鞣花酸对应激小鼠血常规指标的影响
2022-10-28桑志祥张梦馨丁凌霄徐海军
贾 哲，桑志祥，张梦馨，丁凌霄，徐海军
（皖西学院生物与制药工程学院，安徽 六安 237000）
鞣花酸又名没食子酸，广泛存在于水果和坚果中，比如石榴、葡萄、核桃、草莓等。鞣花酸具有抗炎、抗氧化、抗癌、抑菌、调控细胞周期、保护胃肠道和缓解机体中毒病理变化等生物活性[1-2]。李佳豪等[3]在1岁纯血马日粮中添加30 mg·kg-1体重的鞣花酸，发现鞣花酸可促进消化利用率及营养物质的沉积，并显著提高马匹总增重及日增重。孙慧等[4]研究发现鞣花酸能够改善由马兜铃酸Ⅰ引起的小鼠急性肾损伤，并发现鞣花酸能通过抑制小鼠肾脏NF-κB通路，降低炎症因子水平，从而达到缓解肾脏损伤。龙毅等[5]通过连续灌胃小鼠14 d不同浓度的鞣花酸后，进行腹腔注射四氯化碳（CCl4）造模，发现鞣花酸能够显著降低模型小鼠血浆中丙二醛（MDA）水平，并显著提高超氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）及过氧化氢酶（CAT）水平，表明鞣花酸可能通过抗自由基和抑制脂质过氧化机制来缓解肝脏损伤。黄小霞[6]通过鞣花酸对慢性应激模型小鼠的影响研究发现，鞣花酸能够降低小鼠血液中炎性因子水平，能够改善氨基酸代谢、脂代谢和肠道菌群来缓解小鼠慢性应激。脂多糖（Lipopolysacccharide，LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分，LPS可以激活机体免疫反应，继而促进炎症介质的生成。若LPS过量刺激机体时，则会导致全身炎症反应[7]。有研究表明鞣花酸可以缓解脂多糖诱导的细胞炎症反应，降低细胞分泌炎症因子浓度[8]，但关于鞣花酸对脂多糖应激炎症模型血常规影响的报道较少。因此，本研究以腹腔注射脂多糖小鼠建立应激炎症模型，研究鞣花酸对脂多糖所致小鼠应激模型血常规的影响。
1 材料与方法
1.1 试验动物
昆明小白鼠45只，体重（20±2）g，购自安徽医科大学实验动物中心。饲养环境温度为24～26℃，湿度55%～65%，自由饮食。
1.2 试剂和仪器
鞣花酸，购于五峰赤诚生物科技股份有限公司；迈瑞BC-2800VET型血细胞分析仪，购自深圳迈瑞动物医疗科技股份有限公司；LPS，购自白鲨科技有限公司。
1.3 动物分组与给药方法
将45只小鼠随机分为3组，即空白组（CT）、脂多糖模型组（LMT）和鞣花酸组（EAT），每组15只。空白组和脂多糖模型组正常饲喂鼠粮，鞣花酸组鼠粮添加1 g·kg-1鞣花酸，饲喂15 d后称重，并分别对脂多糖模型组和鞣花酸组小鼠按照1 mg·kg-1体重的剂量腹腔注射脂多糖，空白组小鼠腹腔注射对应体积的生理盐水。
1.4 指标测定
腹腔注射脂多糖6 h后进行水合氯醛麻醉，处死小鼠，采集抗凝血。
1.4.1 小鼠器官指数
处死小鼠后，分别采集小鼠心脏、肝脏、肾脏和脾脏并称重，器官指数=器官重量/小鼠体重。
1.4.2 血常规指标
按照迈瑞BC-2800VET型血细胞分析仪要求，检测采集的抗凝血液样本，测定小鼠白细胞、淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、红细胞数量及血红蛋白、血细胞比容和平均红细胞容积等指标。
1.5 统计分析
所有数据均采用SPSS 19.0进行单因素方差分析，结果以“平均值±标准差”的形式表示，P＜0.05表示差异显著，具有统计学意义。
2 结果与分析
2.1 鞣花酸对小鼠体重的影响
饲养15 d后，测定小鼠体重，结果见表1，鞣花酸组小鼠体重较CT组和LMT组有所增加，但差异不显著（P＞0.05）。
表1 鞣花酸对小鼠体重的影响g
2.2 鞣花酸对器官指数的影响
器官指数测定结果见表2，LMT组脾脏指数较CT组、EAT组有显著性提高（P＜0.05）；其他脏器指数各组间无差异性差异（P＞0.05）。
