不同检测技术对输血前患者血型及红细胞不规则抗体的检测价值

李静，王翠香

(商丘市第一人民医院 a.输血科；b.神经外一科，河南 商丘 476100)

输血治疗是改善患者血液循环、提高血浆蛋白及增强免疫力的重要治疗手段，在治疗重症感染、低蛋白血症等疾病中有重要意义。输血安全是输血治疗的前提，准确的血型鉴定及交叉配血有重要作用，可降低输血不良反应发生率，保障患者生命安全[1]。因此，输血前对患者血型及不规则抗体进行检测有重要意义。目前临床对于患者血型及红细胞不规则抗体主要采取卡式微柱凝胶法、凝聚胺法两种检测技术，其中卡式微柱凝胶法是通过调节葡聚糖凝胶浓度，控制分子孔径大小，以此分离凝聚及游离红细胞，达到检测鉴别目的[2-3]。而凝聚胺法可促进红细胞抗原与血清中抗体发生特异性凝聚，从而检测患者血型及不规则抗体[4]。目前临床对于两种技术对输血前患者的血型及红细胞不规则抗体检测优劣尚未明确，鉴于此，本研究着重分析卡式微柱凝胶法、凝聚胺法两种检测技术对输血前患者血型及红细胞不规则抗体的检测价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料本研究经商丘市第一人民医院医学伦理委员会批准，收集2018年12月至2021年12月于商丘市第一人民医院接受输血治疗的140例患者临床资料。患者中男82例，女58例；年龄34～47(40.50±2.07)岁；体质量指数20～27(23.40±1.05)kg·mg-2；输血原因为骨折48例(34.29%)，大面积烧伤29例(20.71%)，宫外孕大出血28例(20.00%)，贫血35例(25.00%)；血型为A型44例(31.43%)，B型46例(32.86%)，O型42例(30.00%)，AB型8例(5.71%)；恒河猴(Rhesus Macacus，Rh)血型均为阳性；红细胞不规则抗体为抗-c 1例(0.71%)，抗-E 1例(0.71%)，抗-D 1例(0.71%)。

1.2 入选标准纳入标准：(1)意识清晰，精神正常；(2)初次接受输血治疗；(3)临床资料完整。排除标准：(1)免疫功能抑制；(2)严重肝、肾功能不全；(3)合并严重血液疾病；(4)合并严重凝血功能障碍；(5)近期行重大手术；(6)近期使用抗凝剂。

1.3 研究方法输血前所有患者均于清晨空腹时使用一次性真空采血管(德山积水工业株式会社，国械注进20172411829)采集外周肘静脉血5 mL，分别使用卡式微柱凝胶法、凝聚胺法检测。

1.3.1卡式微柱凝胶法 使用ABO、Rh血型检测卡(盖立复诊断股份公司，国械注进20173402160)进行标记，采用低离子溶液将对3种谱红细胞进行配比，浓度为0.5%～0.8%，分别加入标记好的微管中，各50 μL。使用离心机TDZ5-WS(湖南湘智，湘长械备20140072号)离心(转速3 000 r·min-1，离心15 min，离心半径10 cm)取血浆，并分别于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ孔中加入50 μL血浆，在对应孔中加入50 μL Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ不规则抗体谱查细胞(Ortho-Clinical Diagnostics，国械注进20173401913)，随后放入试剂卡孵育器FYQ(英泰，湘长械备20160151)中37 ℃孵育15 min，900 r·min-1离心2 min，500 r·min-1离心3 min，取出。根据谱红细胞反应格局判定结果，红细胞完全沉降于凝胶管底部，则为阴性，交叉配血匹配相合；红细胞凝聚块位于凝胶表面或凝胶中断，则为阳性，交叉配血不相合。

1.3.2凝聚胺法 使用凝聚胺试剂盒(力博医药生物技术，国械注准20143402381)，将3支相同试管(Becton Dickinson and Company，国械注进20162220731)分别标记为主测管、次测管及对照管。主测管：取1滴献血者3%～5%红细胞滴入输血者血浆中。次测管：取1滴输血者3%～5%红细胞滴入献血者血浆中。对照管：取1例献血者3%～5%红细胞滴入阳性对照血浆中。分别在试管中滴入0.65 mL低离子溶液，混合均匀后，分别于室温下静置1 min，各试管滴入2滴凝聚胺溶液混匀后3 400 r·min-1离心1 min，取0.1 mL上清液，观察红细胞是否出现凝聚反应，如无凝聚则重新操作，各试管加入重悬液2滴，轻摇试管查看凝聚是否在1 min内散开，凝聚保留者则为阳性反应，交叉配血不相合，否则为阴性，交叉配血相合。两种技术ABO、RhD血型鉴定均按照试剂盒说明书进行操作。

1.4 评价指标(1)ABO血型及Rh血型一次准确率。(2)红细胞不规则抗体检出率。

2 结果

2.1 ABO血型及Rh血型一次准确率卡式微柱凝胶法检测正确139例，其中A型44例，B型46例，O型41例，AB型8例；凝聚胺法共检测正确132例，其中A型41例，B型44例，O型39例，AB型8例；卡式微柱凝胶法对ABO血型及Rh血型一次准确率高于凝聚胺法(P<0.05)。见表1。

表1 两种检测方法对ABO血型及Rh血型一次准确率比较(n，%)

