龙爪槐果实中异黄酮苷的分离与鉴定

陈钇洁，欧嘉瑶，王彩娥，孙思佳，刘思琦，全 程，李金喜

（北方民族大学化学与化学工程学院，宁夏 银川 750021）

龙爪槐别名垂槐，是槐树的变种[1]，在我国广泛种植[2]，花和果实都可入药[3]，也可用于生产保健品、饲料添加剂等。槐角是龙爪槐的果实，可入中药，从槐角浓缩物中可分离出氨基酸类、黄酮、生物碱类、糖类等，其中的黄酮成分含量较高且生物活性明显[4-7]，为此，我们对槐角的化学成分进行分析，以分离出有活性的成分。

1 仪器与材料

仪器：XFB-500型粉碎机，P200Ⅱ型液相色谱仪，SB-800D型超声波，R-1002N型旋转蒸发仪。

材料：色谱甲醇，乙酸乙酯、二氯甲烷、石油醚（AR）。

2 提取与分离

2.1 实验流程

槐角→晾晒→粉碎→槐角粉→95%乙醇浸泡→超声波提取→旋蒸→提取物原料

2.2 提取

采摘20kg龙爪槐槐角，自然晾干后用粉碎机粉碎。称取槐角粉1kg，置于5L塑料桶中，加入95%乙醇1.5L浸泡12h，用超声波进行提取。设置水温为40℃，超声2h，用纱布过滤。将滤渣置于5L塑料桶中，加入95%乙醇1.5L，继续超声2h，过滤，重复1次，浓缩所得的乙醇提取液。

2.3 分子网络化

采用固相萃取柱（反相C-18填料），分别用水、50%甲醇溶液、90%甲醇溶液洗脱，得到3种样品，用LC-Ms/Ms进行网络化分析，分析HPLC-MS/MS，绘制的分子网络化图如图1所示，每个节点代表一个化合物，由图1可知有100多个化合物。

2.4 粗产物的分离

向得到的100g浓缩液中加水，用乙酸乙酯萃取，浓缩，再向浓缩液中加水，用二氯甲烷萃取，浓缩。用柱层析进行分离，先按V(二氯甲烷)∶V(石油醚)=1∶20进行淋洗，然后逐渐加大极性，换成二氯甲烷和乙酸乙酯，继续淋洗，继续加大极性，用甲醇、二氯甲烷和乙酸乙酯三体系进行粗分离，得到12瓶不同极性的混合物。取其中1瓶进行柱色谱分离，用试管分别装入不同的产物，部分TLC点板图如图2所示。

2.5 单体化合物的分离

用semi-液相色谱分离第2个试管的样品，以分离纯化出相应的单体化合物。

3 结构鉴定

化合物1为淡黄色粉末，(+)-ESI-MS所得的分子离子峰为433.4[M+H]+。根据1H NMR(图3)，可以看出 6.40(1H，H-8)和6.24(1H，H-6)是异黄酮中苯环上的特征信号，初步判断为异黄酮。4.92(1H，H-1”)、3.70(1H ，H-4”)、3.46(2H，H-6”)、3.27(2H，H-2”，3”)、 3.17(1H，H-5”) 这5组特征信号为葡萄糖。由上述结果可以看出，该化合物应为异黄酮苷。12.92(1H，5-OH)为异黄酮五位上的特征信号，是因为它易与四位酮形成分子内的氢键，特征信号出现在12.92。8.40(1H， H-2)为二位连氧烯键信号，7.49(2H，H-2’，6’)和 7.10 (2H， H-3’， 5’)是三位连苯环质子信号。

碳谱(图4)给出了所有的碳信号，包括低场 区 的 芳 基 碳：δ(×10-6) 164.4(C7)，162.0(C5)，157.6(C4’)，157.3(C9)，154.4(C2)，130.1(C2’,6’)，124.2(C3)，121.9(C1’)，116.1(C3’,5’)。104.4(C10)为十位季碳；99.1(C6)、93.8(C8)为苯环中六位、八位的碳；100.3(C1”)、77.1(C3”)、76.6(C5”)、73.2(C2”)、69.7(C4”)、60.7(C6”)为葡萄糖中的特征碳。

化 合 物1，黄 色 粉 末 状 固 体，ESI-MS(m/z)：433.4[M+H]+。1HNMR(DMSO-d6，400MHz，δ)：12.92(1H，5-OH)，8.40(1H，H-2)，7.49(2H，H-2’，6’)，7.10(2H，J=8.0，H-3’，5’)，6.40(1H，H-8)，6.24(1H，H-6)，4.92(1H，H-1”)，3.70(1H，H-4”)，3.46(2H，H-6”)， 3.27(2H，3”)，3.17(1H，H-5”)。

13CNMR(100MHz，DMSO-d6，δ)：180.05(C4)，164.4(C7)，162.0(C5)，157.6(C4’)，157.3(C9)，154.4(C2)，130.1(C2’,6’)，124.2(C3)，121.9(C1’)，116.1(C3’,5’)，104.4(C10)，100.3(C1”)，99.1(C6)，93.8(C8)，77.1(C3”)，76.6(C5”)，73.2(C2”)，69.7(C4”)，60.7(C6”)。通过查阅文献，发现该化合物和Anti-oxidative Phenolic Compounds from Sophorae Fructus[8]中报道的数据一致，因此可以确定，化合物为Genistein-4′-O-β-D-glucopyranoside（染料木黄酮-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷）。

4 结论

本实验采用超声波提取龙爪槐果实中的化学成分，采用柱层析、薄层色谱和高效液相色谱，对处理后的槐角提取物进行高效有序的分离，利用分子网络化系统，分析样品中的化学成分。通过核磁分析，确定分离的产物为染料木黄酮-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。为了使槐角的药用价值得到充分利用，仍需对槐角的药用成分进行进一步的探索和研究。