复合益生菌对雄性AA肉仔鸡胸腺发育的影响

韩亚楠，赵浩强，王 军，张 曼，李月勤，霍 军，宋予震，张利卫

(1.开封市畜牧工作站，河南 开封 475000；2.河南牧业经济学院 动物医药学院，河南 郑州 450046)

益生菌能够调节宿主肠道菌群平衡[1]。畜禽肠道内存在大量且种类繁多的菌群，它们相互协作配合,保持动物机体肠道健康。外源益生菌能平衡动物肠道菌群，保护动物肠道黏膜并对机体免疫系统产生积极影响[2,3]。Zhang等[4]的研究表明，复合益生菌显著提高肉鸡血清的IgA和IgM含量。胸腺是机体的重要淋巴器官，与免疫紧密相关，是T细胞分化、发育、成熟的场所[5]。本试验研究复合益生菌制剂对肉鸡胸腺发育的影响，为利用复合益生菌制剂改善肉鸡的生产性能和免疫功能提供实践依据，为肉鸡的健康养殖提供科学指导。

1 材料与方法

1.1 益生菌制剂

牧丁宝Ⅰ、牧丁宝Ⅱ、丁酸梭菌和益芪康，由河南金百合生物科技股份有限公司提供。牧丁宝I的主要菌种为丁酸梭菌和枯草芽孢杆菌。牧丁宝Ⅱ的主要菌种为丁酸梭菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌等。丁酸梭菌制剂是富含丁酸梭菌的液态益生菌。益芪康制剂的主要菌种为丁酸梭菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌等，加入了黄芪、甘草和刺五加等中草药。

1.2 试验设计

选取1日龄体重50～55 g雄性AA肉仔鸡75只，随机分为A、B、C、D、E 5个组，每组5个重复，每个重复3只鸡。A、B、C、D为试验组，E为对照组。E组饲喂基础日粮，基础日粮的组成和营养水平如表1所示，A、B、D组分别在基础日粮中添加0.1 g/kg牧丁宝Ⅰ、0.15 g/kg牧丁宝Ⅱ、1 g/kg益芪康，C组将丁酸梭菌溶于水，按照0.2 mL/只·天饮水。试验期为21天。

表1 基础日粮的组成及营养水平

1.3 取样

第21天，肉仔鸡空腹称重，颈部放血处死。取出胸腺，剔除多余脂肪组织后，称取胸腺重，计算胸腺指数，胸腺指数=胸腺重/肉鸡体重×100%。将胸腺放于10%甲醛中固定。

1.4 石蜡切片制作、HE染色及观察

取出固定好的胸腺，制作石蜡切片并进行HE染色[6]。经酒精(70%、80%、90%、95%、100%)脱水、二甲苯透明、石蜡包埋等步骤制备5 μm厚石蜡切片。

HE染色步骤为：二甲苯10 min 两次，酒精(100%Ⅰ，100%Ⅱ、95%、90%、80%、70%)各3 min，苏木素6 min，1%盐酸酒精10 s，蒸馏水10 min，酒精(70%、80%、90%)各3 min，伊红1 min，95%酒精3 min、100%酒精3 min，二甲苯3 min 两次，中性树胶封片。用显微照相系统拍摄组织样本在4倍和40倍物镜下的照片，每个片子取5个视野。再用Image J测量4倍物镜视野内胸腺小叶整体面积和髓质的面积。

1.5 数据统计分析

用SPSS 18.0软件对数据进行单因素方差分析。数据表示为“平均值±标准差”，显著水准为P<0.05.

2 结果

2.1 复合益生菌制剂对肉仔鸡胸腺重的影响

如表2所示，与对照组相比，D组(益芪康)肉仔鸡胸腺重增加了32.51%(P<0.05)。与对照组相比，A、B、C组肉仔鸡胸腺重差异不显著(P>0.05)。

表2 21日龄肉仔鸡胸腺重 g

2.2 复合益生菌对肉仔鸡胸腺指数的影响

如表3所示，与对照组相比，D组(益芪康)肉仔鸡胸腺指数增加了20.54%(P<0.05)。与对照组相比，A、B、C组肉仔鸡胸腺指数差异不显著(P>0.05)。

表3 21日龄肉仔鸡胸腺指数

2.3 复合益生菌对肉仔鸡胸腺皮质与髓质比的影响

由表4和图1可知，与对照组相比，B组和D组肉仔鸡胸腺皮质与髓质比显著增加(P<0.05)；与对照组相比，A组和C组肉仔鸡胸腺皮质与髓质比差异不显著(P>0.05)。

表4 21日龄肉鸡胸腺皮质与髓质比

注：A、B、C、D、E组分别为牧丁宝Ⅰ组、牧丁宝Ⅱ组、丁酸梭菌组、益芪康组、对照组；图中黑色三角形区域为皮质，黑色五角星区域为髓质，图中标尺100 μm。

3 讨论

胸腺重量大小在一定程度上反应了动物机体免疫机能的强弱。本试验发现在饲料中添加益芪康制剂能够增加肉鸡胸腺重。于明等[7]的研究发现，饲料中添加复合益生菌制剂能够提高肉鸡的免疫功能。刘凤美等[8]研究发现，益生菌能提高肉鸡免疫器官的发育。本试验的结果表明，益芪康显著提高肉鸡的胸腺指数。张雷等[9]发现，在白羽肉鸡的饮水中加入复合益生菌显著提高了白羽肉鸡胸腺指数，这与本试验的结果一致。这些试验结果说明，复合益生菌制剂能够促进肉鸡胸腺的生长。

胸腺有皮质和髓质两部分，皮质部的淋巴细胞多而密集，髓质部的淋巴细胞少而稀疏。胸腺皮质和髓质比，在一定程度上反映胸腺淋巴细胞的增殖情况。本试验中，益芪康组肉鸡胸腺皮质与髓质比显著大于对照组，表明益芪康能够显著促进胸腺淋巴细胞的增殖。