复方中草药对云斑鮰荧光假单胞菌的抑菌试验

2022-10-18罗鹏

科学养鱼 2022年9期

罗鹏

(天全县农业农村局，四川雅安 625599)

目前，水产疾病治疗常用各类抗生素往往使病原菌产生耐药性，水产品易产生大量的药物残留。随着社会经济的发展，人们对水产品的食用安全意识逐渐增强和对产品质量越来越重视，广谱低毒的兽药品质和健康环保的绿色食品备受青睐。发展对环境无公害、无残留、无污染、安全、可靠的绿色鱼药，生产绿色、环保、无公害水产品是摆在每个养殖户面前必然的课题。中草药作为天然、高效的抗菌药物，耐药性不显著，而且毒副作用小。

云斑鮰属温水性淡水鱼，高密度养殖以及运输的损伤，会继发感染嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、爱德华氏菌等细菌，引发出血性腐败症、赤皮病、水霉病等细菌性疾病。其中由荧光假单胞菌引起的细菌性疾病在养殖过程中造成的困扰极大，给养殖户和销售商带来很大的损失。本试验探讨了中草药黄芪、黄柏对荧光假单胞菌的抑制作用，通过中草药来抑制云斑鮰感染的荧光假单胞菌，将满足云斑鮰养殖生产上寻求低毒、低残留、绿色生态抗菌药的需求。

一、材料与方法

1.试验动物

身体健康、体表无任何损伤的云斑鮰20 尾，平均规格为55克/尾。

2.试验时间与地点

试验时间为2021年5月8-17日，试验地点为成都某云斑鮰养殖场。

3.试验方法

(1)基础培养基配方。见表1。

表1 基础培养基配方

(2)试验设计。在基础培养基中添加黄芪、黄柏复合物，试验共分5 组(表2)。每组需制备普通琼脂培养基50毫升，分装至5只灭菌培养皿中。

表2 试验分组

将云斑鮰体表感染的荧光假单胞菌接种至不同浓度黄芪、黄柏复合物的培养基里。黄芪、黄柏复合物的添加量见表2，荧光假单胞菌接种后在37℃下恒温培养箱中培养24 小时，并观察添加了不同浓度的黄芪、黄柏复合物培养基里荧光假单胞菌各自的生长情况。

(3)细菌感染。选10尾健康的云斑鮰，严格消毒杀菌后单独放入1 只水族箱(水为实验室经过简单曝气的自来水)，用网具使鱼体表机械受伤或用剪刀使其体表受伤，等受伤部位产生红肿甚至溃烂，并且出现白色菌丝时进行细菌分离。

(4)细菌分离纯化。挑选病症明显的鱼，将其病变部位接种在肉汤培养基中，37℃恒温培养箱里经过24 小时培养后，用革兰氏染色和生化试验的方法进行细菌鉴定。对肉汤中培养的细菌进行鉴定后，将其用划线法接种在普通琼脂培养基中，在37℃下、24小时进行纯化培养。

(5)细菌接种。在健康的10尾云斑鮰身上人为划1个伤口，取纯化培养的单个荧光假单胞菌菌落接种至云斑鮰身上，让其感染该细菌后观察症状。严格按照接种细菌的方法，将病症明显的云斑鮰感染的荧光假单胞菌，采用平板划线法接种到各试验组。在37℃下、24 小时培养后观察结果，记录菌落数。

二、结果

1.菌种鉴别

通过革兰氏染色后镜检，观察到的细菌形态见图1。革兰染色后油镜下观察，呈红色，为革兰氏阴性；短杆状，具圆端，成堆排列。生化试验结果显示微发酵葡萄糖，产酸不产气；不发酵乳糖、甘露醇、麦芽糖、蔗糖。经查阅资料发现，革兰氏染色与生化试验的结果与资料基本相符，判断试验的菌种是荧光假单胞菌。

图1 细菌形态

2.细菌在不同中药浓度培养基里的生长表现

对细菌进行培养后发现，荧光假单胞菌在对照组上生长良好，菌落微凸，呈淡黄色，边缘光滑整齐，表面较湿润。与对照组相比，添加黄芪、黄柏复合物的培养基长势较弱，表明黄芪、黄柏对荧光假单胞菌具有抑制效果。

3.不同中草药浓度对荧光假单胞菌的抑制结果(表3)

由表3可以看出，试验组对荧光假单胞菌具有抑菌作用。抑菌效果试验组3 最明显(P＜0.01)，其次为试验组4、试验组2(0.01＜P＜0.05)，试验组1 与对照组相比差异不显著(P＞0.05)，当培养基添加复方中草药浓度为10%时，达到最大的抑菌效果。

表3 不同中草药浓度时荧光假单胞菌的菌落数个

三、小结与讨论

1.黄芪、黄柏对荧光假单胞菌有较好的抑菌效果

中药在防治疾病上的作用是以调动机体一切有利因素，提高免疫功能和防御功能而祛除病邪，康复机体。周显青等(2003)试验证实黄芪能明显促进中华鳖血细胞吞噬率及血清的溶菌活力、杀菌活力。黄柏等能抑制细菌的呼吸和抑制细菌的核糖核酸(RNA)的合成，因而黄芪与黄柏可以有效抑制病原菌的繁殖。

2.不同中草药浓度对荧光假单胞菌抑制效果的影响

本次试验设计了4组不同的黄芪、黄柏中草药浓度，试验组与对照组相比都具有抑菌效果，但是试验组的效果具有明显的差异。黄芪、黄柏能抑制细菌自身的繁殖，但主要是通过增强机体的免疫功能达到抑菌、杀菌效果。试验表明，黄芪、黄柏的浓度为10%时效果最好(P＜0.01)，当超过或者不足时，不能有效控制病菌的生长繁殖，病菌仍能缓慢的生长。试验浓度超过10%但抑菌效果却不如10%浓度的抑菌效果，这一问题有待探讨。