蛭蛇通络胶囊及其拆方组分肠吸收液抗氧化及抗凝血研究*

丁 茹，李 煜，张 毅，王丽芳，张方博，杨洪军

（1.中国中医科学院中药研究所，北京 100700；2.陕西健民制药有限公司，咸阳 陕西 712000；3.天津中医药大学，天津 301617；4.中国中医科学院医学实验中心，北京 100700）

脑卒中属于中医学“中风”范畴，因气虚致血瘀，气虚无力行血，损伤大脑。气虚是病理基础，益气活血是基本治则，益气活血和化瘀通络为基本治法，可通过补气化瘀促进血液运行，抑制血栓形成，拮抗脑组织损伤，改善神经功能，提高临床疗效[1]。蛭蛇通络胶囊由人参、黄芪、天麻、丹参、红花、葛根、川芎、石菖蒲、郁金、水蛭、冰片及乌梢蛇等组成，具有补气养血、开窍醒神、活血化瘀、祛风通络等功效。蛭蛇通络胶囊可增加脑血流量和脑组织供氧，改善脑部缺血的状态，恢复脑功能，常用于中风病、口舌歪斜、气短乏力等病症，临床研究表明蛭蛇通络胶囊为治疗脑梗死恢复期的有效复方[2]。

氧化应激（oxidative stress）是细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）生成与清除处于失衡状态，过多的ROS对细胞造成损伤，并促发后续的级联反应。氧化应激性损伤参与许多疾病的发生发展过程[3]，如心脑血管病、癌症、慢性代谢性疾病等，正常情况下，机体的抗凝和促凝处于动态平衡，若失衡则引发出血或血栓[4]。缺血性脑卒中时脑血管栓塞或血栓形成，导致血管内皮损伤，无法清除，使凝血因子聚集并激活，凝血系统亢进，呈现高凝状态，引起抗凝、凝血和纤溶水平变化[5]。临床研究表明，与健康受检者相比，脑卒中患者的凝血指标明显升高，疾病严重程度不同，其凝血功能改变情况不同；凝血功能紊乱越严重，病情也越严重，预后越差；积极的抗凝治疗可改善患者预后[6]。

基于氧化应激和凝血状态在脑卒中发病机制中的重要性，本研究采用“肠吸收液-体外药理活性”结合拆方对蛭蛇通络胶囊清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl，DPPH）自由基的抗氧化作用，以及凝血四项和二磷酸腺苷（adenosine diphosphate，ADP）诱导血小板凝集的抗凝作用等两方面进行解析，观察其对氧化应激和凝血作用的影响，定位其发挥抗氧化和抗凝的主要组分，以辨识蛭蛇通络胶囊的有效成分，并阐明其神经保护作用的机制。

1 材 料

1.1 实验动物和细胞10周龄雄性SPF级SD大鼠15只，体质量200～220 g，购于北京华阜康生物科技股份有限公司，动物生产许可证号：SCXK（京）2019-0008，动物使用许可证号：SYXK（京）2019-0003，实验动物合格证号：1103222011009337。实验经中国中医科学院中药研究所实验动物福利伦理委员会批准并审核通过。实验期间大鼠饲养于中国中医科学院中药研究所动物房，温度20～22℃，相对湿度为40%～70%，换气次数15次/h，确保大鼠自由饮食饮水。人神经母细胞瘤细胞株（human neuroblastoma cells）SH-SY5Y购于广州吉妮欧生物科技有限公司。