表2 鞣花酸对小鼠各器官指数的影响%
2.3 鞣花酸对小鼠血常规指标的影响
2.3.1 鞣花酸对LMT组小鼠白细胞、淋巴细胞、单核细胞及中性粒细胞的影响
LMT组小鼠的白细胞数、中性粒细胞数、中性粒细胞百分比显著高于CT组、EAT组小鼠（P＜0.05），EAT组小鼠白细胞数、中性粒细胞数、中性粒细胞百分比显著高于CT组（P＜0.05）。LMT、EAT组小鼠淋巴细胞数比CT组小鼠有所降低，但差异不显著（P＞0.05）。LMT小鼠淋巴细胞百分比显著低于CT组和EAT组小鼠（P＜0.05)；单核细胞百分比各组间比较无显著性差异变化（P＞0.05）。见表3。
表3 鞣花酸对小鼠白细胞的影响
2.3.2 鞣花酸对小鼠红细胞的影响
EAT、CT和LMT各组间RBC、HGB和HCT数值无显著性差异（P＞0.05），LMT小鼠MCV较CT组有显著性升高（P＜0.05）。见表4。
表4 鞣花酸对小鼠红细胞的影响
3 讨论与结论
炎症是与很多疾病密切相关的基础病理过程之一，LPS作为革兰阴性菌细胞壁的主要成分之一，可以诱发炎症细胞因子和相关炎症介质的大量释放，进而引起全身失控性炎症反应，最终导致休克而死亡。目前研究已有较多途径通过LPS来构建不同疾病或器官炎症模型[9-11]。钟友宝[12]对仔猪使用LPS腹腔注射发现初期LPS会引起仔猪呕吐腹泻、食欲降低、体温上升等症状，仔猪脾脏重及指数明显增大，并引起外周血细胞成分发生变化，细胞数量和比例发生显著变化。本试验按照1 mg·kg-1进行腹腔注射脂多糖来建立急性炎症模型，注射后小鼠出现蜷缩、不喜活动等现象。血常规结果显示：LMT组小鼠的白细胞数、中性粒细胞数、中性粒细胞百分比显著高于CT、EAT组小鼠（P＜0.05），LMT组小鼠淋巴细胞数比CT组小鼠有所降低，差异不显著（P＞0.05）。LMT组小鼠淋巴细胞百分比显著低于CT组小鼠（P＜0.05）；单核细胞百分比无显著性差异（P＞0.05）。表明腹腔注射LPS能显著提高小鼠血液白细胞数目，其中以中性粒细胞升高为主。结合注射后小鼠行为变化、器官指数及血细胞的变化，说明腹腔注射LPS构建的小鼠急性炎症模型构建成功。
鞣花酸具有抗炎、抗氧化、抗癌、抑菌、调控细胞周期、保护胃肠道、缓解机体中毒病理变化等生物活性。赵铭伟等[8]在断奶仔猪日粮中添加鞣花酸发现鞣花酸可提高仔猪日增重、降低腹泻率、改善胃肠道菌群，并在体外试验中发现，50 μg·mL-1的鞣花酸能够显著降低LPS诱导的IPEC-J2细胞炎症水平。通过本研究发现，鞣花酸对小鼠生长有一定的促进作用，能够提高小鼠体重，但差异不显著。该结果可能与小鼠自身体重小，在生长过程中体重变化区间较小且个体生长发育有差异性有关，虽能发现鞣花酸对小鼠生长性能有促进作用，但差异不显著。后续试验可考虑在生长发育较快的动物上进一步探究其能否提高动物生长性能。脾脏是重要免疫器官，在清除和吞噬血液中病原时易遭受损伤而产生炎症反应[13]。钟友宝[12]研究发现腹腔注射LPS后，猪脾脏出现充血肿大，造成脾脏指数升高。雷媛娣[14]研究发现鞣花酸能通过抗氧化和抗凋亡途径明显改善硫酸铍所致大鼠的脾脏病理变化，降低硫酸铍染毒组的脾脏指数并抑制脾淋巴细胞异常增殖。本研究发现EAT组小鼠的脾脏指数较LMT显著性降低，表明鞣花酸对脂多糖应激造成的脾脏损伤有一定的保护作用。白细胞作为反应机体重要的血液炎症指标，有研究发现鞣花酸能够降低BeSO4免疫损伤模型大鼠模型白细胞总数。曾鸿芳等[15]使用中药天抗对LPS炎症模型进行研究，结果能够降低脾脏指数、降低血液中炎症因子的表达水平来缓解机体炎症反应。对于本试验中外周血细胞的变化，较LMT而言，EAT小鼠的白细胞总数、中性粒细胞、中性粒细胞百分比和平均红细胞体积均有显著性降低，与雷媛娣[14]的研究结果一致。说明鞣花酸能够降低LPS对小鼠造成的应激反应，缓解机体炎症反应，对小鼠有一定的保护作用，但具体通过何种途径产生的作用仍有待进一步探究。
