淮安市新生儿耳聋基因筛查结果分析*

孙春霞，朱晓琴，王玉美，王慧，丁伟洁，张长立

（1.淮安市妇幼保健院，江苏 淮安 22300 1；淮安市妇幼保健院2.保健部；3.新生儿疾病筛查科；4.群体保健科，江苏 淮安 223001；5.中国矿业大学公共管理学院，江苏 徐州 221000）

耳聋是新生儿中常见的先天性疾病之一，如果未被及时诊断或治疗，不仅影响新生儿语言的学习，还会导致心理和行为异常，在教育、就业等方面有诸多限制，加重家庭的负担［1-2］。我国新生儿中先天性耳聋发病率将近有3‰，其中重度以上的先天性耳聋患者占0.1%～0.3%，90% 以上出生于听力正常家庭［3］。因此，对新生儿进行耳聋基因检测，不但可以提高遗传性耳聋患者的检出率，还能指导生育、改善预后以及明确诊断标准。淮安地区自2019 年开始进行新生儿耳聋基因筛查。本研究采用微阵列芯片法对淮安地区7 660 例新生儿4 个耳聋基因的15 个位点进行检测。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2019 年12 月至2020 年9 月在淮安市出生并自愿接受耳聋基因检测的7 660 例新生儿为研究对象。

1.2 基因检测

采集出生3～7 天并充分哺乳的新生儿足跟血，制成≥8 mm 的干血斑，于4℃保存。通过PCR 扩增，使用微阵列芯片法对4 个常见致聋基因的致聋位点进行检测，对阳性结果采用高通量测序方法复核验证。

1.3 听力筛查

新生儿出生48 小时后，在自然睡眠状态下，于环境噪声＜40 dBA 的房间使用耳声发射进行听力筛查，初筛不通过则联系父母进行复筛。

2 结果

2.1 15 位点检测结果

2.1.1 耳聋基因单基因突变位点筛查结果 7 660例受检新生儿中，共检出耳聋基因突变者478 例，突变携带率为6.24%。单基因突变467 例，其中GJB2 突变228 例，突变携带率约2.98%；GJB3 突变28 例，突变携带率约0.37%，SLC26A4 突变193 例，突变携带率约2.52%；线粒体12SrRNA 突变18 例，突变携带率约0.23%。见表1、图1。

图1 耳聋单基因突变位点筛查结果（15 位点）

2.1.2 两个及以上耳聋基因位点突变筛查结果7 660 例耳聋基因突变者中发现11 例两个及以上耳聋基因位点突变，突变携带率0.14%。其中，GJB2 双杂合突变2 例；GJB2/SLC26A4 双杂合突变7 例；GJB2/GJB3 双杂合突变1 例；GJB2/线粒体12SrRNA 双杂合突变1 例。见表1、图2。

图2 两个及以上耳聋基因突变位点突变筛查结果（15 位点）

表1 淮安市新生儿耳聋基因筛查统计结果（15 位点）

续表1 淮安市新生儿耳聋基因筛查统计结果（15 位点）

2.2 高通量测序法100 位点复核检测结果（除去与15 位点重复数例）

2.2.1 耳聋基因单基因突变位点筛查结果 7 660例受检新生儿中，共检出耳聋基因突变者109 例，突变携带率为1.42%。单基因突变109 例，其中GJB2 突变20 例；GJB3 突变7 例；SLC26A4 突变46 例；线粒体12SrRNA 突变36 例。见表2。

2.2.2 两个及以上耳聋基因位点突变筛查结果7 660 例耳聋基因突变者中发现1 例两个及以上耳聋基因位点突变，为GJB3/SLC26A4c.547G＞A/c.697G＞C双杂合突变。见表2、图3。

图3 耳聋单基因突变位点筛查结果（100 位点）

表2 淮安市新生儿耳聋基因筛查统计结果（100 位点）

续表2 淮安市新生儿耳聋基因筛查统计结果（100 位点）

2.3 听力筛查结果

除去婴儿不配合，家长不了解听筛结果等无效数据外，在7 660 例新生儿听力筛查结果中，听力筛查未通过者39 例，未通过率0.51%。

3 讨论

截至2018 年2 月底，全国新生儿耳聋基因免费筛查已完成269.91 万例。筛查发现，在覆盖12个省区市、近270 万检测总量中，耳聋基因突变比例为4.37%，即每百名中国人里，约有4～5 人携带耳聋基因［4］。

