2016-2021年新疆青河县牛羊布鲁氏菌病血清学监测

郑汝芸，罗鹏飞，舒 展*，叶勒肯·托留根，古丽孜亚·卡肯，吕双燕

（1 阿勒泰地区动物疾病控制与诊断中心，新疆 阿勒泰 836500；2 阿勒泰地区畜牧工作站，新疆 阿勒泰 836500）

布鲁氏菌病（Brucellosis）是由布鲁氏菌属（Brucella）细菌侵入机体引起的一种以流产和繁殖障碍为特征的慢性人畜共患病[1]。该病在世界各国均有发生[2]，英国、日本、海峡群岛、挪威和芬兰等多个国家和地区已经向全世界宣告彻底根除了布鲁氏菌病[3]，而我国至今未能得到完全控制，仍以小范围、点状、分散形式流行[4]。人的布鲁氏菌病主要是通过直接接触病畜及其产品而感染，出现身体乏力、持续发热、多汗、关节疼痛及反应迟钝等明显症状且病程慢复发率很高[5-7]。公畜感染后会出现睾丸炎症，造成不育以及神经损伤，母畜感染后会导致不孕、流产及死胎等症状。OIE将该病定为必须报告的B类传染病，我国将其列为二类动物疫病[8，9]，该病一旦出现会造成巨大经济损失[10]。

目前，布鲁氏菌发现的有6个生物种19个生物型，其中大多数种型对人和动物都有致病性，临床上羊种、牛种、猪种毒力最强[11]，已知能被感染的布鲁氏菌病动物已超过200种，不同动物间还可出现交叉感染，传染力极强[12]，全世界每年约有50万例人感染布鲁氏菌病，特别是在地中海、非洲和拉丁美洲部分国家以及西亚、南亚和东亚国家[13-15]。家畜中牛、羊和猪是最为易感的动物，传染源主要是母畜的流产物、分泌物以及公畜交配通过体液传播等途径，污染饲料和环境后再通过消化道、皮肤伤口接触传染，还能产生气溶胶，通过呼吸道传染[16-18]。布鲁氏菌病对畜牧业影响严重，尤其是在最近几年国内外疫情出现抬头上升的趋势并发现新的流行特征[19]。目前，疫苗免疫和检疫扑杀是预防和控制布鲁氏菌病的主要手段[20]。该病在青河县近年来发病情况不详，采用平板凝集试验（RBT）初筛，试管凝集试验（SAT）进行复测的方法，以青河县8个乡镇和1个种羊场作为调查单位，对2016-2021年采集的牛羊血清进行布鲁氏菌病监测，为防控该病提供相关参数。

1 材料与方法

1.1 材 料

样品来源：2016-2021年，以青河县8个乡镇（A、B、C-H）牛（包括荷斯坦奶牛、新疆褐牛、西蒙塔尔牛）羊（包括阿勒泰羊、湖羊等品种）和1个种羊场（I，湖羊为主）为调查对象，共采集牛血清样品10 733头份（详见表1），采集羊血清样品49 671头份（详见表2）。

表1 2016-2021年青河县牛布鲁氏菌病检测样品采集明细

表2 2016-2021年青河县羊布鲁氏菌病检测样品采集明细

1.2 试剂及器材

布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原、阴阳性血清（哈尔滨国生生物科技有限公司生产）；布鲁氏菌试管凝集试验抗原、阴阳性血清（青岛易邦生物工程有限公司生产）。

1.3 方法

方法参照国标《动物布鲁氏菌诊断技术》（GB/T18646-2018）[21]。

1.4 结果判定

虎红平板凝集试验（RBT）：在阴阳性对照成立的条件下，4 min内被检血清出现肉眼可见凝集现象判定为布病阳性（+）；若混合后颜色均匀无凝集颗粒且无凝集现象判定为布病阴性（-）。