2.2 红细胞不规则抗体检出率卡式微柱凝胶法共检出不规则抗体阳性3例，其中抗-c 1例，抗-E 1例，抗-D 1例，凝聚胺法检出1例抗-E不规则抗体阳性，两组差异不规则抗体检出率比较，差异无统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两种检测方法对红细胞不规则抗体检出率比较(n，%)

3 讨论

目前临床对于大量失血患者主要采取输血治疗，可有效挽救患者生命，但当献血者红细胞与患者血液中免疫抗体不相合时，则可导致严重的输血反应，造成患者血管内栓塞，诱发心血管疾病，严重威胁患者生命安全[5]。因此，输血前检测患者血型并进行红细胞不规则抗体筛查十分必要。传统输血检测方法如盐水法，在试管中滴入1滴输血者血清及1滴献血者红细胞悬液，混匀后沉淀2 min，轻轻摇匀即可观察结果，具有简单便捷的优势，但盐水法只能检出不相合的完全抗体，无法检出不配合的不完全抗体，而临床抗体多为免疫球蛋白G(immunoglobulin G，IgG)单倍体，可导致患者出现免疫溶血反应，威胁患者生命安全[6]。因此，临床仍需寻找更加安全有效的检测方法。

卡式微柱凝胶法属于免疫学检测技术，通过凝胶分子的筛选作用，利用离心力通过凝胶间隙分离凝聚红细胞，从而判读结果，具有操作简单，试剂、样本定量的优势，减少人为因素干预，提高准确性[7]。凝聚胺法可利用低价离子介质破坏红细胞表面负电荷使红细胞凝聚在一起，凝聚胺法具有重复性好、不需要特殊仪器的优势，适用性较广[8]。目前临床对于两者优劣尚无定论，因此本研究着重分析卡式微柱凝胶法、凝聚胺法两种检测技术对输血前患者血型及红细胞不规则抗体的检测价值，以提升临床输血患者安全性。

ABO血型是根据红细胞有无特异性抗原A、B进行划分，可分为A、B、AB及O型，输血时如血型不合，则可导致严重的不良反应，如急性溶血反应及迟发性反应等，均可严重威胁患者安全，甚至导致患者死亡[9]。Rh血型可根据患者红细胞是否存在D型抗原，分为阴性与阳性，有D型抗原，则为Rh阳性，其临床意义仅次于ABO系统，对预防溶血性输血反应有重要意义[10]。因此，有效鉴定患者ABO血型及Rh血型对患者输血安全有重要意义。同时本研究结果显示，卡式微柱凝胶法ABO血型及Rh血型一次准确率均高于凝聚胺法，表明卡式微柱凝胶法对输血患者血型检测准确性更佳。卡式微柱凝胶法能够通过控制聚葡糖凝胶浓度调整分子筛孔径大小，并与系统调控的离心速度相配合，通过调整孔径大小，每次只允许1个红细胞通过，更利于临床观察红细胞凝结情况，提升检测效果[11]。相关研究显示，卡式微柱凝胶法相较于传统检验方法，可高出1～5个滴度[12]。同时卡式微柱凝胶法操作过程可标准化，定量试剂及样本，具有标记方便，结果易判读的优势，能够降低人为干预造成的误判，提高检测准确性。而凝聚胺法自动化程度较低，缺乏标准化操作流程，同时最低检验限较高，可能影响检测准确度。

人体血清中除抗-A、抗-B是天然存在的特有红细胞抗体外，还存在部分红细胞意外抗体，当机体受到妊娠、输血、移植等刺激时均可引起针对红细胞抗原的免疫反应[13]。抗-c、抗-C、抗-e等均属于IgG抗体，IgG抗体属于温抗体类型，IgG抗体可诱发迟发性溶血性输血反应，同时输血反应与IgG效价的强度有直接关系[14]。因此，有效筛查输血患者红细胞不规则抗体，对患者输血安全有重要意义。本研究结果显示，两种技术对输血患者红细胞不规则抗体检出率比较差异无统计学意义，但卡式微柱凝胶法检出率仍高于凝聚胺法。凝聚胺法可缩短细胞间距，使红细胞发生可逆性聚集，并使用重悬液中和凝聚胺效果，但对抗原抗体间凝聚无效，从而鉴别患者血型及不规则抗体[15]。同时凝聚胺法的凝聚现象多为不规则抗体引起的凝聚，多发生在次测，对检测红细胞不规则抗体有重要作用，但凝聚胺法结果通过轻摇试管观察凝聚现象，主观性较强，且相关研究显示，凝聚胺法可能检测不到部分抗体，如抗-JKa及抗-K等，从而影响输血患者不规则抗体检出率[16]。而卡式微柱凝胶法的结果肉眼即可判断，且结果稳定，重复性较好，同时其标准化操作，减少样本用量，并可通过多次操作，提高检出率。

综上所述，卡式微柱凝胶法、凝聚胺法两种检测技术对输血前患者血型及红细胞不规则抗体均有较好检测价值，但卡式微柱凝胶法在血型检测中效果更好。多次输血是产生红细胞不规则抗体的重要原因，但本次研究患者均为初次输血者，未来可纳入多次输血患者，进一步验证两种检测技术对输血患者红细胞不规则抗体的检测价值。