复合酶制剂、柠檬酸和二甲酸钾组合添加对肉兔生长性能、养分表观消化率及免疫指标的影响

李燕平 詹海杰 曹 亮 党文庆 樊爱芳 上官明军 任克良

(山西农业大学动物科学学院，太原030032)

仔兔在哺乳期时虽然消化免疫系统尚未发育完全，但是由于受母乳中中链脂肪酸等物质的保护，能够免受致病菌的侵袭，但随着仔兔的生长，为了建立正常的肠道营养菌群结构，需要及时断奶以及补饲。在断奶后，由于外界因素的改变，仔兔极易出现腹泻的症状，严重的甚至导致死亡[1]。为了预防此类情况，抗生素是此前常用的主要添加剂以及促生长剂，我国已于2020年全面禁止饲粮中抗生素的使用，所以为了维护公共卫生与动物食品的安全，绿色抗生素替代品的研究便显得尤为重要。酶制剂是由氨基酸组成的蛋白质，在畜禽饲粮中添加酶制剂具有增强动物保健、增强内源酶活性、抗氧化以及抑菌杀菌等功能，其中一些功能与抗生素的作用接近或相同[2]。酸化剂能够改善畜禽饲粮的适口性，降低其消化道的pH，促进蛋白质和矿物质的吸收，常用的酸化剂包括乳酸、柠檬酸和甲酸等，并且一般情况下，复合酸化剂的腐蚀强度更弱，使用效果更佳[3-4]。近年来的研究表明，在饲粮中单独添加酶制剂或酸化剂对其生长有促进作用[5-8]，但目前饲粮中混合添加酶制剂+柠檬酸+二甲酸钾作为绿色添加剂对于肉兔生长发育影响的研究较少，由于3种物质不同浓度梯度组合排列较多，研究起来较为复杂，在前期研究[6,9-10]的基础上，本研究固定复合酶制剂的添加量，设定了不同梯度的柠檬酸和二甲酸钾的添加量，旨在研究断奶肉兔饲粮中添加复合酶制剂、柠檬酸和二甲酸钾对其生长性能、养分表观消化率、屠宰性能以及免疫指标等方面的影响，为两者在家兔实际的生产应用提供科学参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验中使用的复合酶制剂(酶活性：木聚糖酶≥12 000 U/g，碱性蛋白酶≥10 000 U/g，葡萄糖淀粉酶≥10 000 U/g，中性蛋白酶≥5 000 U/g以及酸性蛋白酶≥5 000 U/g)购自山东某酶制剂有限公司。一水柠檬酸(食品级)购自潍坊某实业有限公司。二甲酸钾购自日照某农牧发展有限公司(纯度97.0%)。

1.2 试验设计

试验挑选240只健康的伊拉商品断奶兔(公母各占1/2)，根据性别、体重将其随机分成4组，每组60个重复，每个重复1只兔。对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮+0.15%复合酶制剂的基础上，分别添加0.70%柠檬酸+0.30%二甲酸钾(Ⅰ组)、0.50%柠檬酸+0.50%二甲酸钾(Ⅱ组)、0.30%柠檬酸+0.70%二甲酸钾(Ⅲ组)。预试期5 d，正试期35 d。

1.3 基础饲粮

对饲料原料测定常规养分后，参考任克良[11]推荐的肉兔饲养标准，使用玉米、豆粕、豆秸杆粉、花生秧以及麸皮等原料混合配制基础饲粮，其组成及营养水平见表1。试验饲粮是由基础饲粮以及3种不同组合的添加剂分别混合制成。饲粮均为颗粒饲料，直径约4 mm。

1.4 饲养管理

试验选在某肉兔养殖场进行，在试验开始前对兔舍环境实施全面清洁消毒，兔舍每日强制通风。试验兔采用单笼饲养方式，每日的早、晚各饲喂1次。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

1.5 检测指标及测定方法

1.5.1 生长性能

从试验开始到结束，持续统计饲喂量，并固定每周测定1次空腹体重，分别计算得到平均日增重、平均日采食量以及料重比。

记录每日试验兔的腹泻和死亡情况，计算腹泻率、死亡率，公式如下：

腹泻率(%)==[腹泻只日数/(试验只数×
试验天数)]×100；
死亡率(%)=(死亡只数/试验只数)×100。

1.5.2 屠宰性能、免疫器官指数

试验结束时，从各试验组中挑选出8只(公母各占1/2)平均体重相近的试验兔进行屠宰，称量并记录宰前、胴体、头、各脏器、后腿肌肉以及背腰最长肌的重量。进而计算得到免疫器官指数、半净膛率、全净膛率、后腿率以及背腰最长肌率。

