毛细管气相色谱法测定八宝五胆药墨中冰片的含量

许红叶，万 庆，孙 松

(1 铜陵市食品药品检验中心，安徽 铜陵 244000；2 合肥远志医药科技开发有限公司，安徽 合肥 230088)

八宝五胆药墨是由人工麝香、冰片、熊胆、人工牛黄等多味药材制成，具有消炎解毒、活血止痛、凉血止血、消肿软坚、防腐收敛等功效。用于吐血、咳血、鼻衄、便血、赤白痢下、痈疽疮疡、无名肿毒、顽癣、皮炎、湿疹等。该品种现收载于国家卫生部药品标准中药成方制剂第十四册中，其质量标准的质控方法仅有鉴别，未对处方中冰片的含量进行测定。经文献检索，未见对八宝五胆药墨的冰片的测定方法，为了更有效地控制本品质量保证药品疗效，本文在参考相关文献[1-8]与实验研究的基础上建立了毛细管气相色谱法测定八宝五胆药墨中冰片主要成分龙脑的含量测定方法。

1 仪器与试剂

1.1 仪 器

GC-2014C气相色谱仪，日本岛津仪器公司；HGH-300E氢气发生器、HGA-2L空气发生器，北京汇龙公司；SK1200H超声波清洗器，上海科导超声仪器有限公司；KQ-100E超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；AB135-S电子天平(d=0.01 mg)，梅特勒-托利多公司；BT25-S电子天平(d=0.01 mg)，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司。

1.2 试 剂

对照品为龙脑(批号为110881-201709)，中国食品药品检定研究院；八宝五胆药墨由某厂家提供，批号为A201101、A201102、A201103；水杨酸甲酯、无水乙醇为分析纯；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

以50%苯基-甲基聚硅氧烷为涂布液的毛细管柱(DM-17毛细管柱，柱长为30 m，柱内径为0.32 mm，膜厚度为0.25 μm)；检测器：氢火焰离子化检测器，气化室温度：210 ℃；检测器温度：250 ℃；柱温：初温 100 ℃(保持3 min)，以5 ℃/min升温至130 ℃(保持2 min)，再以50 ℃/min升温至220 ℃(保持21 min)；载气：氮气，流速：1 mL/min，进样量：1 μL；分流比5:1。理论板数按水杨酸甲酯峰计算，应不低于2000；龙脑与水杨酸甲酯峰的分离度应符合要求。

2.2 溶液的制备

2.2.1 校正因子测定

取水杨酸甲酯适量，精密称定，加无水乙醇制成每1 mL含67.83 μg的溶液，作为内标溶液。另取龙脑对照品适量，精密称定，加入内标溶液制成每1 mL含43.03 μg的溶液，摇匀，吸取1 μL注入气相色谱仪，计算校正因子。

2.2.2 供试品溶液的制备

取八宝五胆药墨10锭，研细，称取约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液40 mL，混匀，精密称定重量，超声处理10 min，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，吸取续滤液1 μL，注入气相色谱仪，测定，即得。

2.2.3 阴性对照溶液制备

按照处方组成，取除冰片外的其余药材，按制备工艺要求，制备缺冰片的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备缺冰片的阴性对照溶液。

2.3 专属性试验

分别精密吸取上述龙脑对照品溶液、内标溶液、供试品溶液和龙脑阴性对照溶液各1 μL，按上述“3.1”项下色谱条件进样测定，注入气相色谱分析，记录色谱图。结果表明，龙脑和水杨酸甲酯峰的理论塔板数为53288和78309，分离度13.5，分离度均大于2。缺冰片的阴性样品溶液色谱图中，在与龙脑色谱峰相应位置上无干扰，见图1所示。

图1 专属性试验(A-D)