1.2 药物及试剂根据蛭蛇通络胶囊制备的工艺路线，分为4个受试药物样本，样本1为人参、黄芪、天麻、丹参和葛根等制得的浸膏，样本2为水蛭、乌梢蛇和红花等制得的浸膏，样本3为川芎、郁金和石菖蒲等制得的浸膏，样本4为合并以上3种浸膏制得，均由陕西健民制药有限公司提供。氮自由基（DPPH）清除能力测定试剂盒（批号：57941）购于上海惠诚生物科技有限公司；凝血酶原时间（prothrombin time，PT）试剂盒（批号：STY20101-3B）、活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）试剂盒（批号：STY20201-20-1）、凝血酶时间（thrombin time，TT）试剂盒（批号：STY20301-43）和纤维蛋白原含量（fibrinogen，FIB）试剂盒（批号：STY20401-5）均购于泰州中勤世帝生物技术有限公司；二磷酸腺苷（ADP）（批号：1123F021）、阿司匹林（aspirin）（批号：422G013）；戊巴比妥钠（批号：811B025）、无菌D-Hank’s液（批号：20190929）、依达拉奉（edaravone）（批号：629A026）、高效RIPA组织裂解液（批号：20200915）和青链霉素（100×）（批号：20190317）均购于北京索莱宝生物科技有限公司；DMEM培养基（批号：8119221）、无菌中性磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）（批号：8119312）、胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）（批号：2036226）、非必需氨基酸NEAA溶液（non-essential amino acids，100×）（批号：2074167）和0.25%胰酶-EDTA（批号：1869505）均购于美国Gibico公司；CCK-8溶液（批号：N20072709）购于新赛美生物科技有限公司；乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase，LDH）试剂盒（批号：20201012）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）试剂盒（批号：20200702）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）试剂盒（批号：20201230）均购于南京建成生物工程研究所；生理盐水（批号：1807023205）购于石家庄四药有限公司；C-1厌氧产气袋和C-22氧气指示剂购于日本三菱瓦斯化学株式会社。

1.3 主要仪器ALC-M型组织-器官水浴系统（上海奥尔科特生物科技有限公司）；ALC-CWB型数控恒温循环水槽（上海奥尔科特生物科技有限公司）；5452R型低温超高速离心机（德国Eppendorf公司）；SpectraMax M5型多功能酶标仪（美国Becton-Dickinson公司）；SC40 LG-PABER-I型血小板凝集及凝血因子分析仪（北京中勤世帝科学仪器有限公司）；MCO-18AIC型CO2培养箱（日本Sanyo公司）；C-31型厌氧培养盒（日本三菱瓦斯化学株式会社）。

2 方 法

2.1 肠吸收液的制备实验前大鼠禁食12 h，颈部脱臼处死，沿腹中线剪开皮肤和肌肉。找出胃幽门，自幽门以下10 cm开始截取肠段并冲洗干净。将硅胶套管的一端插入肠管中，将肠道内表面翻转，用细线结扎；然后用0℃Tyrode缓冲液冲洗肠段内表面，将另一端用线结扎，确保不漏液。量取25 mL各受试药物供试液，如加入Tyrode缓冲液为空白肠吸收液，预先将其加入麦氏浴管中，同时通入95% O2和5% CO2的混合气体，开启37℃恒温水浴循环系统。用注射器吸取2 mL Tyrode缓冲液，注入肠管中，然后将其置于麦氏浴管中。2 h后收集肠管内液体，0.22 μm无菌滤膜过滤分装，-20℃保存待用。

2.2 DPPH自由基清除实验分为空白对照组（空白肠吸收液组），3个组分和全方的低剂量组（1.25 mg/mL）、中剂量组（2.50 mg/mL）和高剂量组（5.00 mg/mL），以及维生素C组（Vit C，10.00 μg/mL）。吸取各样品100 μL于96孔板，加入100 μL DPPH溶液，混匀后室温避光30 min，517 nm处测定吸光值（A）。每个样品设3个复孔，实验重复3次。以空白肠吸收液为空白对照（A0），各样品与DPPH溶液为测定样品（A1），各样品与样品稀释液为对照样品（A2），则样品吸光度为A（A1～A2）。清除率计算公式：清除率（%）=（A0-A）/A0×100%。

2.3 凝血四项凝血四项为活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB）。戊巴比妥钠腹腔麻醉大鼠，腹主动脉取血，枸橼酸钠抗凝，3 000 r/min离心10 min，吸取上清。实验分为空白对照组（空白肠吸收液组），3个组分和全方的低剂量组（1.25 mg/mL）、中剂量组（2.50 mg/mL）和高剂量组（5.00 mg/mL），以及阿司匹林组（0.25 mg/mL），每组4个样本。将血清与不同药物共同作用20 min，按试剂盒操作说明加入其他试剂，上机检测。

