鸡关节炎病的辨别诊断技术

张春燕，冯金玲，徐美玉，赵 烨

1.鹤岗市动物疫病预防控制中心，黑龙江鹤岗 154106；2.中国农业大学畜禽疫病诊断研究中心，北京 100193；3.中国农业大学动物医学院，北京 100193

1 主要致病因素及症状

鸡关节性疾病的致病因素很多，临床时做好致病因素诊断，分清疾病类型难度较大。随着动物营养研究的深入，饲料科技的创新发展，饲料配方配比较以往更科学合理，因B 族维生素、锰等营养元素缺乏和不均衡导致的营养性关节炎在临床已较为少见。目前，鸡关节性疾病的主要病因是感染性因素，病原体主要有葡萄球菌、大肠杆菌、呼肠孤病毒、支原体等[1]。鸡关节性疾病主要的临床症状为病鸡食欲不振，精神萎靡，单或双侧关节跛行，跗、趾等部位关节肿胀，严重时不能站立，呈蹲伏姿势。剖检时可见肿胀的关节腔内有黄色浆状的渗出物。

1.1 细菌性疾病

1.1.1 大肠杆菌型关节炎

大肠杆菌型关节炎是由禽致病性大肠杆菌（APEC）引发的一种条件性细菌病。内脏器官的组织一般不会出现较为明显的生理病变，只会在关节部位发生一定的病变，一般表现为两侧跗关节明显肿胀、发热，内有黄色积液，滑膜囊内有淡红色或灰白色干酪样状的渗出物。大肠杆菌型病一般在临床还会出现脐炎、腹膜炎、气囊炎、输卵管炎、肉芽肿、眼炎等其他多种症状[2]。

1.1.2 葡萄球菌型关节炎

对家禽有致病性的葡萄球菌仅有金黄色葡萄球菌（SA）一种，SA 可感染各种禽类，主要的感染途径为创伤、接触及空气传播。SA 感染在我国家禽中最为常见，可引起化脓性关节炎、禽类腱鞘炎、败血症、脚垫肿、脐炎、眼炎等多种疾病[3]，在40 ～60 d 的雏鸡中最为常见。患鸡多为一侧关节肿大，有热痛感，局部呈紫红色，甚至黑紫色，破溃以后会形成黑色的结痂或趾瘤。

APEC 和SA 广泛存在于自然界及鸡的体表、肠道和粪便中，能引起多种疾病，其症状及病变表现具有多样性。APEC 会显著的降低鸡的孵化率，雏鸡原发性感染的死亡率极高，中大鸡原发感染较少，多为因继发感染或混合感染[4]。临床上APEC 和SA多发生于饲养环境较差的鸡舍，混合感染现象也较常见。

1.2 病毒性关节炎

病毒性关节炎是因感染禽呼肠孤病毒（ARV）引发的一种传染病，蛋鸡、肉鸡均可感染，患鸡跗关节上方腱囊会出现双侧性的肿胀，发热。切开可见关节上方腓肠肌腱呈明显水肿，骨干增生，跗骨胫骨与股骨关节损伤等，滑膜内会有充血或点状的出血，关节腔内有渗出物，常发生腓肠肌腱的断裂。有时可见脾脏出现白色坏死灶[5]。ARV 感染后可引起免疫抑制，进而导致宿主对其他病原体的易感性明显增加。

1.3 鸡滑液囊支原体病

鸡滑液囊支原体病是鸡因感染鸡滑液囊支原体(MS)产生的急性或慢性传染病，可引起传染性滑膜炎和呼吸道症状[6]。早期通常是关节、腱鞘处严重的滑膜炎，滑液囊肿胀，分泌物明显增多且变的浑浊，分泌物一般是灰白色脓性黏液或黄白色纤维素状干酪样的物质[7]，并伴有肝脏、脾脏和肾脏肿大。鼻腔、气管一般无明显病变，有时可见轻度的气囊炎[8]。

以上几种疾病感染后均存在关节肿大，有明显渗出物为特征的临床症状，根据临床症状及剖检病理的变化可做出初步的诊断，但最终确诊还需采用病毒分离、血清测定等分子生物学方法。

