复发性口腔溃疡治疗前后患儿血清上皮细胞膜结合黏液素1、CC修饰趋化因子11水平变化及对复发的预测价值

韩永付，马鹏涛，李华龙，裴 蓉，秦爱丽

(郑州大学附属儿童医院 郑州儿童医院，河南 郑州 450018)

复发性口腔溃疡是发病率高达25%的口腔黏膜疾病[1]。复发性口腔溃疡主要表现为局部溃疡、灼热疼痛等，具有周期性、复发性等特点[2]。儿童由于免疫系统发育不完善，导致口腔溃疡发生频率较高，对患儿生活质量具有一定的影响[3]。目前认为复发性口腔溃疡是一种非特异性炎症，在临床上只能对症治疗，疗效不佳[4]。近年来研究发现，免疫功能异常是复发性口腔溃疡发病的关键原因[5]。在病理上，口腔是胃肠道与皮肤之间的过渡区，许多胃肠道免疫状况可以影响口腔疾病的发生[6]。黏蛋白具有保护黏膜上皮的作用，上皮细胞膜结合黏液素1(Membrane-bound mucin-1 of epithelial cells，MUC1)具有维持肠道内环境稳定的作用，有研究报道，溃疡性结肠炎患者血浆MUC1水平显著升高，且活动期患者血浆MUC1水平明显高于缓解期患者[7]。CC修饰趋化因子配体11(CC-modified chemokine ligand 11，CCL11)具有促炎作用。胡雪庐等[8]研究显示，溃疡性结肠炎患者血清CCL11水平明显升高，活动期患者血清CCL11水平明显高于缓解期患者。基于此，本研究探究复发性口腔溃疡患儿治疗前后血清MUC1、CCL11水平变化及对复发的预测价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年3月至2021年3月郑州大学附属儿童医院收治的复发性口腔溃疡患儿136例为观察组,男72例,女64例，年龄2～12岁，平均(7.50±2.14)岁。病例纳入标准[9]：①至少有2次复发性口腔溃疡发病史，病史至少半年；②反复发作，每月发作1次以上；③入院就诊前3个月内未服用免疫类制剂；④发作时表现为，溃疡发生在唇、舌、颊黏膜等处﹐数目1～5个，直径不超过5 mm，溃疡充血，局部疼痛，边界清楚，基部不硬，中央稍凹，表面覆以灰黄色或浅黄色假膜。排除标准：①合并其他口腔黏膜疾病、自身免疫性疾病、甲状腺功能减退症；②克罗恩病、溃疡性结肠炎；③慢性肝脏、肾脏疾病、感染性疾病；④急性营养不良、卟啉病、代谢性疾病；⑤恶性肿瘤患儿。另选择同期健康体检且口腔无溃疡者142例为对照组，男72例，女70例；年龄2～12岁，平均(7.90±2.03)岁。两组患儿性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。研究经患儿父母或法定监护人知情同意，并经本院伦理委员会审核。

1.2 研究方法

1.2.1 对照组禁食8 h后清晨入院体检时，研究组在治疗前、治疗后禁食8 h后清晨分别抽取静脉血 4 ml，以4000 r/min离心10 min，留上清，置于-20 ℃下待测。

1.2.2 采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清MUC1、CCL11、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)水平：先用试剂盒携带的标准品，按说明书配成一系列浓度样品，做标准曲线。然后每孔分别加入100 μl待测样品，混匀，在37 ℃下孵育90 min。用磷酸缓冲液(PBS)洗涤反应板3次，烘干。将一抗溶液加入酶标板各孔中，混匀，在37 ℃下孵育60 min。用PBS洗涤反应板3次，烘干。各孔加入100 μl酶标工作液，在37 ℃下孵育30 min，重复洗板。在各孔加入100 μl终止液，混匀。应用酶标仪测450 nm处吸光值，计算MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平。

1.3 预后评价 对治愈后患儿进行为期1年随访，随访截止时间2022年3月。根据《复发性阿弗他渍疡疗效评价试行标准》进行评价[10]。显效：至少6个月未复发，溃疡面积明显减小，基本无疼痛；有效：1年内复发1～2次，溃疡数减少，患儿主诉疼痛感在用药后7 d内消失；无效：溃疡间歇期及溃疡个数无明显改善，患儿临床症状未减轻。将无效归为再次复发组，32例；将显效、有效归为未再次复发组，104例。

2 结 果

2.1 两组患儿血清CCL11、MUC1、TNF-α、IL-2水平比较 与对照组相比，观察组血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平显著升高(均P<0.05)，见表1。

表1 两组患儿血清CCL11、MUC1、TNF-α、IL-2水平比较

2.2 观察组患儿治疗前后血清CCL11、MUC1、TNF-α、IL-2水平比较 与治疗前相比，治疗后血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平显著降低(均P<0.05)，见表2。

表2 观察组患儿治疗前后血清CCL11、MUC1、TNF-α、IL-2水平比较

2.3 观察组患儿血清MUC1、CCL11与TNF-α、IL-2相关性分析 Pearson法分析显示，血清MUC1、CCL11均与TNF-α、IL-2呈正相关(均P<0.05)，见表3。