2.4 ADP诱导血小板凝集戊巴比妥钠腹腔麻醉大鼠，腹主动脉取血，枸橼酸钠抗凝。实验分为空白对照组（空白肠吸收液组），3个组分和全方的低剂量组（1.25 mg/mL）、中剂量组（2.50 mg/mL）、高剂量组（5.00 mg/mL），以及阿司匹林组（0.25 mg/mL），每组4个样本。800 r/min离心10 min，吸取上层富血小板血浆（PRP）。将下层沉淀再次行2 000 r/min离心10 min，取上清，为贫血小板血浆（PPP）。实验前应进行血小板计数，PRP最适数目为（200～250）×109/L。将270 μL PRP与30 μL不同药物作用20 min，上机预热5 min，加入ADP 10 μL，终浓度10 μmol/L，比浊法测定诱导血小板PRP聚集所需要的时间（s）和百分率。

2.5 细胞培养SH-SY5Y细胞生长至密度接近80%左右时，0.25%胰酶-EDTA消化传代，培养于含有10% FBS、青链霉素及多种非必需氨基酸（NEAA）的DMEM培养基中，置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。

2.6 氧糖剥夺模型与实验分组取对数生长期SH-SY5Y细胞，胰酶消化离心重悬后，将1.0×105个/mL的细胞混悬液分别接种于96孔板中，每孔100 μL。第2天贴壁生长后，吸去培养液，PBS液轻柔漂洗2遍，换为无糖D-Hank’s液，放入C-31厌氧培养盒中，进行氧糖剥夺。共分为以下4组：正常对照组不做任何处理；OGD模型组按上述步骤进行氧糖剥夺；蛭蛇通络胶囊3个组分组、全方组和依达拉奉组分别用不同浓度全方、3个组分肠吸收液（4.00、2.00、1.00、0.50、0.25、0.625、0.312 5 mg/mL）、依达拉奉（6.4、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05 mmol/L）预处理24h，再进行氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation，OGD）。

2.7 细胞存活率氧糖剥夺实验结束，每孔加入CCK-8溶液10 μL，摇床振荡混匀，放入培养箱孵育2 h。酶标仪450 nm波长处测定每孔的吸光度（OD）值，计算存活率。存活率（%）=（实验组OD值-调零孔OD值）/（对照组OD值-调零孔OD值）×100%。

2.8 细胞内氧化应激氧糖剥夺实验结束，PBS液洗涤2次，加入高效RIPA组织裂解液，收集各组细胞，4℃，15 000 r/min离心15 min，取上清，严格按照试剂盒说明书操作，酶标仪在相应波长处检测细胞内氧化应激相关指标LDH、SOD和MDA的水平。

2.9 统计学方法使用SPSS 17.0软件进行统计学处理，计量资料采用“均数±标准差”（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验，P〈0.05为差异有统计学意义。

3 结 果

3.1 各组分及全方肠吸收液的制备结果根据蛭蛇通络胶囊的制备工艺路线，人参、黄芪、天麻、丹参和葛根等用10倍体积60%乙醇提取2次，合并提取液并过滤，滤液经减压浓缩得到浸膏1，由其制备的肠吸收液为组分1；水蛭、乌梢蛇和红花等用10倍体积水提取2次，合并提取液并过滤，滤液经减压浓缩得到浸膏2，由其制备的肠吸收液为组分2；川芎、郁金和石菖蒲经水蒸气蒸馏提取4 h，滤液经减压浓缩得到浸膏3，由其制备的肠吸收液为组分3；将以上3种浸膏合并，加乙醇至含醇量60%，静置沉淀24 h，滤过回收并浓缩制得浸膏4（不含冰片和挥发油），由其制备的肠吸收液为全方4。以上4个受试组分肠吸收液的生药质量浓度均为170.0 mg/mL。

3.2 各组分及全方对DPPH自由基清除的影响与空白对照组比较，3个组分及全方均有DPPH自由基清除作用，强弱顺序为全方〉组分1〉组分2〉组分3。全方的清除作用最强，全方低、中、高剂量组DPPH自由基清除率分别为（59.02±1.70）%、（61.99±2.43）%和（77.56±7.73）%；其次为组分1，组分1低、中、高剂量组清除率分别为（65.21±2.85）%、（68.82±5.65）%和（74.40±5.62）%；组分2低、中、高剂量组清除率分别为（36.37±6.97）%、（40.72±4.66）%和（46.50±6.27）%；组分3的清除作用最弱，组分3低、中、高剂量组清除率分别为（7.06±2.56）%、（7.47±6.75）%和（9.28±8.11）%。Vit C（10 μg/mL）具有DPPH自由基清除作用，维生素组清除率为（15.14±2.49）%。（见图1）