试管凝集试验（SAT）：在试验阴阳性成立且抗原对照无自凝的条件下，牛1∶100血清稀释度，羊1∶50血清稀释度，出现“++”及以上凝集现象时，判定为阳性；牛1∶50血清稀释度，羊1∶25血清稀释度，出现“++”以上凝集现象时，判定为可疑。试验结果可疑的家畜经30 d后采血复检，如果仍为可疑直接判定为阳性。

2 结果与分析

2.1 牛羊布鲁氏菌检测结果

2016-2021 年，6年间在青河县共采集牛血清10 733头份，RBT初筛检测结果显示，检疫阳性306份，SAT进行复测，阳性282份，复测检疫牛布鲁氏菌病总阳性率为2.63%，与RBT初筛结果阳性符合率为92.16%。共计采集羊血清49 671头份，RBT初筛检测结果显示，阳性118份，SAT进行复测，阳性100份，复测检疫羊布鲁氏菌病总阳性率为0.20%，与RBT初筛结果阳性符合率为84.75%。详见表3。

表3 2016-2021年青河县牛羊布鲁氏菌病检测结果

2.2 不同年份牛羊布鲁氏菌病检疫情况

由图1可以看出，牛布鲁氏菌病总阳性率为2.63%。其中，2016年牛布鲁氏菌病检疫阳性率为2.37%，各年份间牛布鲁氏菌病检疫阳性率呈现先上升后下降趋势，2019年至2020年期间下降了1.04个百分点。共采集羊血清49 671头份，羊布鲁氏菌病检疫总阳性率为0.20%，各年份间检疫阳性率呈现先下降后上升趋势。

图1 2016-2021年青河县不同年份间牛羊布鲁氏菌病检测结果

2.3 不同区域间牛羊布鲁氏菌病检疫情况

由表4可以看出，9个区域间牛羊牛布鲁氏菌病检测感染率不同，其中牛布鲁氏菌病感染率为0.00%～3.34%不等；羊布鲁氏菌病感染率为0.00%～0.50%不等，除H区域为边境口岸区域牛羊养殖数量极少，I区域为种羊场且净化效果好以外，E区域牛羊感染率均最低。结果表明，不同区域内布鲁氏菌病防控效果存在明显差异。

表4 2016-2021年青河县不同区域间牛羊布鲁氏菌病检测结果

2.4 不同年龄段牛羊布鲁氏菌病检疫情况

由表5可以看出，牛布鲁氏菌病的感染年龄段最高的为2≤X＜3，最低为6≤X；羊布鲁氏菌病的感染年龄段最高为3≤X＜6。以上不同年龄段牛羊布鲁氏菌病感染率存在明显差异，其中，2≤X＜3阶段牛羊布鲁氏菌病的感染率都比较高，应加强监测频次和加强净化淘汰力度、疫苗免疫保护。

表5 2016-2021年青河县不同年龄段牛羊布鲁氏菌病检测结果

3 讨 论

3.1 检疫方法的选择

2016-2021 年，青河县用6年时间采用RBT对初筛检测阳性的牛羊血清通过SAT进行复测，结果显示2种试验方法所得到的检疫阳性率基本一致。按照《动物布鲁氏菌诊断技术》（GB/T18646-2018）标准[21]，开展牛羊布鲁氏菌血清学大批次的检测可以采用RBT初筛，其具有操作简便、快速的优点，但缺点是受非特异性抗体的干扰，有时可能会出现非特异性凝集[22]，造成人为肉眼观察失误或判断出弱阳性样品[23]。因此还需要对RBT初步筛选处理的阳性血清使用SAT进行复检[24]。SAT具有特异性高、敏感性高的优点，通常在布鲁氏菌病的诊断中作为检测布鲁氏菌抗体的确诊试验被广泛应用[25，26]。

