HPLC法测定富马酸喹硫平片含量的不确定度分析

黄春燕，何秋云，柳贤福

(1 钦州市检验检测院，广西 钦州 535000；2 广西中医药大学赛恩斯新医药学院，广西 南宁 535222)

不确定度是表征合理地赋予被测量值的分散性与测量结果相联系的参数[1]，也是一个完整的定量分析结果的重要组成部分，用于评价定量方法的可靠性及测量结果的可信程度[2]。高效液相色谱法目前已广泛应用于药品检验中的含量测定。富马酸喹硫平片，主要成分为富马酸喹硫平，化学名为11-{4-[2-(2-羟乙氧基)乙基-1-哌嗪基]}二苯骈(b，f)(1，4)硫氮杂卓富马酸盐(2∶1)，临床用于治疗精神分裂症和双相情感障碍的躁狂发作。本文通过测定富马酸喹硫平片的喹硫平含量进行不确定度分析，分析测量结果的扩展不确定度，为客观地评价富马酸喹硫平片的含量提供科学依据。

1 仪器与试药

LS220ASCS万分之一电子分析天平，普利赛斯公司；HA225SM-DR十万分之一天平,普利赛斯/上海天美天平仪器有限公司；KQ-400E超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司、容量瓶(100 mL，A级)；量瓶(50 mL，A级)；量瓶 (10 mL，A级)；移液管(1 mL，A级)；高效液相色谱仪(Agilent 1260，DAD检测器)，安捷伦科技(中国)有限公司；富马酸喹硫平对照品(100 mg，批号100815-201904)，中国食品药品检定研究院；色谱级甲醇(4L)，赛默飞世尔科技(中国)有限公司。

2 测定方法

2.1 色谱条件

Thermo BDS HYPERSIL-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；以甲醇-水-三乙胺(670∶330∶4)(用磷酸调节pH值至6.8)为流动相；检测波长为289 nm；柱温为40 ℃；进样体积20 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液

取富马酸喹硫平对照品适量，精密称定，置50 mL量瓶中，加流动相溶解，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，使每1 mL约含富马酸喹硫平30 μg的溶液。

2.2.2 供试品溶液

取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于喹硫平25 mg)，置100 mL量瓶中，加流动相适量，超声使富马酸喹硫平溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL，置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。

2.3 测定法

精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，并将结果乘以0.8686。

3 测量不确定度分析

3.1 建立数学模型

外标法测定富马酸喹硫平片含量的标示百分含量的计算公式：

根据不确定度来源，对结果有影响的因素均在上述公式中，因此，建立不确定度的数学模型。

3.2 测量不确定度分析

图1 测量不确定度来源Fig.1 Sources of measurement uncertainty

根据溶液的配制和数学模型分析，不确定度来源如图1所示，不确定度主要来源于对照品纯度、对照品称样量、供试品称样量、供试品平均片重、对照品稀释体积、供试品稀释体积、对照品峰面积、供试品峰面积8个分量。按照标准不确定度分类可分为A类和B类，A类不确定度由测量数据的实验标准偏差表征，B类不确定度采用非统计方法评定[3]。

(2)本次试验中质量不确定度来源包括对照品称样量、供试品称样量、供试品平均片重。对照品称量所用天平为HA225SM-DR十万分之一天平(普利赛斯/上海天美天平仪器有限公司)，由该天平的计量检定证书可知，示值误差为0.04 mg(0≤m≤5 g)，供试品称量所用天平为LS220ASCS万分之一电子分析天平(普利赛斯公司))，由该天平的计量检定证书可知，示值误差为0.1 mg(0≤m≤50 g)。

(3)本次试验中溶液定容体积的不确定度来源有对照品稀释体积、供试品稀释体积操作因素，主要影响这两个因素不确定度有温度、重复性和稀释过程。

(6)合成不确定度评定

表1 各分量的相对标准不确定度Table 1 Relative standard uncertainty of each component

各分量独立且不相关，则合成不确定度为：

高效液相色谱法测定富马酸喹硫平片的富马酸喹硫平含量为101.6%，其测量扩展不确定度 U=2×0.6654%=1.3308%(K=2)。测量不确定度报告为(101.6±1.3308)%，K=2。

4 结 论

由表1可知，试验中的稀释过程引入的不确定度较大，要求在试验中尽可能一步稀释到位，避免分人分次稀释引入较大误差。本次试验考虑引入不确定度因素是过程中较为常见的，还有一些其它因素没有纳入本次不确定度考虑范围，在以后试验中可考虑其它因素，如高效液相色谱仪的仪器性能、流动相配制过程、色谱柱的选择、取样称样均匀性、样品测定重复性等。在检验检测实验室中，要对每个品种、每次实验均报告不确定度不现实，也不经济，但是实验室努力找出影响检测结果的不确定度分量非常必要而且可行[10]，特别是当工作中的检验数据接近临界值边缘时，为了提高实验数据的可靠性，降低实验报告风险，也为客户提供更多信息，此时出具实验报告时附上不确定度更具说服力，本次试验可为HPLC法测定其它药物的含量方法提供参考。