图1 各组分及全方对DPPH自由基清除的影响（±s，n=9）

3.3 各组分及全方对凝血四项的影响各组分及全方各剂量组ATPP、PT比较，差异均无统计学意义（P〉0.05）。空白对照组FIB水平为（1.50±0.23）g/L，与空白对照组比较，3个组分及全方的低、中、高剂量均可降低FIB水平，以全方效果最佳。全方低、中、高剂量组FIB水平分别为（1.12±0.03）、（0.96±0.09）、（0.70±0.06）g/L；其次为组分2，组分2低、中、高剂量组FIB水平分别为（1.02±0.12）、（0.99±0.18）、（0.96±0.21）g/L。（见图2）

空白对照组TT为（22.26±0.32）s，与空白对照组比较，组分1中、高剂量，组分2高剂量，以及全方低、中、高剂量均可延长TT；以全方效果最佳，全方低、中、高剂量组TT分别为（24.13±0.49）、（25.26±1.22）、（29.90±0.95）s；组分1中、高剂量组TT分别为（23.90±0.36）、（25.06±1.16）s；组分2高剂量组TT为（24.93±1.10）s。阿司匹林可降低FIB的水平[（1.09±0.05）g/L]，并延长APTT[（17.70±0.36）s]和TT[（24.33±0.83）s]。（见图2）

图2 各组分及全方对凝血四项的影响（±s，n=4）

3.4 各组分及全方对ADP诱导血小板凝集的影响空白对照组血小板凝集率为（47.97±1.66）%，与空白对照组比较，组分1中、高剂量，组分2低、中、高剂量和全方低、中、高剂量可抑制ADP诱导血小板凝集，以全方抑制效果最佳。全方低、中、高剂量组凝集率分别为（39.55±3.83）%、（30.92±5.60）%、（24.25±5.42）%；其次为组分2，组分2低、中、高剂量组凝集率分别为（41.00±4.33）%、（30.25±4.27）%、（23.92±4.79）%；组分1中、高剂量组凝集率分别为（35.22±3.83）%、（27.47±2.18）%；组分3无抑制ADP诱导血小板凝集的作用。阿司匹林也可抑制ADP诱导的血小板凝集，阿司匹林组凝集率为（29.57±3.51）%。（见图3）

图3 各组分及全方对ADP诱导血小板凝集的影响（±s，n=4）

3.5 氧糖剥夺时间的确定

3.5.1 细胞形态学 正常对照组细胞贴壁生长，细胞形态呈两极或多极，细胞突起明显，细胞间相互交织成网状，细胞膜光滑完整，胞体透明，折光性较强。氧糖剥夺细胞间隙变大，部分细胞形状不规则，细胞皱缩，细胞质凝聚，细胞突起明显减少，贴壁细胞数量明显减少，部分细胞团脱落，胞体折光性下降，部分细胞裂解成碎片。随着缺氧时间的延长，细胞间隙越大，贴壁细胞的数目越少，碎片越多。（见图4）

图4 SH-SY5Y细胞氧糖剥夺不同时间的细胞形态观察（×200）

3.5.2 细胞生存率 使用CCK-8法检测氧糖剥夺不同时间的细胞生存率。结果表明，与正常对照组比较，氧糖剥夺6、12、18、24 h组细胞生存率分别为（86.45±5.44）%、（74.09±2.35）%、（50.27±3.49）%、（38.65±7.28）%。本研究确定将18 h作为后续实验的氧糖剥夺时间。（见图5）