2.4 系统适用性试验

精密吸取龙脑对照品溶液1 μL注入气相色谱仪，连续进样6次，其校正因子的相对标准偏差为0.47%(应≤2.0%)，符合药典规定。结果见表1所示。

表1 系统适用性试验

结果表明：本法测定冰片含量方法系统适用性良好。

2.5 线性关系考察

精密称取龙脑对照品8.91 mg，置10 mL量瓶中，用内标液溶解并稀释置刻度，摇匀，精密移取上述溶液5 mL，置50 mL量瓶中，用内标液溶解并稀释置刻度，摇匀，作为母液。精密移取母液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 mL分别置7个10 mL容量瓶中，用内标液稀释至刻度，摇匀。分别取1 μL注入气相色谱仪，记录色谱图，由龙脑峰面积和内标峰面积的比值(A)对溶液浓度(C)作线性回归，得回归方程，结果见表2所示。

表2 线性考察

结果表明：在17.250～68.999 μg/mL浓度间，本法的线性良好，回归方程为y=0.0222x+0.0098(R=1.0，n=7)。

2.6 精密度试验

取批号为A201101样品6份，照“3.1”项方法测定，计算相对标准偏差(RSD)。结果见表3所示。

表3 中间精密度考察结果

结果表明：RSD%=0.98(n=6)小于2，表明本法中间精密度良好。

2.7 重复性试验

取批号为A201101样品6份，照“3.1”项方法测定，计算相对标准偏差(RSD)，结果见表4所示。

表4 重复性试验

结果表明：RSD%=0.70(n=6)小于2，表明本法重复性良好。

2.8 稳定性试验

取对照品和批号A201101样品适量，照“3.1”项下方法处理，按气相色谱法(中国药典2020年版通则0521)用火焰离子化检测器检测，于配制后立即注入气相色谱仪，并分别于0、2、4、8、12、24 h注样分析，计算相对标准偏差(RSD)，结果见表5所示。

表5 稳定性试验

结果表明：校正因子RSD%=0.73(n=6)小于2，样品含量RSD%=1.00(n=6)小于2，在24 h以对照品溶液和内被测样品溶液基本稳定。

2.9 加样回收率试验

精密移取龙脑对照品适量，加入到已知含量(9.26 mg/g)(批号：A201101)的6份样品中，按“3.1”项下的方法测定，计算回收率[回收率=(测得量-样品含量)/加入对照品量×100%]，数据见表6所示。

表6 加样回收率试验

结果表明：本法测定冰片的平均回收率在95%～102%之间，且RSD小于2.0，加样回收率良好。

2.10 样品含量测定

取A201101、A201102、A201103三批样品，照“3.1”项冰片含量测定方法测定，计算含量。结果见表7所示。

表7 含量测定

3 结 论

冰片为八宝五胆药墨中主要药味之一，具有开窍醒神，清热止痛的作用。龙脑作为冰片中的主要有效成分选择测定龙脑的含量可更好地控制八宝五胆药墨的药品质量，保证药品的质量及有效性。

鉴于毛细管柱比填充柱具有更高的柱效和色谱分辨率，以及龙脑分子结构中含有一定的极性基团，在参考有关文献的基础上，我们选用了以50%苯基-甲基聚硅氧烷为涂布液的毛细管柱作为实验用色谱柱，通过实验考察发现样品中龙脑成分在50%苯基-甲基聚硅氧烷为涂布液的毛细管柱色谱柱条件拥有良好的分离效果，最终决定选用以50%苯基-甲基聚硅氧烷为涂布液的DM-17毛细管柱作为实验用色谱柱。

通过比较不同的提取溶剂(无水乙醇、乙醚、乙酸乙酯)发现无水乙醇溶剂提取的结果较其他溶剂充分，从溶剂的提取效率和环境安全考虑，选择无水乙醇作为提取溶剂。考察不同的提取时间(5 min、10 min、20 min)和不同的提取方式(超声、浸渍)，结果表明超声较浸渍提取充分，提取10 min已提取充分，故最终选择为用无水乙醇超声10 min作为样品的提取方式。