2 实验室检测技术

2.1 分子生物学检测

随着分子生物学研究的不断进步，聚合酶链反应核酸扩增仪、实时荧光定量PCR 系统及全自动核酸提取仪的普及，以及灵敏快捷的诊断产品的成功研发。聚合酶链式反应（PCR）以灵敏度高、特异性强、对标本纯度要求相对较低，且简便快速等特点，成为病原检测的最佳方法。该方法无需分离病毒或细菌，也无需培养细胞，DNA 粗制品和总RNA 都可以作为扩增模板，直接用于体腔液、血液、组织细胞等临床标本。无菌采集发病初期的病变部位的关节液、组织，使用商品化荧光定量PCR 试剂盒或普通PCR 设计引物的聚合酶链式反应、凝胶电泳技术可以快速对APEC、SA、MS、ARV 进行PCR/RT-PCR 检测和鉴别诊断。

2.2 血清学检测方法

血清学检测方法有快速平板凝集实验（SPA）、血凝抑制实验（HI）及酶联免疫吸附试验（ELISA），ELISA 更特异、更敏感，也大大提高了检测效率，大批量开展血清样品抗体检测，不仅可以作为临床诊断方法，还可以用于其他多种病原流行病学的调查，监测血清中相应抗体的水平等。目前市场上存在多种商品化的APEC、SA、MS、ARV 诊断试剂盒可供选择使用。

3 细菌的分离、鉴定及药敏试验

3.1 APEC 与SA 的分离鉴定及药敏试验

3.1.1 镜检

无菌取病死鸡关节液及小号针筒无菌取带病鸡关节液涂片、染色、镜检细菌菌落，SA 为革兰氏阳性菌，可见大量散落或葡萄串状分布的蓝紫色球菌；APEC 为两端钝圆的革兰氏阴性杆菌[9]。

3.1.2 分离培养与鉴定

无菌取病死鸡关节液接种在鲜兔血平板和普通琼脂平板上，37 ℃培养箱孵育24 h，菌落较厚，且光泽，呈圆形的凸起，在血平板菌落的周围会形成透明状溶血环，结合镜检可判定为SA；如是透明浅灰色的湿润菌落，接种到麦康凯培养基上，长出呈粉红色的菌落，结合镜检可确定为APEC[10]。

3.1.3 药敏试验

用酒精灯灼烧灭菌后的常温接种环，将待测细菌均匀涂布在平板上，也可挑取待测细菌，于少量生理盐水中制成细菌悬浮液，再用消毒棉签均匀涂布在平板培养基的表面，取药敏片贴到平板培养基表面。将平板培养基在37 ℃培养箱中培养24 h，观察效果。APEC 和SA 对抗生素有不同程度的耐药现象，鸡场分离的APEC 和SA 对抗生素的敏感性不同。

3.2 MS 的分离鉴定及药敏试验

3.2.1 分离培养与鉴定

在无菌状态下采集相关部位（肿胀的跗关节、爪掌及滑液囊等）的液体内容物，然后在37 ℃，每分钟150 转的Frey 氏液体培养基中震荡培养，当培养基中液体的颜色变成橘黄色时，立即传代接种到新的Frey 氏液体培养基中，并进行培养物的涂片，姬姆萨染色，油镜下详细观察记录菌体的形态。同时，在Frey 氏培养平板上将新接种的培养物培养3 ～7 d，而后在低倍镜下观察，若见针尖一样大小，圆润且无色透明的菌落，即为阳性[11]。

3.2.2 药敏试验

不同地区、不同品种的鸡对不同种类抗生素（氨基糖苷类、四环素类、林可胺类、大环内酯类、酰胺醇类、喹诺酮类及截短侧耳素类等）的敏感性差异较大[12]，需进行相关的药敏试验。一般在无菌情况下，通过配制药物推荐使用浓度8 倍量的溶液进行相关的药敏试验。

总之，引起鸡关节炎的因素很多，病原也是多样性的，症状也大多较相似，临床诊断确实存在一定难度。生产实践中一旦发生发现鸡关节病，应通过实验室最新的检测技术尽早确定病原，为该病的有效防控、合理用药提供科学依据。