2018年-2020年我国部分城市宠物犬布鲁氏菌病血清学调查
2022-09-07吴洪超丁航天廖均乐霍宁宁张渊魁习向锋刘玉秀田克恭
吴洪超,丁航天,卢 旭,王 洁,廖均乐,霍宁宁,范 伟,张渊魁,习向锋,刘玉秀*,田克恭,*
(1.国家兽用药品工程技术研究中心,河南洛阳 471003;2.河南农业大学动物医学院,河南郑州 450002;3.洛阳惠中生物技术有限公司,河南洛阳 471003;4.郑州宠康伴侣动物医院,河南郑州 450002;5.兆丰华生物科技(南京)有限公司,江苏南京 211102)
布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella)感染引起的在全球广泛分布的一种动物源性人畜共患传染病[1],严重危害畜牧业发展和人类健康。全世界有170多个国家和地区报告了人和动物的布鲁氏菌病[2],并且每年都有新发地区和复发地区的病例报道,每年新发病例约50万人[3-4],受到世界动物卫生组织(WOAH)和世界粮农组织(FAO)的高度关注[5]。WOAH将布鲁氏菌病列为法定报告的动物疫病,我国将该病列为二类动物疫病。
布鲁氏菌是一种细胞内寄生的小球杆状、革兰氏阴性菌,具有很强的传染性,传播途径也较多,可通过消化道、呼吸道黏膜、皮肤黏膜、生殖道感染,给防疫带来了很大的困难。WOAH根据布鲁氏菌的抗原性差异和宿主的偏好性,将其分为9个种、21个生物型:羊种布鲁氏菌(3个生物型:1、2、3)、牛种布鲁氏菌(7个生物型:1、2、3、4、5、6、9)、猪种布鲁氏菌(5个生物型:1、2、3、4、5)、绵羊附睾布鲁氏菌、犬布鲁氏菌、沙林鼠布鲁氏菌、鲸布鲁氏菌、鳍布鲁氏菌和田鼠布鲁氏菌[4-6]。我国主要流行羊种、牛种和猪种布鲁氏菌[7]。牛种、羊种和猪种布鲁氏菌为光滑型布鲁氏菌,毒力强,除感染最适宿主外,还可以感染人、犬[3]和其他多种动物[8]。犬种布鲁氏菌为粗糙型布鲁氏菌,毒力较弱,主要引起犬科动物发病,也有感染人的报道。人主要通过与宠物犬亲密接触[3]或实验室接触活菌而感染,1986年对广西省家养犬进行犬种布鲁氏菌感染调查,在人群中发现了犬种布鲁氏菌[5]。有研究不仅分离到羊种布鲁氏菌,同时也分离到犬种布鲁氏菌[9]。随着我国社会经济快速发展和人民生活水平的提高,养犬的家庭越来越多,犬与人的关系也更加密切,犬的布鲁氏菌病成为危害人类健康和公共卫生安全的重要隐患,影响畜牧业、旅游业、国际贸易和社会经济的发展,因此,急需加强犬布鲁氏菌病的流行病学调查。本研究从我国16个城市的宠物医院、犬场和农户收集1368份宠物犬血清样品,进行犬的布鲁氏菌血清学调查,为犬布鲁氏菌病的监测和防控提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 待检样品 2018年-2020年,从我国16个城市的宠物医院、农户、犬场共收集犬血1368份。
1.1.2 主要试剂 布鲁氏菌病光滑型和粗糙型虎红平板凝集试验抗原、布鲁氏菌病阴阳性血清,均购自青岛中创汇科生物科技有限公司。
1.1.3 主要仪器 离心机,Eppendorf公司产品;水浴锅(DK-8D),上海一恒科学仪器有限公司产品;冰柜(BCD-203-H),澳柯玛公司产品;洁净工作台(SW-CJ-2FD),苏州安泰空气技术有限公司产品。
1.2 方法
