鸡蛋中氟苯尼考残留规律的探讨

朱勇， 李永华

(1.宁波市农业科学研究院，浙江 宁波 315040； 2.宁波市农业农村局，浙江 宁波 315000)

氟苯尼考(florfenicol)作为常规药物，别称氟甲砜霉素，是氯霉素类第3代广谱抗菌药物[1]，氟苯尼考胺是最主要的代谢产物[2]。在禽类养殖中氟苯尼考主要用于防治大肠埃希氏菌及传染性浆膜炎等敏感菌所致疾病，有较强的抗菌活性，对耐氯霉素和甲砜霉素的大肠埃希氏菌、沙门氏菌及克雷伯菌也有良好抗菌作用[1]。根据《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》[3]的规定，家禽肌肉中氟苯尼考检出限量为100 μg·kg-1，产蛋期禁用。虽然产蛋期禁用理解为鸡蛋中不得检出氟苯尼考还存在争议，但是日常监管中一般以鸡蛋中氟苯尼考不得检出为判断依据。

根据农业农村部、市场监管总局、公安部、最高人民法院、最高人民检察院、工业和信息化部、国家卫生健康委等七部门的《食用农产品“治违禁控药残促提升”三年行动方案》[4]，鸡蛋是重点治理品种，而氟苯尼考(含氟苯尼考胺)是宁波地区鸡蛋不合格的重要原因之一。本研究根据宁波蛋鸡养殖习惯投喂氟苯尼考，在蛋鸡开产前、开产后额外投喂氟苯尼考，模拟蛋鸡养殖过程中正常用药与违规用药行为，检测用药后的鸡蛋中氟苯尼考(含氟苯尼考胺)的含量，分析残留规律，为养殖户制定合理的弃蛋期，为政府监管鸡蛋质量安全提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验仪器

LC-MS/MS(Waters)，色谱柱LeapsilC18(2.1×150 mm，2.7 μm)，匀质器(IKA T25)，高速离心机(Sigma 3K15)，恒温振荡器(IKA KS 4000ic)，旋涡混合器(IKA GENIUS3)，以及离心管、电子天平等。

1.2 试剂和材料

乙腈、甲醇(色谱纯，美国默克公司)；乙酸铵(99.99%，阿拉丁公司)；氨水(优级纯，国药集团化学试剂有限公司)：乙酸乙酯(色谱纯，美国天地试剂公司)；氟苯尼考和氟苯尼考胺标准物质(Dr.Ehrenstorfer)；氟苯尼考-D3和氟苯尼考胺-D3内标(TRC)。

1.3 养殖基地及试验动物品种

养殖基地在宁波市镇海岳军特种养殖场，蛋鸡品种为北京市华都峪口禽业有限责任公司培育的京红1号。

1.4 试验药物

试验所用氟苯尼考药物采购于当地农资店。先后使用了2家公司生产的药物，分别为浙江伊科拜克动物保健品有限公司(每袋1 kg，含量10%)和义乌双峰药业有限公司(每袋100 g，含量20%)。

1.5 蛋鸡养殖用药试验

该批试验蛋鸡2021年6月30日为1日龄。按养殖基地日常饲养蛋鸡方式进行养殖，进行常规的用药和打疫苗。雏鸡阶段用药1次，连续用药4 d(7月22—25日)，将160 g氟苯尼考(浙江伊科拜克动物保健品有限公司生产)混入200 kg水中(实际浓度0.08 g·kg-1)，雏鸡通过饮水，将药物带入体内。育成期用药2次，每次连续用药4 d(9月9—12日，10月24—27日)，将400 g氟苯尼考(义乌双峰药业有限公司)混入400 kg水中(实际浓度0.2 g·kg-1)，小鸡通过饮水，将药物带入体内。正常养殖蛋鸡，此后不再使用氟苯尼考，以遵照GB 31650—2019规定，产蛋期禁止使用氟苯尼考。