1.5.3 血清免疫指标

试验结束前2 d，从各试验组分别挑选8只(公母各占1/2)试验兔进行耳部静脉采血，血液静置后离心，采集血清随后装入EP管，测定血清免疫指标。该指标的测定采用上海酶联生物科技有限公司的试剂盒，其标准品线性回归与预期浓度相关系数(R2)≥0.99。

1.5.4 养分表观消化率

从各组分别选取8只(公母各占1/2)平均体重相近的68日龄试验兔，置于消化代谢笼内，单笼饲养，采用全收粪法进行消化代谢试验。记录5 d的排粪量与采食量。粪便进行烘干、粉碎处理后，参考《饲料分析及饲料质量检测技术》[12]中的建议方法，测定采集的饲粮样品及粪样中的常规养分含量，计算养分表观消化率。

1.6 数据处理和统计分析

使用Excel 2010软件对试验数据进行初步整理，采用统计分析软件SPSS 26.0进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，用Duncan氏法进行多重比较。腹泻率和死亡率采用卡方检验。除腹泻率、死亡率外，试验结果用平均值±标准差表示。P<0.01为差异极显著的判决依据，P<0.05为差异显著的判决依据。

2 结果与分析

2.1 复合酶制剂、柠檬酸、二甲酸钾组合对肉兔生长性能的影响

由表2可知，饲粮中添加复合酶制剂和柠檬酸、二甲酸钾对肉兔的末重、平均日采食量和腹泻率均无显著影响(P>0.05)；Ⅲ组、Ⅰ组、Ⅱ组的平均日增重分别比对照组提高了7.91%(P<0.05)、5.38%(P>0.05)和2.76%(P>0.05)。Ⅲ组死亡率显著低于对照组(P<0.05)。

表2 复合酶制剂、柠檬酸和二甲酸钾组合对肉兔生长性能的影响

2.2 复合酶制剂、柠檬酸、二甲酸钾组合对肉兔屠宰性能的影响

由表3可知，饲粮中添加复合酶制剂、柠檬酸和二甲酸钾对肉兔的全净膛率、半净膛率、后腿率以及背腰最长肌率均没有显著影响(P>0.05)。

2.3 复合酶制剂、柠檬酸、二甲酸钾组合对肉兔养分表观消化率的影响

由表4可知，Ⅰ组和Ⅲ组的粗脂肪表观消化率均高于对照组，但差异不显著(P>0.05)，Ⅱ组的粗脂肪表观消化率最高，与对照组差异显著(P<0.05)。Ⅲ组的干物质、粗蛋白质、粗灰分、中性洗涤纤维以及酸性洗涤纤维表观消化率均比对照组高，但差异不显著(P>0.05)。

2.4 复合酶制剂、柠檬酸、二甲酸钾组合对肉兔免疫器官指数的影响

由表5可知，Ⅲ组的圆小囊指数显著高于对照组(P<0.05)；各试验组的胸腺指数、脾脏指数与对照组相比均无显著差异(P>0.05)。

表3 复合酶制剂、柠檬酸和二甲酸钾组合对肉兔屠宰性能的影响

表4 复合酶制剂、柠檬酸和二甲酸钾组合对肉兔养分表观消化率的影响

表5 复合酶制剂、柠檬酸和二甲酸钾组合对肉兔免疫器官指数的影响

2.5 复合酶制剂、柠檬酸、二甲酸钾组合对肉兔血清免疫因子含量的影响

由表6可知，Ⅲ组血清免疫球蛋白A(IgA)含量极显著高于对照组(P<0.01),同时显著高于Ⅰ组(P<0.05)；各试验组血清分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)高于对照组；Ⅲ组血清免疫球蛋白G(IgG)含量显著高于Ⅰ组(P<0.05)，同时极显著高于Ⅱ组(P<0.01)；所有试验组血清免疫球蛋白M(IgM)含量均极显著高于对照组(P<0.01)；在血清白细胞介素-10(IL-10)含量方面，Ⅱ组和Ⅲ组极显著高于对照组(P<0.01)。

