银杏叶药物成分测定及数量遗传分析

●张婷婷（吉林省药品检验研究院 吉林 长春 130033）

银杏是典型的银杏科植物，其叶片可以在未完全呈现绿色前采摘、晾干，作为药物[1]。药性平和，味道同时具有甘、涩、苦等特征，药效包括平喘、敛肺、止咳，且有良好的活血化瘀作用，经常被用于治疗冠心病、心绞痛等心脏类疾病，对于虚火引发的肺病也有很好的治疗效果[2]。这主要是银杏叶中的黄酮、内酯成分在发挥作用。银杏类药物对心脏、肺部疾病的治疗效果显著高于其他同类型药物。随医学技术发展，银杏类药物在各类医疗临床试验中不断取得突破，其药物成分的毒性得到抑制、治疗性得到增强，银杏药物在疾病治疗中发挥良好效果[3]。本试验对银杏叶药物主要成分及数量遗传进行分析，以期为银杏类药物在临床上的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验资料

收集国内13个种源，87个无性系，在山东及药乡林场2点联合选择。为避免接穗年龄和位置效应的干扰，将收集材料先嫁接至根系发达，对环境适应性较强，不携带病毒的实生苗上，选用1年生接穗双舌接定植，植株行距控制在1.0 m×0.3 m。共3个试验点，局部控制利用随机分组技术，误差于组内，与组间差别无关，组间变异系数较大，通过方差分析误差分离，区组数与重复数相同，区组内区数等于试验处理数，试验区组随机排列。10株小区，重复3次，每年7月至现场调研，采取长枝从下而上的第3叶片备用。

1.2 方法

1.2.1 成分测定黄酮采用Rutin分光光度法测定，并根据C（%，干）=Rutin（g/L）/样本重（g）×稀释倍数10-3×100计算叶内黄酮总量。内酯采用日本Shimadzu LC-10ADHPLC国际标准测定，并根据银杏苦内酯（%）=A酯/A标×100/R×1.054/M计算内酯苷总量。银杏苦内酯A=1.12，银杏苦内酯B=1.16，银杏苦内酯C=1.26，银杏苦内酯J=1.21，白果内酯=1.21。

1.2.2 数量遗传分析稳定性分析采用Nassar&Huhu 的非参数法，包括Si（1）和Si（2）2 个参数。

第i个品种在不同环境中名词的绝对差异由Si（1）表示。第i个品种在S个环境中的名次方差由Si（2）表示。品种i在环境j中的等级由γij表示，表示环境数（j＝1，2，…，N），K表示种数（i=1,2，…，K）。

2 结果与分析

2.1 银杏叶内酯性别、种源、无性系成分方程

Ⅰ类内酯总量为0.1879%，Ⅱ类内酯总量为0.1529%，Ⅲ类为中内酯种源，总内酯为0.1059%，Ⅳ类为低内酯种源，平均内酯为0.0457%。将内酯6个性状化为2个主成分方程，详见表1。

表1 银杏叶内酯性别、种源、无性系方程

2.2 全国银杏内酯性别、种源Q型聚类结果及形状指针

87个无性系分为4类，山东苍山3个系号（56、57、59），山东海阳2个系号（17、18）属于高内酯无性系。Ⅲ类14个属中内酯无性系，Ⅳ类68个属低内酯无性系。内酯总量、白果内酯、银杏苦内酯A、银杏苦内酯B、银杏苦内酯C、银杏苦内酯J 等6个指针对国内13个种源进行Q型聚类分析，详见表2、表3。

表2 全国银杏内酯性别、种源Q型聚类结果及形状指针

表3 内酯与黄酮Q型聚类分析结果

2.3 基因稳定性分析

Nassar& Huhu 非参数法中，Si（1）与Si（2）越小，品种稳定性越好。从15个内酯系号基因稳定性非参数法分析结果可知，广西（系号9）、山西（系号8）、云南（系号5）3个雄株系号内酯较稳定，详见图1。从38个黄酮系号基因稳定性非参数法分析结果可知，有15个稳定系号，详见图2。

图1 银杏叶黄酮基因型稳定性分析

图2 银杏叶黄酮基因型稳定性分析

3 讨论

银杏叶提取物来自青色阶段从银杏树上采摘、晾干的银杏叶，其系列药物被用于治疗心血管和神经系统疾病，其中的黄酮、内酯发挥主要药理作用，以高治疗价值、低毒性的优势在相关疾病治疗中取得优势[4]。鉴于银杏叶提取物的重要药用价值，我国国内的银杏种植产业悄然兴起，虽然并未见于各大报道，但关于银杏叶数量性状及其遗传参数的研究成为心脏病与肺部疾病临床治疗领域的重点，甚至一些国外医疗机构也纷纷效仿，试图将银杏提取物加入相关疾病治疗中[5]。本研究收集国内13个种源，87个无性系进行田间试验设计，对药物成分及遗传稳定性进行分析，结果显示，本研究中筛选的4个内酯无性系和高黄酮，黄酮含量为1.59%～2.49%，内酯含量为0.29%～0.38%。银杏叶药物基因稳定性变化幅度较高，其中内酯有3个系号稳定性良好，黄酮中有15个稳定系号。