化浊解毒汤对糖尿病周围神经病变小鼠神经电生理水平的影响

刘国安 黎卫东

(1.江西省余干县人民医院泌尿外科，江西 余干 335100；2.江西省余干县人民医院中医内科，江西 余干 335100)

随着生活习惯、饮食结构等因素变化，糖尿病发生率持续升高，糖尿病周围神经病变(DPN)发生率也随之升高。DPN是糖尿病的常见并发症，由于患者在持续血糖升高状态下，引起神经缺氧缺血，加上氧化应激反应、糖脂代谢紊乱等因素作用，导致神经阻滞，造成神经纤维髓鞘受损，从而引起神经感觉障碍。如果未得到有效救治，可导致患者残疾或者死亡[1]。据报道，DPN患者占全部糖尿病患者的55%～85%[2，3]。本病严重降低了糖尿病患者的生活质量，患者病情迁延，久病不愈。对于本病，临床往往采用控制血糖，改善微循环，改善代谢紊乱的方法治疗，常见的药物含有醛糖氧化还原酶抑制剂、血管扩张剂、抗氧化剂，能够在一定程度上控制病情，然而远期效果不佳，而且不良作用多[4]。中医在治疗糖尿病上具有丰富经验，DPN属中医学“消渴”“痹证”范畴，以养血通脉、湿经散寒、健脾补肾、清热解毒为治疗原则[5]。化浊解毒汤具有活血化瘀、清热解毒及健脾补肾的功效，让患者脏腑功能健旺，在糖尿病及相关并发症中有相关应用报道，但是其作用机制尚未明确。本文探究了化浊解毒汤对糖尿病周围神经病变小鼠神经电生理水平的影响，现详细报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物 选取20只SPF级db/db雄性小鼠(30～40 g)及10只db/m小鼠进行研究，全部小鼠都来源于北京华阜康生物公司，动物合格证号：SCXK-(京)2009-0004。在余干县实验动物中心SPF级动物饲养环境中喂养。动物饲养环境：屏障系统内饲养，室温20～26 ℃，相对湿度40%～70%，12 h/12 h昼夜光亮明暗交替。使用实验动物许可证号：SYXK(川)2017-204。饲料：鼠全价饲料，在成都达硕购买。饮水：灭菌水，盛入饮水瓶中供动物自由饮用。

1.2 药品及试剂

1.2.1 药品 化浊解毒汤：黄芪30 g，黄精30 g，川芎15 g，丹参15 g，泽泻15 g，虎杖30 g，金银花30 g，黄连12 g，玄参15 g，枸杞子15 g。用法：余干县人民医院统一制备成密封包装，200 mL/袋，每次1袋。

1.2.2 试剂 低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C，批号：20200803120)、总胆固醇(TC，20200803120)、三酰甘油(TG，20200803120)试剂盒均来源北京世纪沃德生物科技有限公司；还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)均为上海恪敏生物科技有限公司。转化生长因子β1(TGF-β1)、核因子-κB(NF-κB)ELISA 试剂盒均为南京建成生物研究所产品。

1.3 动物模型复制 给予7 d适应性饲养，随机取db/db小鼠、db/m小鼠各10只。禁食12 h，称体质量，通过腹腔注射方式给予30 mg/kg链脲佐菌素(对照组给予缓冲盐溶液)复制高血糖模型，在0.5 h内注射结束。收集24 h 尿液测尿微量白蛋白，db/db小鼠出现微量蛋白尿且明显高于db/m小鼠时，则被认为是DPN小鼠造模成功。

1.4 分组与给药 分组：10只db/db 小鼠、10只db/m 小鼠全部造模成功后，观察无异常则按体质量顺序从高到低依次编号1～20，随后按数字排序法将20只DPN小鼠分为2组(模型组、化浊解毒汤组各10只)。对照组的10只db/m小鼠亦用此法编号。

给药：化浊解毒汤组、模型组都给予高脂饲料，化浊解毒汤组开始给药。化浊解毒汤组给予灌胃化浊解毒汤，对照组及模型组灌胃给予等体积的水，每日灌胃1次，持续灌胃12周。

1.5 观察指标

1.5.1 血糖血脂指标 在第6周、12周禁食12 h后，给予小鼠乙醚麻醉，取小鼠眼底静脉丛血液，将血样分装在已有肝素钠的EP管中。放置在4 ℃冰箱中保存，转速3000 r/min(离心半径12 cm) 离心 15 min，取血清，严格按照试剂盒操作检测，利用酶标仪检测对应波长下的吸光度，检测血糖血脂指标(HDL-C、TG、TC、FBG)水平。

1.5.2 氧化应激指标 分离血浆后，严格按照试剂盒操作检测，利用酶标仪检测对应波长下的吸光度，检测氧化应激指标(SOD、TGF-β1、NF-κB、GSH)水平。