1.2.1 血清样品制备 采集宠物犬的外周静脉血0.5 mL~1.0 mL,2℃~8℃静置析出血清,5 000 r/min离心5 min,取上清,56℃水浴30 min,置-20℃保存备用。
1.2.2 虎红平板凝集试验(RBT) 参考《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T18646-2018)方法进行,取干净的培养皿画好方格,标记待检样品编号,涡旋混匀待检血清和抗原,取待检血清和抗原各25 μL,加于培养皿方格内,用灭菌的吸头涂成2 cm直径的圆形,混匀后4 min内观察结果,同时设置阴阳性血清作为对照。
1.2.3 结果判定 在阴阳性血清对照成立的条件下,对待检血清进行判定。待检血清出现肉眼可见凝集现象时判为阳性,无凝集现象且反应混合液呈均匀粉红色时判为阴性。
2 结果
2.1 宠物犬布鲁氏菌抗体检测结果
用虎红平板凝集试验对1368份宠物犬血清进行布鲁氏菌抗体检测,结果显示,共14份血清RBT检测为阳性,总阳性率为1.02%,其中粗糙型和光滑型阳性血清样品数分别为5份和9份,阳性率分别为0.36%和0.66%。
2.2 不同城市宠物犬布鲁氏菌抗体阳性率
对来自16个城市的宠物犬血清进行布鲁氏菌抗体检测,其中来自北京市、洛阳市、常州市、成都市、重庆市和昆明市共6个城市的宠物犬血清检测到布鲁氏菌抗体,阳性率分别为0.79%、1.10%、2.56%、3.96%、3.57%和6.90%,而其余10个城市均未检测到犬布鲁氏菌抗体(表1)。
表1 不同城市犬布鲁氏菌抗体检测结果
2.3 不同月份宠物犬布鲁氏菌抗体阳性率
根据2018年-2020年宠物犬血清的虎红平板凝集试验检测结果,分析了不同月份光滑型和粗糙型布鲁氏菌抗体阳性样品数,结果发现,3月份和5月份的布鲁氏菌抗体阳性样品数量最多,分别检测到8份和3份阳性血样样品,其次为8月~10月份,分别检测到1份阳性血清样品,其余月份均未检测到布鲁氏菌抗体阳性的样品(图1和表2)。
表2 2018-2020年不同月份收集宠物犬血清样品数量(份)
图1 不同月份犬布鲁氏菌抗体阳性的样品数量
2.4 饲养条件对宠物犬布鲁氏菌感染率的影响
宠物犬血清样品主要来自于宠物医院、犬场和农户,饲养条件不同,布鲁氏菌抗体检测结果显示,10份来自宠物医院的宠物犬血清检测到布鲁氏菌抗体阳性,光滑型和粗糙型布鲁氏菌抗体阳性率均为0.54%;1份来自犬场的血清RBT检测为光滑型抗体阳性,阳性率为0.36%;3份来自农户的血清RBT检测为光滑型抗体阳性,阳性率为1.82%(表3)。
表3 不同饲养条件的宠物犬布鲁氏菌抗体阳性率
2.5 性别对宠物犬布鲁氏菌感染率的影响
对已知性别的宠物犬血清进行分类,RBT检测结果显示,112只母犬的血清中,仅1份血清样品检测到粗糙型布鲁氏菌抗体,阳性率为0.89%,而20只公犬的血清中均未检测到布鲁氏菌抗体(表4)。
表4 不同性别宠物犬的布鲁氏菌抗体检测结果
3 讨论
对人类有致病力的布鲁氏菌主要有牛种、羊种、猪种和犬种[10-11]。近年来,我国对布鲁氏菌病进行的监测,发现羊、牛布鲁氏菌病感染率上升较快,是法定报告传染病中感染数上升最快的疾病之一,动物布鲁氏菌病疫情形势较为严峻[12],已引起国家卫生部门和公众的高度重视。国内外学者重点关注了经济动物牛、羊、猪的布鲁氏菌病,而忽视了伴侣动物宠物犬的布鲁氏菌病对人类健康的潜在威胁。随着宠物犬与人类生活的密切,通过排泄物、分泌物或亲密接触等多种途径传染给人类[13]。因此,宠物犬的布鲁氏菌病的预防与控制也应得到更加密切的关注。