图5 SH-SY5Y细胞氧糖剥夺不同时间的细胞生存率（±s，n=9）

3.6 各组分及全方对氧糖剥夺SH-SY5Y细胞生存率的影响用蛭蛇通络胶囊全方及3个组分肠吸收液不同质量浓度（4.00、2.00、1.00、0.50、0.25、0.625、0.312 5 mg/mL）预处理SH-SY5Y细胞24 h，再氧糖剥夺18 h，测定细胞存活率。与正常对照组比较，OGD模型组细胞生存率[（52.07±3.25）%]降低（P〈0.01）。与OGD模型组比较，全方的保护作用最佳，质量浓度范围为（0.50～0.06）mg/mL，最大细胞生存率为（76.07±10.38）%，相对应质量浓度为0.25 mg/mL。其次为组分1，保护作用质量浓度为（0.25～0.06）mg/mL，最大细胞生存率为（70.94±8.22）%，相对应质量浓度为0.25 mg/mL。组分2的保护作用质量浓度为（0.25～0.03）mg/mL，最大细胞生存率为（64.68±3.90）%，相对应质量浓度为0.25 mg/mL。组分3无神经保护作用。阳性对照药依达拉奉也有神经保护作用，质量浓度范围为（0.80～0.05）mmol/L，最大细胞生存率为（79.35±13.01）%，相对应质量浓度为0.80 mmol/L。（见图6）

图6 各组氧糖剥夺SH-SY5Y细胞生存率的比较（±s，n=9）

3.7 各组分及全方对氧糖剥夺SH-SY5Y细胞内氧化应激的影响与正常对照组比较，GOD模型组的细胞内LDH释放增多，为（61.26±22.68）U/g（P〈0.01）；SOD活性降低，为（8.48±1.94）U/mg（P〈0.01）；MDA水平升高，为（1.10±0.38）nmol/mg（P〈0.01）。与GOD模型组比较，全方及组分1的低、高剂量组均能不同程度抑制氧化应激，使LDH释放减少，SOD活性升高，MDA水平下降，均以高剂量组效果最佳。全方和组分1的高剂量组LDH释放量分别为（35.08±21.62）、（29.04±11.99）U/g（P〈0.01或P〈0.05），SOD活性分别为（20.82±5.08）、（16.14±3.79）U/mg（P〈0.01或P〈0.05），MDA水平分别为（0.70±0.20）、（0.61±0.27）nmol/mg（P〈0.01或P〈0.05）。依达拉奉组LDH释放量为（27.26±7.96）U/g（P〈0.01），SOD活性为（23.01±6.88）U/mg（P〈0.01），MDA水平为（0.58±0.21）nmol/mg（P〈0.01）。（见图7）

图7 各组氧糖剥夺SH-SY5Y细胞内LDH、SOD和MDA的水平比较（±s，n=9）

4 讨 论

脑卒中是突发的脑血液循环障碍性疾病，随着老龄化和高血压患病率的逐年增长，国内脑卒中患者不断增多，且出现年轻化趋势，有效预防和治疗脑卒中日趋重要[7-8]。根据血管堵塞或破裂，脑卒中分为缺血性脑卒中和出血性脑卒中，其中缺血性脑卒中占脑卒中的85%以上。西医治疗脑卒中的主要方法有抗凝、急性期降压、去血肿的颅骨切除术及脑室内置管引流等外科手术[9-10]。西医疗法起效快，但伴随许多副作用和治疗风险。研究表明中药治疗脑卒中，具有疗效好和不良反应少等优点，临床应用日益广泛，并且动物实验及细胞实验证实，中药可能通过调控体内炎症、氧化、凋亡、抑制血管痉挛和自噬等相关通路来发挥治疗作用[11]。

蛭蛇通络胶囊中人参大补元气，促进血行；黄芪益气养血，利水消肿，助人参补气养血；水蛭味咸性平，破瘀；乌梢蛇祛风止痉通络；丹参活血化瘀；郁金活血行气化痰；红花、川芎助丹参活血化瘀，并加强水蛭行瘀止痛效果；天麻息风止痉，祛风通络，助乌梢蛇祛风止痉；冰片开窍醒神；葛根升阳清浊。临床研究表明蛭蛇通络胶囊治疗脑卒中恢复期患者疗效显著，能降低血脂，抗血栓形成，增加脑血流量，改善临床症状，且治疗期间无不良反应；其与西药联用治疗脑卒中恢复期患者，能发挥协同作用，提高疗效，且效果优于单用西药治疗者。蛭蛇通络胶囊改善缺血性脑卒中恢复期患者血脂和血液流变学指标的作用，可能与活血化瘀药物丹参、红花、川芎、水蛭等有关；其降低中医证候积分的作用，可能与益气祛风通络药物黄芪、人参、乌梢蛇、郁金、天麻等有关[12]。但蛭蛇通络胶囊治疗脑卒中的作用机制和有效组分尚未见报道，因此本研究制备各组分及全方肠吸收液结合体外药理实验从抗氧化和抗凝血来阐释其治疗脑卒中的作用机制，并利用拆方法寻找药效最佳的组分。

