老年人群血清CircRNA_0003391 表达水平与轻度认知功能障碍的关系

王景，董坤，黄优，陈海恋，林兆信，何超明

（三亚中心医院/海南省第三人民医院院神经内科，海南 三亚 572000）

0 引言

轻度认知功能障碍（mildcognitive impairment,MCI）是老年人发生痴呆和致残的主要原因之一，也是全球面临的重大公共健康问题之一[1]。因此，寻找与老年MCI发病相关的生物学标志物，对其早期预防和干预具有重要的临床意义。环状RNA（circular RNA,CircRNA）是近年来国内外研究的热点之一，参与调节神经细胞的增殖、分化和凋亡过程，对神经系统疾病的发生发展、损伤后修复有着重要的调节作用，有望成为MCI诊断的潜在标志物[2-3]。近年来研究发现，CircRNA_0003391参与神经系统的发育和信号传递，调控大脑复杂的功能和多种神经活动，在神经系统疾病中发挥了极其重要的作用，有望成为MCI的重要诊断指标和治疗靶点[4]。然而，关于CircRNA_0003391与老年MCI的相关性尚未清楚。为此，本研究通过检测老年人群血清CircRNA_0003391表达水平，分析CircRNA_0003391表达水平与老年MCI的关系，旨在为老年MCI的早期筛查及靶向治疗提供帮助。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2019年1月至2021年12月在我院体检的老年人群250例作为研究对象，进行MCI的筛查和诊断。纳入标准∶（1）MCI诊断参考《轻度认知障碍的诊断与治疗（2018年）》[5]中的相关标准；（2）年龄≥65岁，无脑部手术史，临床基线资料完整。排除标准：（1）合并脑外伤及其他脑血管疾病；（2）存在其他神经系统疾病、昏迷或精神异常。本研究经我院伦理委员会批准，并与研究对象签署知情同意书。

1.2 调查方法

由统一培训的调查员进行一对一问卷调查，调查内容包括性别、年龄、基础疾病、体质指数（BMI）、文化程度、居住地、婚姻、社交活动、睡眠状况、生活习惯、空腹血糖（FPG）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）等。

1.3 观察指标

采集研究对象血标本3 mL，3500 r/min离心10 min（离心半径13.5 cm），分离血清置于-70℃冰箱保存待测，应用实时荧光定量聚合酶链反应（real time PCR,RT-PCR）技术检测CircRNA_0003391，反应条件为：95℃变性30 s、60℃退火30 s、72℃延伸60 s，共40个循环。以甘油醛3-磷酸脱氢酶（GAPADH）为内参基因，采用2-△△Ct法计算CircRNA_0003391表达水平。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 老年人MCI患病率

本次调查的250 例65 岁以上的老年人中，男性153 例，女性94 例，年龄65～86（73.80±8.52）岁。最终确诊MCI 患者71 例，男性46 例，女性25 例，年龄67～86（77.35±8.24）岁，MCI患病率为28.4%（71/250）。250例老年人根据发生MCI情况分为71例MCI组和179例正常无认知功能障碍组（非MCI组）。

2.2 MCI组和非MCI组一般资料比较

MCI组和非MCI组的年龄、糖尿病史、高血压史、文化程度、体育锻炼、阅读习惯及社交活动比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 MCI 组和非MCI 组一般资料比较

续表1

2.3 MCI组和非MCI组血清CircRNA_0003391表达水平比较

MCI组血清CircRNA_0003391表达水平为0.21±0.05，明显低于非MCI组0.94±0.36，差异有统计学意义（t=11.528，P＜0.001）。见图1。

图1 MCI 组和非 MCI 组血清CircRNA_0003391 表达水平比较

2.4 血清CircRNA_0003391表达水平预测老年MCI的价值

血清CircRNA_0003391表达水平预测认知功能障碍的最佳临界值为0.46，其曲线下面积为（AUC=0.825，95%CI：0.764～0.886），敏感度为81.6%，特异度为79.5%。见图2。

