狼毒素对柞蚕幼虫的毒性与安全性评价

王立石，赵鸿宇，陈有嗣，赵世文

（辽宁省蚕业科学研究所，辽宁凤城 118100）

0 引言

柞蚕业是辽东山区的特色产业，柞蚕茧是山区蚕农的主要经济收入来源，在推进脱贫地区乡村振兴起到重要作用。柞蚕属于鳞翅目昆虫，在野外放养，易受环境及各种人为因素影响，特别是周边果园和农田用药影响较大[1]。农田、果园在使用杀虫剂过程中容易造成柞蚕中毒，因农田及果园用药造成柞蚕损失的纠纷时常发生。狼毒素是药用植物瑞香狼毒的提取物，对害虫具有触杀和胃毒作用。药液可通过害虫体表吸收进入昆虫体内，影响害虫细胞的新陈代谢，杀死肠壁细胞，致害虫功能衰竭而死亡。主要用于蔬菜等作物害虫防治。对作物无不良影响，未见药害发生，对绒茧蜂、瓢虫等天敌较安全[2]。

张燕等、张骞等研究报道了狼毒素对家蚕的毒性及安全性，对柞蚕的毒性及安全性未见报道。狼毒素属于生物农药，对作物、动物及天敌较安全，使用范围越来越广，对柞蚕的潜在威胁会越来越大。明确狼毒素对柞蚕的毒性和安全性，对柞园周边农作物合理用药有重要意义，可以合理避免一些不必要的蚕业纠纷，降低不合理用药问题造成蚕业经济损失。因此，通过科学试验方法测定狼毒素对柞蚕毒性及安全性，可以为柞园周边果园、农田等农户安全合理用药提供理论依据。为此，我们于2020年6月采用喷施法测定狼毒素对柞蚕的毒性及安全性，结果如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试蚕。柞蚕品种为抗大×9906，蚕种由辽宁省蚕业科学研究所提供。试验用蚕为春季3龄柞蚕幼虫。

1.1.2 试验地。试验地为辽宁省蚕业科学研究所研发基地试验柞园，试验用树为4年生麻栎。

1.1.3 供试药剂及器械。供试药剂为狼毒素水乳剂，含量1.6%，由甘肃国力生物科技开发有限公司生产。器械为小型农用喷雾器、试验量具等。

1.2 试验方法

1.2.1 毒性试验（喷施法）。1.6%狼毒素水乳剂用水稀释，浓度为16、8、4、2、1、0.5、0.25 mg/L；以清水为对照。试验区柞蚕幼虫3眠起80%时，进行试蚕挑选，挑选体型大小一致的试蚕布置在试验柞树上，试蚕柞树间隔2 m以上，防止试蚕逃逸到邻近非试验柞树。每个浓度重复3次，清水对照重复4次，每个重复50头试蚕，待试蚕全部上树正常取食后进行药剂毒性试验。试验前试验区要进行地面清理，剔除多余的杂树及杂草，保证试验柞树下无杂草及枯枝落叶，清理标准是试验时可以及时发现落地试蚕。喷药及喷水标准以蚕体及柞树叶布满雾滴为度，柞树叶片正反面要喷施均匀，无遗漏。喷药时选择晴朗无风天气，防止药液漂移到邻区试验柞树上。喷药试验区柞树悬挂醒目标识牌，方便试验观察记录。喷药后随时调查并记录试蚕中毒及死亡情况。

1.2.2 熏蒸毒性试验。将1.6%狼毒素水乳剂稀释成500、1 000、2 000 倍液，以清水为对照。购置市售口大底小容量为100 L（高110 cm、直径55 cm）的塑料桶进行改装，用消毒木条制成大间隙隔板，固定在桶内距桶底70 cm处，作为熏蒸试验用具。试验用具进行严格消毒后，放无菌养蚕室备用。熏蒸试验时，分别取配置好的各浓度药液10 ml，均匀滴在10 cm半径的滤纸上，滤纸置于塑料桶底部；在无毒纱网袋内放入带叶柞树枝条，每个纱网袋内放入30头3龄试蚕，将纱网袋放置于桶内木质隔板上，盖上桶盖。将密闭塑料桶置于阴凉通风柞树下，熏蒸24 h后取出，调查试蚕生长情况，根据试蚕生长情况决定是否进行下一个24 h熏蒸试验。熏蒸试验期间根据试蚕取食情况，随时添加新鲜柞树枝叶，添加柞树枝叶要迅速，尽量缩短开盖时间，以免影响熏蒸试验结果。根据实际情况，熏蒸试验连续进行72 h，然后把剩余试蚕转移至柞园内标记饲养。