氧化应激是指机体内产生过量的活性氧自由基（reactive oxide species，ROS）或自身清除不足，造成体内ROS堆积，引起氧化损伤的病理过程[13]。氧化应激在脑卒中的病理过程中发挥了关键作用[14]。大量的自由基及其副产物使脂质过氧化，DNA损伤，蛋白质变性，细胞膜破坏，细胞崩解，最终导致神经元死亡[15]；氧自由基也会影响脑血管的血流，促进血管舒张，内皮通透性增加，内皮细胞损伤，血脑屏障通透性增加，导致脑组织微循环障碍[16]；氧化应激可影响兴奋性氨基酸毒性在体内的释放和重摄取，导致其在体内聚积，造成神经毒性损伤[17]。脑卒中的发展过程复杂，氧化应激损伤会造成严重的脑组织损伤，脑组织相对于其他器官更易产生氧自由基和脂质过氧化物[18]。抗氧化物质清除自由基，可保护机体免受损伤[19]。缺血性脑卒中的急性期由于血管内皮细胞损伤、血小板活化等原因，会激活凝血系统而导致血液处于高凝状态，在进展性脑卒中发病24 h内凝血酶及D-二聚体水平显著增高[20]。抗凝药物是缺血性脑卒中预防和治疗手段之一[21]。

含药肠吸收液应用于中药体外活性评价，是有效成分辨识和机制研究的有效方法[22-23]。本研究结果显示蛭蛇通络胶囊具有清除DPPH自由基的作用，能降低FIB的水平，延长TT，并抑制ADP诱导的血小板凝集，表明其可能通过抗氧化和抗凝血发挥治疗脑卒中的作用。根据制备工艺路线拆方的组分中，DPPH自由基清除作用最强的成分为含人参、黄芪、天麻、丹参和葛根的组分1，抗ADP诱导血小板凝集作用最强的成分为含水蛭、乌梢蛇和红花的组分2。虽然蛭蛇通络胶囊抗氧化和抗凝作用均有药效最强的不同组分，但和全方相对应的药效比较，仍以全方的抗氧化和抗凝血作用最佳，说明其抗氧化和抗凝血作用是全方综合作用的结果。

SH-SY5Y细胞系来源于人神经母细胞瘤株，具有分化程度低和增殖快的特点，且该细胞的形态、生理生化功能均与正常神经细胞较为相似[24]。OGD损伤模型常用于细胞缺氧缺血损伤后的体外研究[25]。本研究构建了OGD损伤SH-SY5Y细胞模型，通过采用蛭蛇通络胶囊3个组分及全方肠吸收液预处理24 h，结果表明全方、组分1和组分2均能提高细胞生存率，以全方最佳，其次为含人参、黄芪、天麻、丹参和葛根的组分1。OGD损伤SH-SY5Y细胞内LDH释放增多，SOD活性降低，MDA水平升高。蛭蛇通络胶囊全方和组分1均能抑制细胞内LDH释放，升高SOD活性，降低MDA水平，抑制氧化应激。本研究表明氧化应激在神经细胞损伤中发挥重要作用，抑制氧化应激可以发挥一定程度的神经保护作用。

中药可通过多成分作用于多环节的不同靶点，从而产生协同增效。中药的作用优势在于各单一药效的整合调节，构成中药的活性成分群按照配伍组合，通过多靶点、多途径、协同发挥整合药效表征[26]。本研究通过制备工艺路线将蛭蛇通络胶囊复方快速简便拆方，研究其体外药理活性，辨识各药效的主要成分，旨在为中药复方的功效物质基础提供研究范例。研究结果证实蛭蛇通络胶囊能清除DPPH自由基，发挥抗氧化作用，且含人参、黄芪、天麻、丹参和葛根的组分1最佳；蛭蛇通络胶囊能拮抗血小板凝集，抑制血栓形成，改善血液循环，且以含水蛭、乌梢蛇和红花的组分2最佳，但其抗氧化和抗凝血的有效成分和具体机制仍需进一步深入研究。