本次调查显示,来自全国16个城市的1 368份宠物犬血清中,仅5例光滑型虎红平板凝集检测呈阳性和9例粗糙型虎红平板凝集检测呈阳性,阳性率分别为0.36%和0.66%,与文献[4,14,15]的调查结果接近。全国宠物犬的布鲁氏菌抗体阳性率为4%~20%[16],内蒙古、四川、湖北、贵州、广西等省犬布鲁氏菌抗体阳性率约为8.16%[17],均高于本次调查的结果,可能是由于近年来我国经济水平、宠物主防护意识、卫生条件等较20世纪有明显提高,使宠物犬感染布鲁氏菌的几率降低。
本次调查中,宠物犬布鲁氏菌抗体阳性血清来自北京市、洛阳市、常州市、成都市、重庆市和昆明市。我国大多数省(区、市)都存在不同程度的犬感染犬布鲁氏菌(0.3%~ 42.7%)[4],从北京市宠物犬体内分离到犬种布鲁氏菌,从宠物犬血清中检测到粗糙型布鲁氏菌抗体[18],并且北京地区报道过犬病的疫情[19]。本研究首次从常州市宠物犬中检测到光滑型布鲁氏菌抗体,为常州市布鲁氏菌病的流行情况提供了参考。成都市、重庆市和昆明市宠物犬的布鲁氏菌抗体阳性率较高,分别为3.96%、3.57%和6.90%,高于云贵川三省的调查结果[15],可能是由于警犬作为工作犬,与外部病犬或病犬排泄物接触的风险较小。成都市、重庆市和昆明市宠物犬的布鲁氏菌抗体阳性率高于其他城市,可能是由于该3个城市距离牧区较近,宠物犬可能与病犬或病犬的流产物、排泄物等污染物有过接触,也可能与该地区附近的牛羊有过接触史所致。
根据2018年-2020年宠物犬血清的虎红平板凝集试验检测结果,发现3月份和5月份的布鲁氏菌抗体阳性数量最多,其次为8月份~10月份,其余月份均未检测到布鲁氏菌抗体阳性的样品,分析认为在春秋季,环境气候适宜,宠物犬外出活动频繁,接触患病犬或病犬排泄物的风险更高,并且春季是牛羊的繁殖季节,产仔、羊水、胎衣等处理不及时,容易造成布鲁氏菌病在牛羊和宠物犬之间传播流行。
宠物犬血清样品主要来自于宠物医院、犬场和农户,饲养方式不同,调查结果显示,来自宠物医院的犬血清布鲁氏菌抗体阳性数较多,其次为农户,最后是犬场。赵焜等研究也发现城区和农区犬均有较高的布鲁氏菌抗体阳性[5]。宠物医院接诊的城市犬需要经常外出散步,接触其他患病犬或病犬排泄物的风险较高,农户的家养犬通常为散养的方式饲养,并且外出时会随意吃东西,也容易被感染,而犬场采用封闭式管理,与外界接触的机会较少,而引种或饲料带菌时可能导致感染。
本次调查中,收集到112只母犬血清和20只公犬血清,经虎红平板凝集试验检测,仅1份母犬血清检测到粗糙型布鲁氏菌抗体,虽然本次调查收集的母犬和公犬数量较少,不能很好的反映不同性别宠物犬感染布鲁氏菌的差异,但是在随机收集宠物犬血清的情况下,该结果在一定程度上表明母犬感染布鲁氏菌的几率更高。
本研究调查了我国16个城市宠物犬的布鲁氏菌感染情况,宠物犬的布鲁氏菌抗体阳性率为1.02%,宠物犬血清中既可检测到光滑型布鲁氏菌抗体,也可检测到粗糙型布鲁氏菌抗体,距离牧区较近的成都市、重庆市和昆明市宠物犬血清抗体阳性率高于其他城市,不同月份和不同性别的宠物犬布鲁氏菌感染率有所差异。本次调查研究为更好地了解宠物犬布鲁氏菌感染情况提供实验依据,为提高广大养犬爱好者、兽医从业人员和犬场的防疫意识敲响警钟。