何首乌中1个新的二苯乙烯苷类化合物△

杨建波，汪祺，程显隆，王莹，高慧宇，王雪婷，宋云飞，魏锋，马双成

中国食品药品检定研究院，北京 100050

何首乌为蓼科植物何首乌属多年生草本植物何首乌Polygonum multiflorumThunb.的干燥块根，具有解毒、消痈、截疟、润肠通便等功效，可用于疮痈、风疹瘙痒和润肠通便等[1]。文献报道，目前已经从何首乌中分离得到200 余个单体化合物，主要包括蒽醌（单核蒽醌和双核蒽醌）、二苯乙烯、黄酮、磷脂和其他等类成分[2-9]。现代药理学研究发现，何首乌具有抗氧化、抗衰老、神经保护和调血脂等作用[10-12]，但同时也出现了一些肝毒性等不良反应[3-4,10-13]。因此，为了进一步阐明何首乌中的药效和肝毒性成分，本课题组对何首乌进行了系统的化学成分研究，从何首乌70%乙醇提取物中分离得到2个二苯乙烯苷类、2 个二蒽酮类和2 个多酚类化合物，分别鉴定为(E)-2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷-6′-棕榈酸酯（1）、顺式-大黄素-大黄素甲醚二蒽酮（2）、反式-大黄素-大黄素甲醚二蒽酮（3）、儿茶素（4）、表儿茶素（5）和(E)-2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯苷-2-O-α-L-鼠李糖苷（6）。

1 材料

Avance-500、Avance-600 型核磁共振波谱仪（德国布鲁克公司）；LC-6AD 型半制备高效液相色谱仪（日本岛津公司）；Q Exactive Plus型液相色谱-质谱联用仪（美国赛默飞世尔科技公司）；HP1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；DM-8 型大孔吸收树脂（津达正源化工有限公司）；Sephadex LH-20（瑞典GE公司）；C18反相填料（日本YMC公司）；QUINTIX313-1CN型万分之一电子天平（德国Sartorius公司）；其他试剂均为分析纯。

何首乌样品于2013年10月采集于广东省肇庆市德庆县，经中国食品药品检定研究院张继副研究员鉴定为何首乌Polygonum multiflorumThunb.的干燥块根，样品标本（060104）保存于中国食品药品检定研究院。

2 提取与分离

取何首乌干燥块根28 kg，粉碎后用70%乙醇加热回流提取3 次，每次2 h，合并提取液，减压回收溶剂得浸膏4.0 kg。将浸膏混悬于水1.5 L中，用二氯甲烷萃取3 次。剩余水部分再加水稀释至10 L，过DM-8 型大孔吸附树脂，依次用不同体积分数的乙醇洗脱，得到5个不同组分，分别为水洗脱组分A（2.0 kg）、25%乙醇洗脱组分B（62.0 g）、40%乙醇洗脱组分C（200.0 g）、55%乙醇洗脱组分D（38.0 g）和95%乙醇洗脱组分E（55.0 g）。组分B（60.0 g）经十八烷基硅烷键合硅胶（ODS）中压柱色谱分离，依次用10%、30%、50%、70%、100%甲醇洗脱，再经过反相硅胶薄层色谱检测，合并相同或相似部分，获得6 个亚组分，分别为A1～A6。A1（1.5 g）经半制备液相色谱分离纯化，乙腈-水（25∶75）洗脱，检测波长为230 nm，流速 为5.0 mL·min-1，得到化合物4（tR=29 min，50.0 mg）和5（tR=36 min，12 mg）。A4（2.0 g）经ODS 中压柱色谱分离，依次用40%、60%、100%甲醇梯度洗脱，经高效液相色谱法（HPLC）分析，合并相同或相似部分，得到5 个亚组分，依次为B1～B5。其中B3（0.5 g）经半制备液相色谱分离纯化，甲醇-水（40∶60）洗脱，检测波长为230 nm，流速为5.0 mL·min-1，得到化合物6（tR=35 min，4.0 mg）。