采用SPSS统计软件中的Probit模块进行分析，统计分析狼毒素对3龄柞蚕幼虫的毒力测定数据。

2 结果与分析

2.1 供试药剂对柞蚕幼虫的毒力

狼毒素溶液喷施试蚕后，开始试蚕无明显反应，4 h后试蚕停止取食，静卧不动；12 h后试蚕表现蚕体变软、收缩等症状（见图1）；24 h后试蚕用尾足抓住树枝，头部下垂，陆续死亡；48 h后中高浓度处理试蚕死亡率100%（见表1）。

表1 供试药剂不同浓度中毒死亡蚕数

图1 狼毒素引起的柞蚕幼虫中毒症状

经SPSS 软件分析得出狼毒素对3龄柞蚕幼虫的毒力回归方程（见表2）。据此计算狼毒素溶液对3龄柞蚕幼虫的48 h LC50为1.347 mg/L，95%置信限为1.016～1.770 mg/L。参照农药对家蚕的毒性等级划分标准，可知狼毒素溶液对柞蚕属高毒级，致死作用强。

表2 供试药剂对柞蚕的毒性

2.2 供试药剂对柞蚕幼虫的熏蒸毒性

1.6%狼毒素水乳剂稀释成500倍、1 000倍、2 000倍液，分别密闭熏蒸试蚕72 h后，未发现试蚕有中毒症状，生长发育与对照比较无差异。将熏蒸72 h的试蚕放入柞园内，标记饲养。直到试蚕做茧期间，未发现试蚕有中毒症状，生长发育与对照相似，调查柞蚕茧蛹与对照无差异。表明狼毒素在供试浓度下对柞蚕熏蒸毒性极小。

3 结论与讨论

本次试验测定的狼毒素对3龄柞蚕幼虫的胃毒触杀毒性LC50（72 h）为1.347 mg/L，都属于高毒级（0.5 mg/L＜LC50≤20mg/L）。张燕等测定50%狼毒素母药对家蚕2龄幼虫的急性毒性LC50（96 h）为2.23×103mg/L，1.6%狼毒素水乳剂对2龄家蚕的急性毒性LC50（96 h）为75.5 mg/L[4]。吕铭潇等测定50%狼毒素母药对家蚕2龄幼虫的LC50（96 h）为2.226×103mg/L[8]。张骞等测定50%狼毒素母药对家蚕2龄幼虫的LC50（96 h）为2.226×103mg/L[5]。韩志华等测定5%瑞香狼毒素A生物灭蚜剂EC对家蚕2龄幼虫的LC50为3.11 mg/kg[9]。黄晓等测定瑞香狼毒素乙醇提取物对家蚕2龄幼虫的LC50为977 mg/L。说明狼毒素母药对2龄家蚕幼虫为低毒级，1.6%狼毒素水乳剂对2龄家蚕幼虫为高毒级。1.6%狼毒素水乳剂对3龄柞蚕幼虫LC50为1.347 mg/L；对家蚕2龄幼虫LC50为75.5 mg/L，对3龄家蚕幼虫的LC50值可能更高。和家蚕相比，1.6%狼毒素水乳剂对柞蚕的毒性更强，说明柞蚕幼虫对狼毒素比家蚕幼虫敏感。狼毒素母药对家蚕幼虫低毒，但农药商店没有成品出售，在生产上使用的只有1.6%狼毒素水乳剂一种，所以狼毒素母药在实际使用中对柞蚕生产影响较小。熏蒸试验结果表明，狼毒素对柞蚕幼虫熏蒸毒性极小。

1.6%狼毒素水乳剂是甘肃国立生物科技开发有限公司以瑞香狼毒开发的植物源杀虫剂，是目前市面上可以收集到的唯一狼毒素成分的成药，属于生物农药。与传统化学农药相比，生物农药对哺乳动物和天敌安全，作用于靶标昆虫，对非靶标昆虫较安全，对环境影响较小，可以较好地保持大环境生物多样性，维护生态平衡。普遍的观点认为，植物源农药来源于大自然植物，对环境及生物的影响较小。但是生物农药并不等于安全农药，本试验测定结果证明，1.6%狼毒素水乳剂对柞蚕高毒，影响较大。

试验时用浓度16 mg/L狼毒素溶液喷施5龄柞蚕幼虫，48 h后5龄柞蚕幼虫全部中毒死亡，中毒症状和3龄柞蚕幼虫相似。可见柞蚕各龄期幼虫对市售1.6%狼毒素水乳剂都极为敏感，所以在柞园周边使用1.6%狼毒素水乳剂，对柞蚕生产潜在威胁较大，因此，柞园内禁止使用。1.6%狼毒素水乳剂对柞蚕幼虫无熏蒸作用，在柞园周边使用前，施药者和蚕农进行协商，保证无药液漂移柞园内或选用对柞蚕较安全的药剂。