云南省楚雄地区猪戊型肝炎血清流行病学调查

段天才，杨贵树，苏琼珍，张海玲

（1.楚雄市动物疫病预防中心，云南 楚雄 675000；2.云南农业大学动物科学技术学院，云南 昆明 650201；3.楚雄市吕合镇农业农村服务中心，云南 楚雄 675009；4.楚雄市东瓜镇农业农村服务中心，云南 楚雄 675005）

0 引言

戊型肝炎这一疾病属于一种自限性、急性疾病，是由戊型肝炎病毒感染导致。在1989年东京国际非甲非乙型肝炎学术会议上，正式定名为戊型肝炎（HE）[1]。戊型肝炎病毒（hepatitisEvirus，HEV）是一种经肠道传播的肝炎病毒，猪是主要的病毒储库[2]。我国猪场养殖中，存在较为复杂的戊肝病毒流行情杂，往往具备较高的感染率，且同一区域可能会存在不同基因型混合感染的情况。病毒会进行基因重组，可以不断遗传进化在防治上存在一定难度[3]。

我国许多地区已有猪HE流行的报道，目前云南省尚没有文献报道。将云南省楚雄地区主要规模化猪场及屠宰厂的猪作为研究对象，通过血清学调查分析的方式，了解猪戊型肝炎的流行情况，掌握云南省楚雄地区是否有该病的存在及其流行分布情况，为深入开展云南省楚雄地区猪HE的病毒分离、分子流行病学调查、传播途径、发病机制研究及建立相应的检测和防制技术奠定基础[4-8]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 被检血清来源

2015年6月至2016年4月，随机选择云南省楚雄地区几个大型屠宰场和养殖场，采集血液样品，共计307份。置于37 ℃温箱1 h，3 000 r/min室温离心10 min，取上清，置于--20℃冰箱中冻存待检，样品采集情况见表1。

表1 血清样本采集情况

1.1.2 仪器材料

1.5 mL离心管、高速离心机、低温冰箱、移液枪、恒温培养箱、洗板机（BioTekElx50TM）、酶标仪（BioTekElx800TM），由云南农业大学动物医学实验教学中心提供。

1.1.3 检测试剂盒

检测过程中，应用到的方法是酶联免疫法，试剂盒是在北京万泰生物药业股份有限公司购买的猪戊型肝炎病毒IgG抗体诊断试剂盒。

1.2 试验方法

将试剂盒平衡至室温约30 min。选择50 mL浓缩洗涤液（20×），通过蒸馏水进行稀释，使其变为1 000 mL，以备后续使用。通过微孔板按照顺序进行样品编号，设置3个阴性对照孔、2个阳性对照孔、1个空白对照孔，其中，空白对照空中无需添加酶标试剂与样品。所有孔中加入100 μL样品稀释液，随后将待检样品及10 μL的隐性对照与阳性对照，通过轻微振荡后，使其混合均匀。封板后，将其放置于温度为37 ℃的环境中，半小时后，将封板膜去掉，利用洗板机进行洗涤，通常要洗5遍，最后一次应尽量减少其中水分。除空白孔外，所有对照孔均应加入100 μL的酶标二抗。同样，通过封板膜进行封板处理，将其放置在37 ℃环境中，放置半小时后，将封板膜揭掉，用洗板机进行5遍洗涤，尽量将其中水分排干。将显色剂A、B放如各孔中，加入量均为50 μL，并振荡均匀，放置于37 ℃避光环境下，显色15 min。将50 μL终止液加入到每个孔洞中，摇晃均匀，通过450 nm/630 nm酶标仪双波长，进行各孔A值测定。

1.3 结果判定

阴性对照孔A值不可超过0.1，若通过实际测量发现存在A值超过0.1的孔，应将该孔舍弃，如果大于0.1的孔超过1个，应重复实验。阳性对照孔A值不应低于0.8，若有两孔A值在0.8下，则需要重复实验。

临界值计算中，需要求得阴性对照孔A值均值，随后加上0.16，得出的数则为临界值。若样品A值≥临界值，说明抗体反应阳性，相反，则说明抗体反应阴性。

1.4 统计学处理

利用SPSS统计学软件，进行所有数据的统计学分析。

2 结果与分析

（1）在所检测的307份血清样品中，共有173份阳性血清，总体阳性率为56.35%。表明猪戊型肝炎在云南楚雄地区的流行较严重，检测结果见表2。

表2 样品中HEV-IgG抗体的诊断结果

（2）在所检测的307份血清样品中，129份采自育肥猪，81份呈阳性，阳性率为62.79%，73份采自仔猪，21份呈阳性，阳性率为28.77%。表明育肥猪戊肝感染率高于仔猪戊肝感染率。育肥猪与仔猪的戊肝感染在统计学上存在显著性差异（P＜0.05），检测结果见表3。

表3 不同年龄段猪血清样品HEV-IgG抗体诊断结果

（3）在所检测的307份血清样品中，88份采自母猪，62份呈阳性，阳性率为70.45%，17份采自公猪，9份呈阳性，阳性率为52.94%。表明性别对抗体水平测定值有影响，母猪的戊肝感染率显著高于公猪的感染率（P＜0.05），检测结果见表4。

表4 母猪、公猪血清样品HEV-IgG抗体诊断结果

（4）在所检测的307份血清样品中，有178份来自各个养殖场，检测阳性率为51.68%，129份来自屠宰场，检测阳性率为62.79%。结果发现屠宰场猪比养殖场猪出现较高的血清抗体阳性率，检测结果见表5。

表5 不同场所猪血清样品HEV-IgG抗体诊断结果

3 讨论

（1）戊型肝炎暴发流行的主要传播途径是经水传播，因为饮用了没有经过煮沸的河水，导致该疾病的流行，接触污水可能是维持感染HEV的重要危险因素[9]。

（2）统计学分析表明云南省楚雄地区猪HEVIgG阳性率与年龄呈显著相关，本研究中育肥猪阳性率要高于仔猪的，这与国内报道不同年龄段表现出不同的HEV-lgG阳性率，3月龄以上猪戊肝血清抗体阳性率要高于3月龄以下猪的阳性率的结果相一致[10]。统计学分析也表明母猪的戊肝感染率显著高于公猪的感染率（P＜0.05）。屠宰场猪比养殖场猪出现较高的血清抗体阳性率。目前，国内外文献对不同种用猪戊肝感染率差异未见报道，统计学分析的结果是由于猪感染戊肝后不同种用猪自身产生抗体的差异还是统计样品数量大小差异因素造成还有待进一步探索[11-12]。相关报道中显示，如果猪场存在良好的饲养条件，则不会存在较高的戊型肝炎病毒感染率，研究中发现云南省楚雄地区猪存在较高的戊型肝炎病毒阳性率[13]。

4 结束语

关于云南省流行HE的基因型情况，还有待于进行病毒学鉴定。实验主要应用到的是酶联免疫吸附测定法，在此基础上，调查该地区大型猪场及屠宰场的戊型肝炎病毒流行情况，了解猪HE在楚雄地区的发生流行情况及其流行规律，探索有效的防制方法，对建立公共卫生防疫措施具有重要科学意义和应用价值。