2017-2021年顺昌县牛羊O型口蹄疫免疫抗体检测与分析

张玉巧 顺昌县动物疫病预防控制中心 福建 顺昌 353200

口蹄疫（Foot-and-mouth disease，FMD）是一种由 口 蹄 疫 病 毒 （Foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的可感染偶蹄类动物如猪、牛、羊等的高度传染水泡性疫病[1]。不同年龄的动物感染口蹄疫后，出现的症状也不一样。一般成年动物感染时体温不断上升，口腔黏膜、蹄部和胸部皮下等许多部位都产生水泡，最严重时可致死；幼龄动物感染口蹄疫后，则会在出现水泡前，发生一系列疾病如急性心肌炎、心肌梗死等导致提前死亡，所以，幼龄动物感染后的病死率会比成年动物高，病死率接近100%[2]。成年动物感染口蹄疫后虽然病死率低，但是发病率极高，如果一个养殖场有病例出现，基本会导致全场猪100%发病。它不但会严重影响感染动物的正常生长发育，而且还会造成生产能力大幅减少，从而严重抑制畜牧业发展，给畜牧业生产和对外贸易带来巨大损失。所以，我国把口蹄疫定为一类动物疫病[3-5]。

本研究对2017-2021年南平市顺昌县抽检的1 670份血清样品进行O型口蹄疫（FMD）抗体检测并加以统计分析，以期为顺昌县当地动物疫病防控管理部门提供科学精准的疫病防控技术支撑和决策参考。同时为“春防秋控”建立标准化采样体系，对各地区、各养殖场临床生产的疾病预防、疾病控制与免疫程序调整提出科学的建议，推动当地畜牧业健康快速发展。

1 材料与方法

1.1 样品来源及处理 本中心于2017-2021年采集南平市顺昌县牛羊血液样本共1 670份，每年采样情况见表1。样品采集后将采血管倾斜45°放置，室温静置2～4 h，待血液完全凝固后血清自然析出，3 000 r/min离心5 min，将上清转移至无菌离心管中，做好标记，置-20℃保存、备用。

表1 2017-2021年顺昌县牛羊血液样本采集情况

1.2 试剂 本研究所使用的O型FMD抗体ELISA检测试剂盒购自韩国金诺。试剂盒中含有标准阳性血清、标准阴性血清、样品稀释液、辣根过氧化物酶（HRPO）、已包被好抗原的96孔酶联反应板、洗涤液、TMB底物溶液和终止液等。

1.3 方法与结果判定 将O型FMD抗体ELISA检测试剂盒从4℃冰箱中提前取出，恢复至室温（25℃左右）。检测操作步骤及结果判定均按照抗体检测试剂盒说明书进行。

1.4 数据处理与分析 用Excel软件对2017-2021年南平市顺昌县牛羊血清样品中O型口蹄疫抗体检测结果按不同年份、不同季节和不同养殖场类型进行统计分析。使用IBM SPSS Statistics 21统计学软件对不同年份、不同季节和不同养殖场类型的抗体阳性率进行卡方检验，统计分析其差异性，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著。

2 结 果

2.1 不同年份O型口蹄疫抗体检测结果 由表2可知，2017-2021年南平市顺昌县牛羊O型FMD抗体每年的阳性率分别为69.7%、80.0%、78.1%、95.4%和97.2%，除2019年外，其余年份的合格率呈现逐年上升趋势。经卡方检验，2017年与2018年相比，存在极显著差异（P＜0.01）；2018年与2019年相比，不存在显著差异（P＞0.05）；2019年与2020年相比，存在极显著差异（P＜0.01）；2020年与2021年相比，不存在显著差异（P＞0.05）。

表2 2017-2021年O型口蹄疫抗体年度检测结果

表3 2017-2021年O型口蹄疫抗体春秋季检测结果

2.2 不同季节O型口蹄疫抗体检测结果 根据表3的统计结果，绘制不同季节抗体合格率柱状图，图1A和图1B分别为2017-2021年春季和秋季的抗体检测结果。2017-2021年春季的平均合格率为85.5%，秋季的平均合格率为84.0%，经卡方检验，春季和秋季的合格率不存在显著性差异（P＞0.05）。

图1 2017-2021年春秋季抗体合格率柱状图

2.3 不同养殖场类型O型口蹄疫抗体检测结果根据表4进行统计分析，结果显示2017-2021年散养户的平均合格率为81.3%，规模场的平均合格率为90.5%，经卡方检验，散养户和规模场的合格率存在极显著性差异（P＜0.01）。