本研究模拟2类违规用药情况，分别是开产前用药和开产后用药，试验浓度分3档，中浓度为兽医推荐使用浓度。

在开产前模拟用药1次，连续用药4 d(11月19—22日)。在正常养殖蛋鸡中随机选择63只，分低、中、高3档，每档各21只，分开笼养。按50、100、150 kg饲料中均加入100 g氟苯尼考粉(义乌双峰药业有限公司)浓度比例，形成高、中、低3类试验浓度(实际浓度为2、1、0.67 g·kg-1)，将药物加入2 kg饲料中，给高、中、低各档(21只)蛋鸡喂食。在开产后模拟用药1次，连续用药4 d(12月20—23日)。再次在正常养殖蛋鸡中选择63只，形成高、中、低3档，每档各21只，分开笼养。按50、100、150 kg饲料中均加入100 g氟苯尼考粉(义乌双峰药业有限公司)浓度比例，形成高、中、低3类试验浓度(实际浓度2、1、0.67 g·kg-1)，将药物加入2 kg饲料中，给高、中、低各档(21只)蛋鸡喂食。

用药后的鸡蛋按高、中、低3类分类进行收集，收集的鸡蛋全部匀浆进行检测，直至含量低于检出限，停止收集。

1.6 检测方法

1.6.1 样品前处理

将收集的鸡蛋全蛋匀浆，称取新鲜匀浆后鸡蛋样品5 g置于50 mL离心管中，加入内标20 μL(1 mg·kg-1)后，加入15.0 mL乙酸乙酯和0.5 mL氨水，匀浆，振荡30 min后离心5 min，残渣再加入15 mL乙酸乙酯和0.5 mL氨水(洗刀头)重复提取，合并提取液，取12 mL氮吹，用甲醇水溶液(水∶甲醇=9∶1)定容至1 mL，冷冻离心13 000 r·min-1、10 min，过0.22 μm滤膜后供LC-MS/MS测定。

1.6.2 标准溶液配制

标准溶液配制浓度氟苯尼考、氟苯尼考胺均为0.020 0 mg·L-1。

1.6.3 检测条件

色谱条件。色谱柱为LeapsilC18 (2.1 mm×150 mm，2.7 μm)，柱温40 ℃，样品室温度10 ℃，进样体积10 μL，流动相为10 mmol·L-1的乙酸铵溶液(A)和乙腈(B)。

梯度洗脱程序。0～1.0 min，流动相A∶B为9∶1；1.0～4.0 min，流动相A∶B为3∶7；4.0～5.2 min，流动相A∶B为0∶100；5.2～7.5 min，流动相A∶B为9∶1。流速保持稳定均为0.3 mL·min-1。

质谱条件。电喷雾离子源；正离子扫描模式；电离电压0.5 kV(氟苯尼考胺)；负离子扫描模式；电离电压-2.5 kV(氟苯尼考)；雾化气流速1 000 L·h-1；锥孔气流速50 L·h-1；离子源温度150 ℃；雾化温度500 ℃；氟苯尼考母离子为356.1(m/z)，子离子为184.96(m/z，定量)、335.98 (m/z)，驻留时间0.059 s，锥孔电压28 V，碰撞电压20 eV；氟苯尼考胺母离子为248.1 (m/z)，子离子为130.14(m/z，定量)、117.86(m/z)、91.01(m/z)，驻留时间0.059 s，锥孔电压42 V，碰撞电压根据上述子离子分别为20、36、44 eV。

2 结果与分析

2.1 雏鸡、育成期用药药物残留及消解规律

正常蛋鸡养殖时，在雏鸡、育成期阶段都会用药，最后一次用药在育成期(10月27日)，间隔22日之后，开始陆续下蛋。研究组于11月18—21日随机选择开产前阶段下的10枚蛋为1个批次进行检测，均未检出氟苯尼考和氟苯尼考胺。一般鸡蛋均选择开产后能稳定供应才进行商品买卖。所以，按照正常的养殖方式，在雏鸡阶段、育成期阶段用药，不会对正常商品蛋产生影响。