1.5.3 各组痛觉阈值 痛觉阈值指的是把实验小鼠放在热板仪(恒温55 ℃)上，观察小鼠舔后足反应的潜伏期。

1.5.4 各组小鼠神经电生理水平 参考《实用肌电图学》[6]监测，最后1次给药后，给予各组小组戊巴比妥钠麻醉，连接Power Lab生理记录仪。感觉神经传导速度(SNCV)：把刺激电极放在实验小鼠右侧足背部位，记录电极在近端坐骨切迹处的电位；运动神经传导速度(MNCV)：把电极插入同侧坐骨切迹处，把2个记录电极插入左侧足底第二趾间及足踝部位，记录双通道复合动作电极，时间间隔1 min，重复测量3次。SNCV等于记录电极与刺激电极距离或者潜伏期；MNCV等于电极间距。

2 结果

2.1 3组小鼠血糖及血脂水平对比 与对照组相比，6周、12周后模型组小鼠血清LDL-C、FBG、TG、TC水平显著提高(P<0.05)，化浊解毒汤组血清LDL-C、FBG、TG、TC水平低于模型组(P<0.05)。见表1。

2.2 3组小鼠氧化应激指标水平对比 与对照组相比，6周、12周时模型组小鼠SOD、TGF-β1、NF-κB水平显著提高，GSH 水平降低(P<0.05)；化浊解毒汤组小鼠SOD、TGF-β1、NF-κB水平较模型组低，GSH 水平较模型组高(P<0.05)。见表2。

表1 3组糖尿病周围神经病变小鼠血糖及血脂水平对比

表2 3组糖尿病周围神经病变小鼠氧化应激指标水平对比

2.3 3组小鼠神经电生理水平及痛觉阈值对比 6、12周后模型组小鼠SNCV、MNCV、痛觉阈值水平显著下降(P<0.05)，化浊解毒汤组小鼠SNCV、MNCV、痛觉阈值水平较模型组高，成模12周化浊解毒汤组小鼠SNCV、MNCV、痛觉阈值水平较成模6周时高(P<0.05)。见表3。

表3 3组糖尿病周围神经病变小鼠神经电生理水平及痛觉阈值对比

3 讨论

DPN疾病具有躯干、四肢远端疼痛及麻木的临床表现，现阶段神经电生理水平仍然是本病诊断标准之一。研究[7]发现，动物及糖尿病患者在血糖持续升高状态时神经传导速度明显变缓，而血糖有效控制后，神经传导速度提高。因此，早期改善神经电生理水平对于DPN疾病防治具有重要作用。

DPN疾病发生本为脾肾亏虚，标为痰瘀蕴结，血瘀及痰湿是致病因素及病理产物，治疗过程中不能忽视化痰活血，因此主张健脾补肾、化痰活血[8，9]。化浊解毒汤中重用生黄芪，补益脾气；黄精能够健脾补肾，二者均为君药，具有益气补脾功效[10]。毒、瘀、痰、湿郁结在脉中，因此以川芎、虎杖、黄连为臣药，川芎祛瘀活血，虎杖能清热解毒、化痰、利湿，黄连清热燥湿，三者配合具有利湿化痰、活血散瘀的功效[11]。玄参、丹参、泽泻、金银花、枸杞子为佐药，其中金银花清热解毒，枸杞子补肾，与黄精配合能进一步补肾。诸药合用，具有活血化痰、清热解毒、健脾补肾的功效[12]。本次研究中，造模小鼠具有多饮、多尿等特征，具有DPN疾病特点，模型组小鼠SNCV、MNCV、痛觉阈值水平显著下降，给予灌注化浊解毒汤后，12周时小鼠SNCV、MNCV、痛觉阈值水平显著提高，治疗6、12周后化浊解毒汤组LDL-C、FBG、TG、TC水平低于模型组(P<0.05)，这提示灌注化浊解毒汤能够显著提高神经电生理水平，有效防治DPN，控制血糖及血脂水平。

糖尿病持续升高的高血脂、高血糖可引起及加重氧化应激，导致抗氧化与氧化失去平衡，形成较多的自由基，加重炎症反应，而炎症反应与糖尿病病情紧密相关。SOD能够减少及清除过氧化物，将过氧化物转变为水和氧化氢，减少自由基。GSH 活动能够抑制DNP发展，NF-κB能够有效调节炎症反应，TGF-β1是DPN疾病进展的核心因子。因此检测SOD、TGF-β1、NF-κB、GSH 水平能够评估DPN疾病病情。本次研究中，化浊解毒汤组小鼠SOD、TGF-β1、NF-κB水平较模型组低，GSH 水平较模型组高(P<0.05)。这提示，化浊解毒汤在糖尿病周围神经病变小鼠中应用，能够改善氧化应激，与既往研究[13]一致。

综上所述，化浊解毒汤在糖尿病周围神经病变小鼠中应用，能够控制血糖、血脂，提高神经电生理水平及痛觉阈值，其作用机制可能与改善氧化应激有关。