图2 血清CircRNA_0003391 表达水平预测老年MCI 的ROC 曲线

2.5 多因素Logistic回归分析影响老年MCI发生的危险因素

以是否发生MCI为因变量，将有统计学差异的影响因素（年龄、糖尿病史、高血压史、文化程度、体育锻炼、阅读习惯、社交活动及CircRNA_0003391表达水平）为自变量，进行多因素Logistic回归分析显示，高龄（OR=1.694，95%CI：1.187～3.105）、糖尿病史（OR=1.672，95%CI：1.138～2.824）、文化程度低（OR=2.105，95%CI：1.734～4.308）及CircRNA_0003391水平＜0.46（OR=2.236，95%C I：1.841～5.310）是影响老年MCI发生的危险因素（P ＜0.05），而体育锻炼（OR=0.618，95%CI：0.530～0.725）、阅读习惯（OR=0.734，95%CI：0.629～0.917）及社交活动（OR=0.671，95%CI：0.552～0.806）是老年MCI的保护因素（P＜0.05）。见表2。

表2 多因素Logistic 回归分析影响老年MCI 发生的危险因素

3 讨论

MCI是指各种原因导致轻度的认知功能损害，在老年人中发病率较高，严重影响老年人的生命健康和生活质量，加重了家庭的心理和经济负担。随着我国人口老龄化速度的加快，MCI的发病率呈逐年增高的趋势。因此，寻找MCI早期诊断和靶向治疗的分子标志物是当前研究的重点课题。CircRNA是一类重要的内源性RNA，具有高度的保守性和组织特异性，在神经系统中高表达，尤其在脑组织中表达丰富，有望成为神经系统疾病的重要诊断指标和治疗靶点[6]。以往的研究表明，CircRNA在中枢神经系统中含量极其丰富，是神经疾病发生发展的重要调节因子，并通过复杂机制参与脑血管疾病的病理生理过程，故CircRNA在MCI诊疗方面有着广阔的前景[7-8]。另有研究认为，CircRNA作为一种新型的非编码RNA，在中枢神经系统疾病中存在显著差异性表达，有很大潜力作为MCI诊断和治疗的生物标志物[9]。

本次调查的250例65岁以上的老年人中，MCI患病率为28.4%，与国内研究结果[10]接近。本研究MCI组血清CircRNA_0003391表达水平明显低于非MCI组，提示CircRNA_0003391低表达可能参与MCI的发生发展。Gao等[11]研究指出，CircRNA在大脑中差异性表达，参与神经发育、组织分化和神经突触形成等多种生物学过程，是认知功能障碍发生发展的重要标志物。本研究显示，高龄是影响老年人发生MCI的危险因素，与以往的研究结果[12]一致。这主要是老年人随着年龄的增大，脑白质降低使得个体在执行、信息加工等功能出现损伤，加重神经衰弱，从而导致MCI发生的风险增加。老年糖尿病患者更易发生MCI，可能与胰岛素抵抗和胰岛素信号通路改变有关[13]。文化程度低也是影响老年MCI发生的因素之一，与廖婷婷等[14]研究结果相同。文化程度可能影响脑功能区和左下额皮质厚度发育，文化程度越低的老年人脑储备的信息量越少，使得接收、处理、传递信息的速度变慢，加快了脑萎缩的速度，进而更容易发生MCI。本研究阅读习惯及社交活动是老年MCI的保护因素，这可能是积极的阅读习惯、社会参与有助于老年人进行有效的人际交往和获得社会支持，促进大脑功能运转，延缓脑萎缩，从而降低MCI发生。体育锻炼促进积极的神经可塑性，增强神经功能发生良性改变，减弱神经退化，从而改善认知功能。因此，对老年人进行MCI的相关危险因素筛查，有助于早期发现MCI，并为早期干预治疗提供帮助。

本研究ROC曲线显示，血清CircRNA_0003391表达水平预测老年MCI的AUC为0.825，敏感度和特异度均较好，提示检测CircRNA_0003391水平对临床预测老年MCI具有重要意义，可为老年MCI的诊治提供有用的帮助。多因素Logistic回归分析也显示，CircRNA_0003391水平＜0.46是影响老年MCI发生的重要因素，说明CircRNA_0003391表达水平降低与老年MCI发生高度有关，可能是预测老年MCI的独立因子。Kondo等[15]研究表明，CircRNA是调节神经系统信号的重要基因，与MCI的发生发展密切相关，有望成为MCI的重要诊断指标和治疗靶点。

综上所述，老年MCI患者血清CircRNA_0003391表达水平降低，CircRNA_0003391水平＜0.46是老年MCI的重要影响因素，对预测老年MCI具有重要的参考价值。但本研究为单中心的临床研究，病例来源较单一，纳入的病例数较少，可能对影响因素筛查有影响，未来仍需进一步深入证实。