2.2 开产前用药药物残留及消解规律

11月18—21日对开产前的蛋鸡进行用药试验。随着用药的进行，鸡蛋中同时能检出氟苯尼考和氟苯尼考胺，且浓度递增。在用药停止后第1天(22日)达到峰值，高浓度用药的氟苯尼考为1.07×103μg·kg-1，氟苯尼考胺为318 μg·kg-1，随后下降。第6天氟苯尼考为55.5 μg·kg-1，首次降至100 μg·kg-1以下，此时氟苯尼考胺也降至71.0 μg·kg-1；第11天氟苯尼考降至1 μg·kg-1以下，为0.469 μg·kg-1，氟苯尼考胺第一次未检出；第16天氟苯尼考第一次未检出(<0.1 μg·kg-1)。数据详见表1。由于中、低浓度处理的蛋鸡未能在用药结束后立刻产蛋，故数据无法体现整个过程，最早产蛋为第5天，浓度明显低于高浓度处理同一天的数据。用药的第8天，中低浓度处理的氟苯尼考含量降至1 μg·kg-1以下，氟苯尼考胺第一次未检出(<1 μg·kg-1)；第12天氟苯尼考第一次未检出(<0.1 μg·kg-1)。数据详见表1。

表1 开产前用药鸡蛋中药物残留情况

在停药后，鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺含量随着时间逐渐减少，蛋鸡在开产前按药品推荐浓度用药，从试验的中低浓度用药的情况看，第12天鸡蛋中未检出氟苯尼考；如果用药浓度高于推荐值，则大约需要15 d。从模拟的用药浓度看，大约需要半个月(2周)的时间鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺才都未检出，符合安全要求。

由于开产后用药试验未做，故一直对产下的鸡蛋进行收集，发现在鸡蛋合格的15～19 d后，又重新检出来氟苯尼考(未检出氟苯尼考胺)，含量均低于0.5 μg·kg-1，基本在0.1～0.2 μg·kg-1，含量较低。这次氟苯尼考的出现，将间隔期延长至用药结束后的40 d才能安全。这与陈大伟等[5]的研究相同，残留消解规律存在个别不确定性。

2.3 开产后用药药物残留及消解规律

12月20—23日连续4 d对开产后的蛋鸡进行用药试验。由于开产后蛋鸡已经稳定产蛋，3个试验浓度均能采集鸡蛋。从检测的结果看，不同浓度处理的氟苯尼考(氟苯尼考胺)含量随时间推移均呈下降趋势。数据详见表2。氟苯尼考含量降至100 μg·kg-1以下，低、中、高浓度组分别需要2、3、6 d时间；降至1 μg·kg-1以下，低、中、高浓度组均用了10 d时间，此时氟苯尼考胺也降至1 μg·kg-1(未检出)；氟苯尼考含量降至0.1 μg·kg-1以下，低浓度组需要11 d，中浓度组需要12 d时间，高浓度组需要19 d的时间。此外，消解规律的个别不确定性又在高浓度组出现，第15、16天的2次检测结果短暂的出现未检出后，又在第17、18天陆续检出，第19天后一直未检出。

表2 开产后用药鸡蛋中药物残留情况

3 小结

正常养殖方式下，在雏鸡阶段和育成期使用氟苯尼考不会对开产后的商品鸡蛋质量安全产生影响。在本研究用药条件下，开产前蛋鸡生病需要使用氟苯尼考，最好能做到40 d的安全间隔期，才能将所产鸡蛋作为商品蛋供应市场，以确保鸡蛋的质量安全；开产后蛋鸡生病需要使用氟苯尼考，用药结束后，为确保鸡蛋的质量安全，至少要做到20 d的弃蛋期，才能将所产鸡蛋作为商品蛋供应市场。