从文中看，淮安市7 660 例新生儿耳聋基因携带率为6.24%，高于山东地区的5.04%［5］，北京海淀区的4.0%［6］，湖南省的3.68%［7］，珠海地区的4.2%［8］；这可能与检测方法以及我国不同地区耳聋基因分布频率不一致有关。

从统计结果看，突变基因中以GJB2 突变和SLC26A4 突变为主，携带率分别为2.98% 和2.52%；其次为GJB3 突变，突变携带率约0.37%；线粒体12SrRNA 突变所占比例最小，突变携带率约0.23%；该顺位与其他省份基本一致［9-11］。在双突变类型中，GJB2/SLC26A4 双杂合突变所占比例最高，数量为7 例；其次是GJB2 双杂合突变，数量为2 例；GJB2/GJB3 双杂合突变与GJB2/线粒体12SrRNA 双杂合突变在本次统计中均为1 例，数据过小具有偶然性，不能作为估计其发生概率大小的依据。

从表1 数据还可以看出，无论是单基因突变还是多基因突变，均以GJB2 和SLC26A4 突变为主。GJB2 基因属于常染色体隐性遗传，是导致非综合征型遗传性耳聋最常见的突变基因。该基因纯合或复合杂合突变可导致双耳先天性重度、极重度感音神经性耳聋，发病年龄主要在婴幼儿期［12］。本次筛查共检出228 例GJB2 单基因杂合突变、11 例双杂合突变。SLC26A4 基因突变也为常染色体隐性遗传，需要纯合突变或复合杂合突变（同时有2 例致病位点杂合突变）才会发病，单例位点的单杂合突变为携带者，一般不发病［13］。本次筛查共检出193 例SLC26A4 单基因杂合突变、7 例双杂合突变。

除以上15 例位点外，本次筛查还对常见耳聋基因的其他突变位点进行了检测，共计100 例。我们发现以下基因位点突变也有相对较高的携带率，如线粒体12SrRNA m.7444G＞A 均质突变；SLC26A4 c.697G＞单杂合突变；GJB2 c.512insAACG单杂合突变；GJB2 c.257C＞G 单杂合突变。见表2。

新生儿耳聋基因筛查技术的发展与进步为听力残疾儿童带来福音，超过60%的耳聋与遗传相关，要预知、预防、诊断耳聋，基因筛查非常有效。通过新生儿耳聋基因筛查，可以指导抗生素的应用。氨基糖甙类抗生素可导致耳聋，其中一部分患者（线粒体DNA A1555G 基因突变）对上述药物极其敏感，少剂量短时应用此类抗生素后也有可能发生耳聋，所谓“一针致聋”［14］。因此在用药前进行耳聋基因检测是非常必要的。除了明确耳聋的病因，尚可指导携带线粒体DNA A1555G基因突变但未发病母亲家族中的亲属用药，避免他们因使用氨基糖甙类药物也发生耳聋的悲剧。

基因筛查可以帮助我们明确病因，预测疗效。如基因诊断结果提示先天性耳聋是由于GJB2 基因突变导致的，那该患儿的听神经及传导通路以及听觉语言中枢应该是正常的，进行人工耳蜗移植可以获得良好的效果［15］。

此外，基因筛查对地区出生缺陷防控有很大意义［16］。通过耳聋基因筛查可以指导婚育，优生优育。对已生育一个聋儿的家庭，可进行再次生育时的产前基因诊断，避免再次生育聋儿；对第一胎为耳聋基因携带者的儿童父母，可进行第二胎产前基因诊断，避免第二胎生育聋儿。对耳聋基因携带者进行婚配指导，应避免与同一基因型突变携带者生育后代，或进行产前遗传咨询及诊断。

但是目前我们并没有掌握新生儿遗传性耳聋基因的全部，部分新生儿的先天性耳聋仍无法用现有研究成果进行解释，还需要进一步研究相关基因位点。