组分E（50.0 g）经ODS 中压柱色谱分离，依次用35%、55%、75%、100%甲醇梯度洗脱，再经反相硅胶薄层色谱检测，合并相同或相似部分，共获得16 个亚组分，分别为C1～C16。C7（5 g）经ODS 中压柱色谱分离，依次用40%、60%、80%、100%甲醇梯度洗脱，经HPLC 分析，合并相同或相似部分，得到11 个组分，依次为D1～D11。D6经Sephadex LH-20 柱色谱分离，用甲醇洗脱、纯化，得到化合物2（5.0 mg）；D7 经过Sephadex LH-20 柱色谱分离，用甲醇洗脱、纯化，得到化合物3（6.0 mg）。亚组分D9（1.0 g）经半制备液相分离纯化，甲醇-水（55∶45）洗脱，检测波长为230 nm，流速为5.0 mL·min-1，得到化合物1（tR=38 min，5.0 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：淡黄色无定型粉末。电喷雾离子源-质谱（ESI-MS）显示准分子离子m/z667.2[M+Na]+、683.1 [M+K]+和643.2 [M-H]-；(-)-高分辨率（HR）-ESI-MS显示准分子离子m/z643.347 9[M-H]-（计算值为643.348 8），提示该化合物分子式为C36H52O10，不饱和度为11。

1H-NMR（表1）和1H-1H COSY 谱（图1）中显示，该化合物含有1 组反式烯键的氢信号[δH7.66(1H,d,J=16.2 Hz,H-7),6.90 (1H,d,J=16.2 Hz,H-8)]；1 组A2B2系统耦合的芳香氢信号[δH7.37 (2H,d,J=8.4 Hz,H-10,14),6.73 (2H,d,J=8.4 Hz,H-11,13)]；1 组AX 系统耦合的芳香氢信号[δH6.24 (1H,d,J=2.4 Hz,H-4),6.60(1H,d,J=2.4 Hz,H-6)]；1个糖基的端基氢信号[δH4.48(1H,d,J=7.8 Hz,H-1ʹ)]，根据糖基的端基氢的耦合常数，可判断该糖基构型为β构型；1 个甲基氢信号δH0.89 (3H,t,J=7.2 Hz,Me-16″)；14 个亚甲基氢信号[δH2.11(2H,m,H-2″),1.39 (2H,m,H-3″),1.18 (2H,m,H-4″),1.20～1.30(18H,m,H-5″～13″),1.18 (2H,m,H-14″),1.31 (2H,m,H-15″)]。

表1 化合物1的氢谱和碳谱数据（600/150 MHz,CD3OD）

结合化合物1 的13C-NMR、HSQC、DEPT 及质谱数据分析，发现共有36个碳信号，其中7个季碳，包括1 个羰基碳信号[δC174.1 (C-1″)]；糖基的6 个碳信号[δC106.8(C-1′)、74.1(C-2′)、76.5(C-3′)、70.2(C-4′)、74.5(C-5′)和63.5(C-6′)]；8 个次甲基信号，包括1 组A2B2系统耦合的芳香环上的碳信号[δC127.7(C-10/14),115.1(C-11/13)]和1 组AX 氢耦合系统的芳香环上的碳信号[δC102.1 (C-4),101.1(C-6)]及1组反式双键的碳信号[δC120.5(C-7)和128.4 (C-8)]；1个甲基的碳信号[δC13.0 (C-16″)]。进一步结合1H-、13C-NMR 及质谱数据分析，发现化合物1 含有1 个棕榈酰基的信号，分别包括1 个羰基碳信号[δC174.1(C-1″)]和14 个长链脂肪族亚甲基的氢信号[δH2.11(2H,m,H-2″),1.39(2H,m,H-3″),1.18(2H,m,H-4″),1.20～1.30(18H,m,H-5″～13″),1.18(2H,m,H-14″),1.31(2H,m,H-15″),0.89（3H,t,J=7.2 Hz,Me-16″)]。

在HMBC谱中（图1），δH7.66(H-7)与δC101.1(C-6)、136.7(C-2)、129.4(C-9)相关；δH6.60(H-6)与δC136.7(C-2)、102.1(C-4)相关，说明化合物1的C-7 连接在A苯环上的C-1 位；δH6.90 (H-8) 与δC132.4 (C-1)、127.4 (C-10,14) 相关；δH7.37 (H-10,14)与δC157.0(C-12)、128.4(C-8)相关，说明化合物1 的C-8 连接在B 苯环上的C-1 位。另外，在HMBC 谱中，糖基的端基氢信号δH4.48 (H-1′) 与136.7(C-2)相关，说明糖基是连接在A 苯环上的C-2 位。糖基的6′位氢信号δH4.43(H-6a′)和4.19(H-6b′) 均与174.1 (C-1″)相关；长链脂肪族上的δH2.11 (H-2″) 和1.39 (H-3″) 与174.1 (C-1″) 相关，说明棕榈酰基的羰基δC174.1 (C-1″) 连接在糖基的6′位。

