紫背天葵叶片培养技术*

刘淑芳 陈杏禹 王海荣 侯慧锋

（辽宁农业职业技术学院，辽宁 熊岳 115009）

紫背天葵为菊科三七属多年生常绿草本植物，又名两色三七草、紫背红凤菜、红玉菜等。紫背天葵全株肉质，嫩叶和茎均可食用，口感柔嫩，风味独特，除具有一般蔬菜所含有的营养价值外，还富含有造血功能的铁素、维生素A、黄酮类化合物以及黄酮苷等成分，具有生津止渴、润燥止咳、活血化瘀、清热解毒等功效，能有效提高机体的免疫力、清除自由基、延缓衰老，是一种药食兼用的高档蔬菜。

紫背天葵不易采收种子，生产上常采用扦插或分株繁殖。然而，扦插和分株繁殖无法保证种苗整齐一致，且易感染病毒，不利于其规模化生产。组培快繁技术具有不受时间限制、繁殖速度快、繁殖系数大等优点，在农业生产中广泛应用。利用紫背天葵嫩叶、嫩枝进行组织培养，能在短期内生产出大量优质商品紫背天葵种苗，可在不影响原有紫背天葵采收的前提下获得较高的经济效益。现将紫背天葵叶片培养技术及组培快繁的影响因素介绍如下。

1 紫背天葵叶片培养技术

1.1 外植体的采集和处理

从健康、无病虫害的紫背天葵植株上选取幼嫩的叶片，连同叶柄一起剪下作外植体，用75%酒精棉球擦拭干净后装入保鲜袋，带回实验室。将外植体置于流水下冲洗50 min，然后在超净工作台上用75%酒精浸润30 s，用无菌水冲洗2次，用1%次氯酸钠溶液消毒5 min，再用无菌水冲洗5次，最后将其置于无菌滤纸上吸干表面水分，备用。

1.2 初代培养

将消毒好的叶片沿主脉剪切成5 mm×5 mm的叶块，接种于诱导培养基MS＋BA 0.5～1.0 mg/L＋NAA 0.5～1.0 mg/L上进行诱导培养，培养条件为温度23～25℃、光照时间14 h/d、光照强度2 000～3 000 lx。接种10 d后，叶片增厚、边缘扭曲，切口处出现少量绿色、颗粒状、疏松的愈伤组织。随着培养时间的延长，颗粒物上分化出大量绿色芽点（见图1），最后形成丛生芽苗。

图1 紫背天葵叶片诱导出的丛生芽

1.3 增殖培养

初代培养诱导出的丛生芽苗高3 cm以上时，将其切割成长1～2 cm、带腋芽的茎段，并接种到增殖培养基MS＋BA 0.3～0.5 mg/L＋NAA 0.05～0.2 mg/L上进行增殖培养，培养条件同初代培养。芽苗茎段增殖培养25 d后，又分化出多个芽苗，形成新的芽丛（见图2）。利用新的芽丛可再次进行增殖培育，25 d为1个周期，反复转接即可扩繁大量芽苗。

图2 紫背天葵增殖培养产生的丛生芽

1.4 生根培养

增殖苗的数量达到生产需求时即可进行生根培养。将增殖培养的芽苗切割成单苗转接到生根培养基1/2 MS＋NAA 0.1 mg/L＋IBA 0.1 mg/L上进行生根培养。培养7 d后芽苗基部可诱导出根原基，20 d后每个芽苗基部能产生3～5条、长2 cm以上的根（见图3）。生根培养条件基本同初代培养，仅需适当提高光照强度。

图3 紫背天葵试管生根苗

1.5 驯化移栽

芽苗生根培养20 d后，即可进行驯化移栽。

1.5.1 移栽前准备

在温室或大棚内进行驯化移栽，将芽苗移栽至苗床或穴盘均可。使用苗床驯化的，提前建苗床，苗床宽1 m、深15 cm，床长依温室或大棚跨度定，苗床上方搭建拱棚；使用穴盘驯化的，可选用72孔或105孔穴盘。移栽基质用珍珠岩、蛭石、草炭按1∶1∶1比例配制。基质、苗床或穴苗盘使用前需用多菌灵1 000倍液消毒。

1.5.2 瓶苗驯化

将紫背天葵生根的试管苗移至温室内，闭瓶炼苗5 d，再开瓶炼苗2 d。

1.5.3 移栽

将生根的试管苗从瓶中取出，洗净根部附着的培养基，在多菌灵800～1 000倍液中消毒5～10 min，捞出沥干水分，移栽至穴苗盘或苗床上，加扣小拱棚，盖上遮阳网。

1.5.4 栽后管理

移栽后，大棚内保持相对湿度85%以上、温度15～30℃、光照强度3 000～5 000 lx；移栽1周后，逐渐通风；移栽后约1个月即可成活，成活率在98%以上。紫背天葵移栽驯化苗见图4。

图4 紫背天葵移栽驯化苗

2 紫背天葵组培快繁的影响因素

2.1 外植体

选用适宜的外植体是建立紫背天葵组培快繁体系的关键点。目前，紫背天葵组培快繁的外植体材料主要为球茎、叶片和茎段，也有选用种子作外植体。相关试验结果表明，叶片、茎段作初代培养材料，诱导效果最好。李媛等［1］以紫背天葵茎段为外植体，采用常规消毒方法进行消毒灭菌，茎段诱导率达到70%以上。

2.2 培养条件

温度、光照、湿度是影响紫背天葵组培苗是否生长健壮的主要因素。茎段或叶片在试管内的培养条件为温度（25±2）℃、光照时间14 h/d、光照强度2 000～3 000 lx；在试管外的培养条件为相对湿度85%以上、温度15～30℃、光照强度3 000～5 000 lx。在适宜的温湿度条件下，茎段或叶片的诱导、增殖效果较好，生根率较高。

2.3 植物激素

不定芽的诱导与细胞分裂素和生长素的种类及浓度密切相关。陈刚等［2］研究表明，1 mg/L 2，4-D和1 mg/L 6-BA对紫背天葵愈伤组织的诱导效果较好；张少平等［3］研究发现，在MS培养基中加入3 mg/L BA和0.2 mg/L NAA有利于外植体诱导不定芽；陈雄伟等［4］研究表明，噻苯隆（thidiazuron，TDZ）和CPUU［N（-2-氯-4-吡啶基）-N’-苯基脲］也能诱导紫背天葵叶片和愈伤组织分化出不定芽，在MS培养基中添加0.5 mg/L TDZ诱导率可达81.3%。

2.4 发生途径

紫背天葵组培的发生途径主要有丛生芽发生型、体细胞发生型、器官发生型、胚状体发生型。林碧英等［5］以茎段为外植体，通过丛生芽增殖途径成功获得再生植株；张少平等［3］以紫背天葵叶片为外植体进行胚状体诱导，成功获得再生植株，但效率不高；陈刚等［2］以叶片为外植体，构建了器官发生型植株再生培养体系，所产生的试管苗易生根，再生植株成活率高达95%以上。