3.2 不同年份间的差异

从不同年份间牛羊布鲁氏菌病感染情况来看，2016-2017年牛羊布鲁氏菌病阳性率增加，尤其是牛布鲁氏菌病发病率呈直线型增长趋势，之后各年份间逐渐下降，表明强制免疫措施和净化策略取得实效。从2017年起青河县开始执行《国家布鲁氏菌病防治计划（2016-2020年）》《新疆维吾尔自治区布鲁氏菌病防治计划（2017-2020年）》以及阿勒泰地区《草畜平衡监督管理办法》，有计划、有步骤的落实牛羊布鲁氏菌病检测、检疫、消毒、扑杀和无害化处理等综合防控措施[28]，牛布鲁氏菌病感染率明显开始下降，羊布鲁氏菌病防控效果高于牛，2018年羊布鲁氏菌病感染率为0，说明防控措施实施比较到位。

3.3 不同区域间的差异

从不同区域间牛羊布鲁氏菌病感染情况来看，各区域间牛羊布鲁氏菌病呈现出由县城周边向四周扩大的趋势，这与牧民定居城区不愿上山放牧，养殖方式由传统放牧向集中饲养有关。一方面集中饲养量的增加造成引种数量多，加之牲畜交易频繁，而交通监管、检疫等工作相对滞后都是引起牛羊布鲁氏菌病感染的主要因素[29]。除H区域为边境口岸区域牛羊养殖数量极少，I区域为种羊场净化防控效果好以外，E区域牛羊感染率最低，是因为E区域地理位置比较偏远，基本属于丘陵沟壑或山峰地带，本身传入动物疫情的风险就低。且牲畜流通极其不方便，大多都是牧区每次销售牛羊都需要等收购厂家或牛羊贩卖人员1～2月才进山一次，进入该区域的牛羊大多都是先经过A、B区域后最后进入E、F区域，传入疫病的风险自然很低，I区域为种羊场，羊布鲁氏菌病感染率为0%，是因为其不论从养殖环境、从业人员管理、饲养方面或引种把关方面都相当严格，说明防控效果好。A-D区域靠近县城，因散养放牧地段少，大多都是散养殖场（户），饲养密度、饲养方式、繁育方式以及检疫净化不扎实等都是造成牛布鲁氏菌病感染率高的主要因素。D区域紧邻县城，布鲁氏菌病感染率最高，要作为重点进行监测。

3.4 不同年龄段之间的差异

从不同年龄段牛羊布鲁氏菌病检测情况来看，2≤X＜4阶段牛布鲁氏菌病的检测阳性率高，3≤X＜6阶段羊布鲁氏菌病检测阳性率高，主要是因为这个年龄段的成年牛羊多，很多都经过市场频繁交易，而当日交易不成功的又回到养殖环节，自然增加了疫情风险[30]，说明A-G各区域之间在牛羊养殖、运输、交易方面存在漏洞，一方面可能是因为青河县牛羊养殖主要还是以小规模为主，很多养殖户或商贩对布鲁氏菌病的认识不足，防控意识薄弱，造成养殖引入随意频繁，流通监管困难。另一方面是随着畜牧业的快速发展，养殖量不断扩大，但布鲁氏菌病监测经费无法满足当前工作需要[31]，造成监测方面存在漏洞。另外，牲畜市场价格不断提升但疫情扑杀补助资金却常年不变[32]，造成扑杀起来养殖户不配合，加大了防疫的工作难度。因此，要从政府管理层面和养殖层面上双向发力，共同推进布鲁氏菌病的防控净化工作[33]。

4 结 论

青河县近6年牛布鲁氏菌病流行率比较高，提示应加强防控。羊布鲁氏菌病流行率较低，在可控制范围内，总体防控效果较好，但仍存在疫情流行风险。因此，在组织管理层面上既要摸清底数，加强全面宣传，提高全民防控意识，又要在经费上提供保障，检测方法上挑选灵敏度高、结果可靠的检测方法开展牛羊布鲁氏菌病的筛查，强化产地检疫和市场流通监管，把好调运关，采取检疫、免疫、隔离、发现阳性畜立即扑杀无害化处理，加大保险赔偿力度等防控措施，争取向国家净化标准看齐。在养殖层面上，要采取自繁自养，定期开展“大清洗、大消毒”等防控措施，一旦发现患畜即扑杀，并配合相关部门进行无害化处理，坚决杜绝病害动物流入市场。