综合上述信息，确定化合物1为1个新的二苯乙烯苷的衍生物，结构为(E)-2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷-6′-棕榈酸酯，为1个新的化合物，命名为何首乌辛素（polygonimitin H）。

化合物2：淡黄色固体。(-)-HR-ESI-MSm/z523.138 5 [M-H]-；1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:6.35 (1H,s,H-2),6.66 (1H,s,H-4),6.26 (1H,s,H-5),6.16 (1H,s,H-7),6.28 (1H,s,H-2′),6.69 (1H,s,H-4′),6.35 (1H,s,H-5′),6.18 (1H,s,H-7′),4.56(2H,s,H-10,10′),2.28 (3H,s,CH3-3),2.29 (3H,s,CH3-3′)。以上数据与参考文献[14]一致，因此化合物2鉴定为顺式-大黄素-大黄素甲醚二蒽酮。

化合物3：淡黄色固体。(-)-HR-ESI-MSm/z523.138 5 [M-H]-；1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:6.39 (1H,s,H-2),6.62 (1H,s,H-4),6.32 (1H,s,H-5),6.10 (1H,s,H-7),6.31 (1H,s,H-2′),6.62 (1H,s,H-4′),6.41 (1H,s,H-5′),6.14 (1H,s,H-7′),4.56(2H,s,H-10,10′),2.23 (3H,s,CH3-3),2.24 (3H,s,CH3-3′)。以上数据与参考文献[14]一致，因此化合物3鉴定为反式-大黄素-大黄素甲醚二蒽酮。

化合物4：白色针状晶体（甲醇）。(-)-ESI-MSm/z289.4 [M-H]-；1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:6.81 (1H,d,J=1.8 Hz,H-2′),6.73 (2H,d,J=8.4 Hz,H-3′),6.69 (1H,dd,J=1.8,8.4 Hz,H-6′),5.90 (1H,d,J=2.4 Hz,H-8),5.83 (1H,d,J=2.4 Hz,H-6),2.83(1H,dd,J=5.4,16.2 Hz,H-4a),2.48 (1H,dd,J=2.4,16.2 Hz,H-4b),4.54 (1H,d,J=7.2 Hz,H-2),3.95(1H,m,H-3)。以上数据与参考文献[15]一致，因此化合物4鉴定为儿茶素。

化合物5：白色针状晶体（甲醇）。(-)-ESI-MSm/z289.2 [M-H]-；1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:6.88 (1H,d,J=1.8 Hz,H-2′),6.77 (2H,d,J=8.4 Hz,H-3′),6.75 (1H,dd,J=1.8,8.4 Hz,H-6′),6.00 (1H,d,J=1.8 Hz,H-8),5.89 (1H,d,J=1.8 Hz,H-6),2.88(1H,dd,J=5.4,16.2 Hz,H-4a),2.51 (1H,m,H-4b),4.53(1H,d,J=7.8 Hz,H-2),3.98(1H,m,H-3)。以上数据与参考文献[15]一致，因此化合物5鉴定为表儿茶素。

化合物6：棕色固体粉末。(-)-HR-ESI-MSm/z389 [M-H]-；1H-NMR (600 MHz,DMSO-d6)δ:7.37 (2H,d,J=8.4 Hz,H-10,14),6.75 (2H,d,J=8.4 Hz,H-11,13),6.89(1H,d,J=16.8 Hz,H-8),7.59(2H,d,J=16.8 Hz,H-7),6.55 (1H,d,J=1.8 Hz,H-6),6.18 (1H,d,J=1.8 Hz,H-4),4.38 (1H,d,J=7.8 Hz,H-1ʹ),3.36 (1H,m,H-2ʹ),3.23 (1H,m,H-3ʹ),2.95(1H,m,H-4ʹ),3.28 (1H,m,H-5ʹ),1.20 (3H,d,J=6.0 Hz,H-6ʹ)；13C-NMR (150 MHz,DMSO-d6)δ:131.9 (C-1),136.8 (C-2),151.0 (C-3),103.0 (C-4),155.1 (C-5),101.3 (C-6),121.0 (C-7),128.6 (C-8),129.0 (C-9),128.3 (C-10,14),115.9 (C-11,13),157.7 (C-12),107.0 (C-1ʹ),74.7 (C-2ʹ),76.3 (C-3ʹ),75.3 (C-4ʹ),72.6 (C-5ʹ),18.2 (C-6ʹ)。以上数据与参考文献[16]一致，因此化合物6 鉴定为(E)-2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-α-L-鼠李糖苷。