辽细辛组培快繁技术研究

朴凯伟，赵玉龙，崔明礼，陈禹宏，顾鑫

（辽宁省抚顺市现代农业及扶贫开发促进中心，辽宁 抚顺 113006）

辽细辛又称细参、东北细辛等，为马兜铃科，细辛属多年生草本植物，为常用中药，具有解表散寒、祛风止痛、通窍、温肺化饮等功效，可用于治疗风寒感冒、鼻塞流涕、痰饮喘咳、风冷头痛、风湿痹痛等。

辽细辛生长周期较长，生长期病害发生严重，难以控制[1]。传统繁育方式速度慢，无法满足市场需求，可利用组培快繁技术，在较短时间内达到了高效诱导外植体分化增殖的目的，在保存母体优良性状和遗传性状稳定的同时，提高了种苗的抗病性能和繁殖效率[2]。

1 试验材料与方法

1.1 试验地点

抚顺市园艺科学研究所组培快繁试验室。

1.2 试验材料及试验方法

1.2.1 试验材料选取。晴朗天气，取辽细辛带芽根状茎，剪成2～3 cm 节段，洗去表面泥土后流水冲洗30 min，置于超净工作台中，用70%酒精消毒20 s 后，再用0.1%HgCl2消毒5～8 min，无菌水冲洗5 次后，将茎段两端切除后接种于初代培养基中。

1.2.2 建立无菌系初代培养。初代培养基以MS 为基础培养基，附加浓度为1.0～3.0 mg/L 的6-BA、浓度为0.3 mg/L的NAA、蔗糖30 g/L、琼脂7 g/L，pH 值6.8，放置在光照培养室中培养[3]。每天光照14 h，照度2000 lx，温度控制在24～26℃，观察培养效果。

1.2.3 继代培养及不定芽诱导。初代培养的辽细辛顶端长出新芽、基部膨胀生长出浅绿色愈伤组织后，切取愈伤组织接种到以MS 为基础培养基，附加浓度为1.0～3.0 mg/L 的6-BA和浓度为0.3 mg/L 的NAA 进行继代培养。培养到一定数量后再接种到以MS 为基础培养基，附加浓度为0.5～1.5 mg/L 的6-BA 和浓度为0.1～0.2 mg/L 的NAA 的诱导培养基中诱导不定芽。培养条件如上，观察愈伤组织分化状况。

1.2.4 生根培养。辽细辛试管苗生长到2.5 cm 左右并附有3～4 片叶片时，接种到以1/2MS 为基础培养基，附加浓度0.5～1.0 mg/L 的IBA、蔗糖20 g/L、琼脂7 g/L、pH 值6.8的生根培养基中进行生根培养。培养条件如上，观察辽细辛试管苗生根状况。

2 结果与分析

2.1 初代培养中生长调节剂对辽细辛愈伤组织诱导的影响

接种1 周后开始萌动，顶部长出新芽；2 周后新芽基部开始膨大，随后生长出浅绿色愈伤组织；3 周后愈伤组织继续生长有少量芽眼冒出。结果详见表1，可知当NAA 浓度同为0.3 mg/L、6-BA 浓度为2.5 mg/L 时，辽细辛愈伤组织萌发率较高，达到85%，愈伤组织萌发量多，质量好。

表1 不同处理愈伤组织萌发情况

2.2 生长调节剂对辽细辛不定芽诱导的影响

接种1 周后愈伤组织膨大并不断分化，2 周后愈伤组织表面出现浅绿色突起的芽点，3 周后芽点逐渐形成不定芽，4 周后每块愈伤组织上的不定芽数量达到4～6 个即可转接。结果详见表2，可知当培养基为MS+1.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA时，增值平均数量为5.5，不定芽生长健壮，叶片数量多，长速快，是较有利于辽细辛不定芽诱导的激素组合。

表2 不同处理辽细辛不定芽诱导情况

2.3 生长调节剂对辽细辛生根影响

接种1 周后，基部出现白色根点；3 周后根长可长到2～3 cm，根数可达2～5 根，即可移栽驯化了。结果详见表3。由表3 可知，当IBA 浓度为0.4 mg/L 时，生根率为90%，每株生根数达到5.0 条，平均根长2.5 cm，所生根较粗、坚韧、质量好，1/2MS+0.4 mg/LIBA+20 g/L 蔗糖为辽细辛较适生根培养基。

表3 不同处理辽细辛生根情况

3 结论

试验结果表明，利用组织培养方式，通过根状茎诱导愈伤组织从而进一步诱导不定芽，可快快辽细辛种苗繁育速度。使用MS+2.5 mg/L6-BA+0.3 mg/LNAA 的培养基诱导辽细辛愈伤组织效果较好。以MS+1.0mg/L6-BA+0.1 mg/LNAA 为培养基能更好地诱导出辽细辛的不定芽，是试验筛选出的继代增殖培养基。生根试验表明，使用1/2MS+0.4 mg/LNAA+20 g/L蔗糖，生根率达到90%，每株平均生根数5.0 条，平均根长2.5 cm，为较适合辽细辛生根的培养基。