表3 血清MUC1、CCL11与TNF-α、IL-2相关性分析

2.4 再次复发组和未再次复发组治疗前后血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平比较 治疗前再次复发组和未再次复发组血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平比较差异无统计学意义(均P>0.05)；治疗后，与未再次复发组相比，再次复发组血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平显著升高(均P<0.05)。见表4。

表4 再次复发组和未再次复发组治疗前后血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平比较

2.5 血清MUC1、CCL11对复发性口腔溃疡再次复发的预测价值 ROC曲线分析表明，MUC1预测复发性口腔溃疡再次复发的曲线下面积(AUC)为0.886(95%CI:0.819～0.953)，敏感度为71.90%，特异性为92.30%，截断值为10.21 U/ml，约登指数为0.642；CCL11预测复发性口腔溃疡再次复发的AUC为0.813(95%CI:0.720～0.906)，敏感度为75.00%，特异性为86.50%，截断值为3.81 pg/ml，约登指数为0.615；MUC1联合CCL11预测复发性口腔溃疡再次复发的AUC为0.908(95%CI:0.847～0.969)，敏感度为84.40%，特异性为86.50%，约登指数为0.709，其中两者联合预测的AUC值与CCL11单独预测的AUC值相比，差异有统计学意义(Z=1.877，P=0.030)，两者联合预测的AUC值与MUC1单独预测的AUC值相比，差异无统计学意义(Z=0.450，P=0.326)。见图1。

图1 血清MUC1、CCL11预测复发性口腔溃疡再次复发的ROC曲线

3 讨 论

复发性口腔溃疡是口腔黏膜局限性溃疡性疾病，好发于口腔唇、颊、软腭等处黏膜，发作时黏膜充血、灼热疼痛，病情严重时可伴有头痛发热、淋巴结肿大，并且影响患儿说话及进食[11-12]。目前，多数学者认为复发性口腔溃疡发生与免疫功能异常、肠道菌群异常有密切关系[13]。机体免疫功能对外界炎症侵扰有抵御作用，当机体细胞免疫功能发生改变后，细胞炎性反应加强，引起口腔局部溃疡[14]。国外研究发现，口腔溃疡的全基因组与免疫调节的基因有关[15]。

本结果显示，观察组血清TNF-α、IL-2水平显著高于对照组，治疗后血清TNF-α、IL-2水平显著低于治疗前，提示复发性口腔溃疡发生过程中，TNF-α表达水平上调可促进炎症性损伤。TNF-α是由单核巨噬细胞分泌的细胞因子，可诱导多种炎性介质分泌，在免疫和炎性反应中扮演重要角色[16-17]。IL-2是调控免疫应答中重要细胞因子，在复发性口腔溃疡中表达明显升高，可加重炎性反应，促进溃疡发生[5]。

本研究发现，观察组血清MUC1、CCL11水平显著高于对照组，治疗后血清MUC1、CCL11水平显著低于治疗前，提示MUC1、CCL11可能影响复发性口腔溃疡的发生。CCL11属于CC类趋化因子家族，一种嗜酸性粒细胞趋化剂，也是重要的免疫物质调节剂[18]。国外研究报道，溃疡性结肠炎患者血浆中CCL11表达明显升高，与TNF-α、IL-2具有密切关系[19]。以往研究显示，TNF-α刺激的支气管上皮细胞可通过激活STAT6信号通路增加CCL11表达[20]。MUC1是高分子量、高度糖基化的跨膜蛋白，MUC1主要表达于消化道、呼吸道和生殖道等各种组织器官的上皮细胞腺体表面[21]。早期研究表明，MUC1主要生物学功能是润滑、细胞保护、黏附维持和细胞识别[22]。本研究发现，血清MUC1、CCL11均与TNF-α、IL-2呈正相关，提示MUC1、CCL11可能与复发性口腔溃疡患儿体内炎性反应相关。猜测TNF-α、IL-2可能通过影响某个通路从而影响患儿体内MUC1、CCL11表达，影响复发性口腔溃疡发生。本研究进一步发现，再次复发组血清MUC1、CCL11水平显著高于未再次复发组，提示MUC1、CCL11可能影响复发性口腔溃疡疾病的预后，初步研究表明，复发性口腔溃疡患儿再次发生口腔溃疡可能与MUC1、CCL11表达有关。ROC曲线分析表明，MUC1、CCL11预测复发性口腔溃疡再次复发的AUC为0.886、0.813；MUC1联合CCL11预测复发性口腔溃疡再次复发的AUC为0.908，敏感度为84.40%，特异性为86.50%，提示MUC1、CCL11可预测复发性口腔溃疡再次复发，MUC1联合CCL11对复发性口腔溃疡再次复发有较高的预测价值。

综上所述，治疗后复发性口腔溃疡患儿血清MUC1、CCL11水平显著降低，对预测复发性口腔溃疡患儿再次复发具有一定价值，但是两者参与复发性口腔溃疡再次复发的机制有待进一步研究。