表4 2017-2021年不同养殖场类型抗体检测结果

3 分析与讨论

3.1 影响血清学检测的因素 牛羊血清学抗体检测结果的可信度受到个体差异、不同抗原的特性、母源抗体、感染或免疫后的时间、免疫次数或再次感染等多种因素的影响，因此，在血清学标准采样中应该对养殖场的存栏情况、生产情况、免疫情况、历史抗体检测情况、养殖场常见问题等进行全面了解并登记，采样比例需根据各方面情况综合评定后才能制定针对各阶段、各类型牛羊的科学采样方案。例如口蹄疫疫苗免疫后，一般是在21 d左右抗体效价达到高峰期，在检测牛羊口蹄疫抗体时，如果采样过早或过晚，可能会导致抗体检测结果偏低，因此，建议在免疫后21 d左右进行采样检测，效果最佳。

3.2 FMD抗体检测在牛羊生产中的重要性 目前，多半的发达国家已经根除了口蹄疫，口蹄疫的发病国家主要集中在发展中国家[6]。国际上，对口蹄疫的防控，主要包括通过免疫、扑杀和监测等各种措施来防范和遏制口蹄疫的传入[7]。血清学检测技术是各个养殖生产领域中疾病诊断和防控的关键技术手段，定期有计划地对牛羊开展FMD抗体检测，对检测结果进行统计分析，既能够掌握牛羊口蹄疫抗体的消长变化规律，为制定最佳的免疫规划，及时加强免疫，从而提升牛羊的抗体水平，也可以评估牛羊的免疫效果，改善和优化现有的免疫程序，同时对检测结果进行建档，了解牛羊群体健康情况，可作为疫病防控的重要依据。根据抗体检测结果，可以分析养殖场当前的实际生产问题以及可能由哪些因素所引起，进而提出具体的优化方法，最后目的就是实现对相关疾病的净化，从而缓解养殖场的实际生产问题，并提高养殖场生产业绩。通过对FMD抗体进行监测，可以避免牛羊出现免疫空白期，提高群体免疫保护力，即使养殖场出现零星病例，也能够有效防止大规模疫情暴发。另外，通过对未免疫的牛羊进行FMD抗体水平检测，能够及时发现隐形感染病例，进而精确地掌握养殖场的污染情况，进一步制定疫情防控措施。

3.3 抗体低下情况下的补免及预防保健建议 血清学ELISA检测法具有性价比高、高效安全、特异灵敏度好等优势，养殖场平常应定期进行各种疾病抗体的检测，防重于治，要巧用检测来降低或消除风险。平常的抗体检测是最重要的，不要等发病了才去采血检测。特别是当养殖场发展到一定规模，要做好可持续经营发展，必须重视抗体检测。不管养殖场大小，科学的做法就是每季度给牛羊群做一次健康体检。同时要注意抗体监测样品要有相当的数量才具有统计意义，数量太少时不能代表整个养殖场的抗体水平，数量过多时不经济，小型及散养户各阶段建议按10%～30%比例进行采样。

通过科学的方式分析牛羊免疫状况，为养殖场管理人员提供数字化的免疫学信息，并指导养殖场科学规划整体生产流程。2017-2021年，顺昌县抽检的1 670份血清样品，除2017年的O型口蹄疫抗体合格率较低外，其他年份均达到78%以上，免疫效果达到我国最低标准（抗体阳性率≥70%）。通过对比发现，春秋两个季节的抗体合格率不存在显著性差异，春季的合格率略高于秋季。但是散养户的合格率与规模场存在极显著性差异，而且2017年的散养户合格率为67.3%，明显低于国家最低标准，表明可能出现漏免或免疫不合格的状况，所以，应该强化管理，并适时进行免疫。按照我国最低标准，建议进一步完善免疫程序，以提高牛羊的免疫合格率，以减少口蹄疫发生的可能性。

在我国，针对口蹄疫的防治措施主要是通过免疫技术来加以控制，同时采取一系列其他防控措施。如制定多种偶蹄兽动物的卫生防疫制度，定期对进出养殖场的车辆、养殖场环境、料槽和棚舍等进行多重消毒，阻止病原的传播，消毒剂可以选用过氧乙酸、石灰乳和烧碱等。为动物提供较好的生长环境，平时注重圈舍的卫生和消毒；普及和提高养殖户的疫病防控意识，促进防控工作的实施；养殖场内尽量做到自繁自养，非必要不引种；免疫工作认真进行，合理规范使用疫苗[8-10]。虽然我国对口蹄疫的防控措施到位，但是目前仍有部分地区出现散发性病例，主要原因是从国外引种，导致国外毒株不断传入，因此，针对口蹄疫进行快速诊断必不可少。

结果分析表明顺昌县牛羊O型口蹄疫免疫情况与免疫效果总体上较为理想，虽然2017年的免疫效果较差，但随后几年合格率显著提高，都能达到标准。由于各个年份、季节以及不同养殖场的免疫水平都有一定差异，所以，各地各场要针对养殖场自身情况，对口蹄疫的流行状况建立科学合理的免疫程序，并运用ELISA方法定期对牛羊进行常见疾病的普查，以有效消除隐性感染动物，定期对进 出养殖场的车辆和其他相关用品进行消毒，预防疾病于未然，最大限度减少因动物疾病所造成的经济损失。