3 讨 论

3.1 复合酶制剂、柠檬酸、二甲酸钾组合对肉兔生长性能的影响

复合酶制剂具有降解饲粮中的非淀粉多糖的能力，降低其黏性，减少养分在肠道的淤积，减少养分的流失，还能让肠道与养分更多的接触，有利于消化[13]。闫先峰等[5]在饲粮中添加0.5%的复合酶制剂，显著提高了断奶仔猪平均日增重，降低了其料重比。邱嘉辉等[14]研究发现，5种类型的酶制剂均能提高肉鸡料重比及增重等指标。李长喜等[15]研究发现，在育肥猪的饲粮中添加复合酶制剂能够显著降低料重比，增加屠宰后的背膘量。柠檬酸是畜牧业中使用最多的有机酸化剂之一[16]；二甲酸钾具有良好的生物降解性，且更容易被加工[17]。它们能够增加胃蛋白酶的活性、降低肠道内容物的pH、提高肠道与胰腺中消化酶的活性[18]。郑建婷等[6]在断奶肉兔饲粮中分别添加了0.5%、1.0%和1.5%的柠檬酸，提高了肉兔的平均日增重，降低了料重比。费洪标等[19]在断奶獭兔的饲粮中分别添加0.05%、0.10%与0.15%的酸化剂，试验结果发现0.10%的添加量对于增加平均日增重与降低料重比效果最佳。Ragaa等[7]发现在饲粮中添加0.45%二甲酸钾可以提高艾维茵肉鸡的生长性能。本研究将复合酶制剂和柠檬酸、二甲酸钾混合添加到断奶肉兔的饲粮中，结果发现，在复合酶制剂添加量0.15%的基础上，添加不同比例的柠檬酸和二甲酸钾，均可提高肉兔的平均日增重并降低料重比，当柠檬酸和二甲酸钾的添加量为0.30%和0.70%时，能够显著提升断奶肉兔的生长性能。

表6 复合酶制剂、柠檬酸和二甲酸钾组合对肉兔血清免疫因子含量的影响

幼兔由于其消化系统与免疫系统尚未完全发育成熟，很容易因病原菌的感染而出现肠道菌群失衡，从而导致腹泻。抗生素能够预防并治疗腹泻，但是它的使用可能会扰乱肉兔的菌群平衡，而酸化剂与酶制剂作为绿色抗生素替代品，前者能够维持肉兔消化道的酸性环境，为正常菌群提供适宜环境，后者又能够弥补幼兔不能分泌足够内源酶的问题，刺激有益菌群的生长，均有预防腹泻的功能[1,20]。闫先锋[5]等在仔猪的基础饲粮中添加0.5%的复合酶制剂，发现相比于对照组，试验组的腹泻率能够下降61.90%之多。郑建婷等[6]认为，断奶肉兔饲粮中添加1.0%与1.5%柠檬酸能够降低腹泻率及死亡率。李兆勇等[21]研究发现，添加0.6%、1.0%、1.4%的二甲酸钾到断奶仔猪的饲粮中均能显著缓解断奶仔猪腹泻的发生。在本试验中，饲粮中组合添加复合酶制剂+柠檬酸+二甲酸钾，具有降低断奶肉兔的腹泻率与死亡率的功效，当添加复合酶制剂0.15%+柠檬酸0.30%+二甲酸钾0.70%时，降低死亡率的效果最明显。

3.2 复合酶制剂、柠檬酸、二甲酸钾组合对肉兔屠宰性能的影响

屠宰性能包括全净膛率、半净膛率以及胴体重等主要指标，能够衡量肉畜及肉禽的产肉性能。郑建婷等[22]添加复合酶制剂到肉兔饲粮中，结果试验组与对照组在上述3个屠宰性能指标上均无显著差异。周传凤等[23]研究发现，小麦-杂粕型饲粮中添加复合酶制剂对肉鸡的各屠宰性能指标均无显著影响。陈赛娟等[24]将不同含量的单宁酸添加到獭兔的饲粮中，发现其对獭兔的胴体重和屠宰率等指标均无显著影响。王淑琴等[25]在肉仔鸡饲粮中添加0.75%的柠檬酸后，显著提高了21日龄肉鸡的全净膛率和腿肌率，但是几乎没有影响42日龄肉鸡的屠宰性能。本试验中混合加入的复合酶制剂和酸化剂对肉兔的全净膛率、半净膛率、后腿率以及背腰最长肌率等屠宰性能指标无不良影响。

3.3 复合酶制剂、柠檬酸、二甲酸钾组合对肉兔养分表观消化率的影响

通常认为，酸化剂能够提高消化酶的活性，降低肠道pH，改善碱性环境下某些矿物质元素难以吸收的问题，促进机体对养分的吸收。而酶制剂能够破坏食物中的细胞结构，增加其与消化酶的接触面积，同时降低食糜的黏稠度，促进食物的消化与吸收[26]。杨飞来等[27]添加了2种复合酶制剂到育肥猪的基础饲粮中，发现酶制剂组的饲粮粗蛋白质和粗纤维表观消化率显著提高。詹海杰等[9]在肉兔饲粮中添加酸化剂，显著提高幼兔对各养分表观消化率。陈焱等[28]将二甲酸钾添加到幼龄肉鸡的基础饲粮中，发现添加0.6%的二甲酸钾能够显著提高钙、磷及粗蛋白质表观消化率。上述结果表明，酶制剂及复合酸化剂均有提高畜禽养分表观消化率的趋势，在本试验中，饲粮中添加复合酶制剂+柠檬酸+二甲酸钾，提高了粗脂肪表观消化率，当添加水平为复合酶制剂0.15%+柠檬酸0.30%+二甲酸钾0.70%时，干物质、粗蛋白质、粗灰分、中性洗涤纤维以及酸性洗涤纤维表观消化率均比对照组有所提高。

