用，按照免疫要求及时申报资金，以便进行免疫注射器械和疫苗冷藏设备的更新等。在防疫结束后组织人员对各乡镇进行防疫检测，保证免疫效果，为养殖户的健康养殖提供保障；四是要加强巡视工作，一旦发生疫情要及时上报，病死家畜要及时进行无害化处理，并使用2%火碱，或10%石灰水，或30%热草木灰水对被病畜污染的用具、场所等进行全面彻底的消毒；五是要加强药物预防，比如可以使用一些中草药进行该病的预防，使用筋骨草、蒲公英、黄花稔、一点红各120 g，加水煎煮够灌服给家畜即可取得较好的预防效果[4]。

5 结语

综上所述，口蹄疫的死亡率较高，一旦形成大规模的流行会给养殖户造成严重的经济损失，而且其作为一种人畜共患病，对人的健康也有较大的危害，为了保障免疫预防的效果，必须要重视起口蹄疫的免疫抗体检测工作，严格按照相关要求选择合适的检测方法，形成对免疫工作的全面监测，保证免疫效果，从而为养殖户的养殖工作提供保障。