3.4 复合酶制剂、柠檬酸、二甲酸钾组合对肉兔免疫指标的影响

胸腺是幼兔T细胞发育的场所，是重要的淋巴器官与免疫器官；脾脏是机体最大的外周免疫器官；而圆小囊是兔特有的一种免疫结构，可以作为屏障抵御烈性抗原的入侵[29]。一般来讲，免疫器官指数与免疫功能呈正向关系。孟亦蒙[30]将复合酶制剂添加到肉兔饲粮中，发现酶制剂没有显著影响胸腺、脾脏圆小囊指数。刘干[8]的试验表明，复合酶制剂在一定程度上提高了肉鸡的免疫器官指数。冯国亮等[10]将不同浓度的复合酸化剂添加到断奶幼兔的饲粮中，发现酸化剂并没有显著影响幼兔脾脏、胸腺与圆小囊的生长，但是随着酸化剂添加量的上升，胸腺指数有下降趋势。本试验结果表明，在基础饲粮中组合添加复合酶制剂和柠檬酸、二甲酸钾，当柠檬酸添加比例较高时，胸腺指数和脾脏指数最大；当柠檬酸添加比例较低时，脾脏指数比对照组减小。Valchevg[31]将酶制剂与酸化剂的混合物添加到饲粮中降低了肉鸡的脾脏指数，亦反映了这一结果。

血清中的三大类免疫球蛋白IgG、IgA与IgM，能够与抗原发生免疫反应，从而阻断病原体对机体的危害。IgG在自然被动免疫中起重要作用；IgA能够以非炎症行为消灭多数抗原，具有重要的维护机体稳定的免疫功能；IgM作为一种免疫球蛋白，是免疫应答中抗原最早产生的，是一种高效能的抗生物抗体，机体的早期防御与其息息相关[29]。sIgA能抑制附着在黏膜上的病原体，可以看作机体抵抗入侵的第1道防线。白细胞介素属于淋巴因子，能够参与机体的免疫应答，与血细胞生长因子共同协调，具有传递信息、激活细胞的作用；白细胞介素-6(IL-6)具有刺激T细胞以及B细胞的功效，在抗感染免疫中起重要作用，IL-10能够促进抗体的产生，还能抑制某些细胞的免疫应答[32]。郭骥[33]发现在母猪的饲粮中添加0.2%的普肥特酸化剂，对血清中的IgA、IgG含量无显著影响。陈丹蝶等[34]在玉米-豆粕的基础饲粮中添加复合酶菌制剂，发现能显著提高肉鸡血清中IL-6的含量，但对IgA、IgG、IgM以及IL-10的含量影响不大。翟振亚等[35]的试验结果表明，基础饲粮中添加的1%的二甲酸钾能够显著提高断奶仔猪血清IgM的含量。赵莉等[36]将酶联制剂与酸化剂添加到42日龄肉鸡饲粮中，发现血清中3种免疫球蛋白的含量能够提高30%以上。本试验中，添加复合酶制剂、柠檬酸和二甲酸钾的试验组跟对照组相比，提高了血清中的免疫球蛋白和细胞因子的含量。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组间相比，Ⅲ组(即复合酶制剂、柠檬酸、二甲酸钾的添加水平为0.15%、0.30%、0.70%)极显著提高血清中IgA、IgG以及IL-10的含量，血清IgM含量也呈升高趋势，因此，Ⅲ组提高机体的免疫反应效果最好。

4 结 论

综合分析生长性能、屠宰性能、免疫指标以及养分表观消化率等方面的结果可以得出，肉兔饲粮中组合添加复合酶制剂、柠檬酸、二甲酸钾，能够提高其生长性能、降低死亡率、提高免疫力，对肉兔屠宰性能与养分表观消化率无不良影响。本试验条件下，肉兔饲粮中复合酶制剂和酸化剂的适宜组合添加水平为：复合酶制剂0.15%+柠檬酸0.30%+二甲酸钾0.70%。