血清CD44V6、MMP-2及TgAb水平与分化型甲状腺癌术后转移的相关性分析

于永歌

甲状腺癌是临床上常见的一种恶性肿瘤，近年来发病率明显上升。根据甲状腺癌的分化情况分为分化型甲状腺癌和未分化型甲状腺癌，其中分化型甲状腺癌占甲状腺癌的90%以上，对患者的健康与生活质量产生较大影响[1]。当前临床多应用手术治疗甲状腺癌，手术分为甲状腺全切术和甲状腺次切术，根据患者的病情选择合适的手术方法，术后通过常规131I 治疗来提高患者生存率。虽然分化型甲状腺癌患者预后总体效果良好，但仍有1.2%～4.2%的患者出现远处转移，降低了患者的远期生存率[2]。因此，对分化型甲状腺癌术后转移情况进行早期诊断，对于改善预后具有重要意义。临床上，对分化型甲状腺癌术后患者多采用甲状腺球蛋白（Tg）、促甲状腺激素（TSH）等甲状腺激素水平来评估患者的治疗效果[3]。研究发现[4]，基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在甲状腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织，且转移组织高于未转移组织。但是对于血清MMP-2 水平是否能够预测甲状腺癌术后转移情况目前尚无定论。另外有研究发现[5]，分化型甲状腺癌通过治疗后可改善血清白细胞分化抗原44 变异型6（CD44V6）、抗甲状腺球蛋白抗体（TgAb）表达水平，但血清CD44V6、TgAb 表达是否与术后转移情况相关尚未明确。因此，为了早期预测与判断分化型甲状腺癌术后转移情况，本研究选取我院2019年3月～2021年3月收治的60 例分化型甲状腺癌患者为研究对象，探讨血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 水平与分化型甲状腺癌术后转移的相关性。

1 材料与方法

1.1 一般资料选取我院2019年3月～2021年3月收治的60 例分化型甲状腺癌患者为研究对象，所有患者均行手术治疗与131I 治疗，将治疗1年后出现转移的患者作为转移组（n=19），未出现转移的患者作为未转移组（n=41）。纳入标准：所有患者经病理确诊为分化型甲状腺癌[6]；对本研究知情并签署同意书；临床资料完整。排除标准：病情不稳定者；合并精神障碍疾病者；不符合手术治疗指征者；合并严重原发性疾病者。本研究经我院伦理委员会批准。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 两组患者一般资料比较

1.2 方法CD44V6 检测：抽取患者空腹静脉血2ml，离心后取上清液，置于-20℃冰箱内待检。检测前将样品取出，彻底融化（达到室温20℃～25℃）后开始检测。首先将样品稀释100 倍，应用浓缩洗涤液和双蒸水稀释至500ml，并加入5μl 标准品和5μl已稀释血清，均匀混合10s 后，加入200μl Anti-CD44V6 Biotin，混合30s 后，37℃下放置30min，随后反复对反应板进行洗涤，5 次之后去除水滴，加入200μl HRP，均匀混合培育30min，洗涤后加入显色液再次温育30min，在每个孔处加入100μl 终止液，15min 内读取OD 值，并绘制标准曲线，计算CD44V6浓度。

MMP-2 检测：抽取患者术后15d 清晨空腹肘静脉 血2ml，以2 000r/s 的速度离心15min，收集上清液放置-80℃的冰箱内待检。应用双夹心酶联免疫吸附法检测血清中MMP-2 表达水平：将抗人MMP-2 单抗包放置在酶标板上，加入生物素化抗人MMP-2（二抗），其可结合单抗MMP-2 形成免疫复合物。应用过氧化物酶标记的Streptavidin 将二抗的生物素结合，并将多余物质洗掉。随后加入TMB 显色，进行反应，每孔加入终止液，检测吸光度，并计算OD 值。本试验所用酶联免疫试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司，所有步骤严格按照说明书进行。

甲状腺激素水平与抗体检测：抽取患者术后15d 清晨空腹肘静脉血液5ml，离心后，留取上清液，Tg、TgAb、TSH、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离四碘甲状腺原氨酸（FT4）应用Roche Cobas 6000 电化学发光仪与配套试剂，应用电化学发光法进行测定，操作步骤严格按照说明书进行。

1.3 统计学方法采用SPSS 23.0 统计学软件进行数据分析，计数资料以n（%）表示，进行χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；采用Spearman 相关分析方法分析血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 水平与分化型甲状腺癌术后转移的相关性；采用Logistic 回归分析分析上述指标对患者预后的独立预测价值；P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者相关血清指标表达水平比较两组患者TSH、FT3、FT4 水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）；转移组患者血清CD44V6、MMP-2、Tg、TgAb 水平明显高于未转移组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组患者相关血清指标表达水平比较（±s）

表2 两组患者相关血清指标表达水平比较（±s）

指标 转移组（n=19） 未转移组（n=41） t P CD44V6（ng/ml） 525.62±84.62 428.63±78.92 13.505 0.001 MMP-2（ng/ml） 286.61±85.92 139.68±54.73 11.291 0.001 Tg（ng/ml） 45.25±12.63 13.92±4.27 20.237 0.001 TgAb（IU/ml） 692.52±147.25 613.63±136.29 2.856 0.005 TSH（mIU/L） 76.68±31.57 77.63±32.68 0.149 0.882 FT3（mIU/L） 2.04±1.02 2.06±1.11 0.093 0.926 FT4（mIU/L） 5.36±2.62 5.12±2.65 0.460 0.646

2.2 血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 与分化型甲状腺癌术后转移的相关性分析Spearman 相关分析结果显示：TSH、FT3、FT4、Tg 与分化型甲状腺癌术后转移情况无明显相关性（P＞0.05），CD44V6、MMP-2、TgAb 与分化型甲状腺癌术后转移情况呈正相关（P＜0.05），见表3。

表3 CD44V6、TgAb、MMP-2 与分化型甲状腺癌术后转移的相关性分析

2.3 血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 对分化型甲状腺癌术后转移的诊断与预测价值应用ROC 曲线分析显示：CD44V6、MMP-2 及TgAb 联合诊断的敏感度与特异性明显高于CD44V6、MMP-2 或TgAb单一诊断（P＜0.05），见表4、图1。Logistic 回归分析结果表明：CD44V6、MMP-2 及TgAb 对分化型甲状腺癌术后转移具有独立预测价值（P＜0.05），见表5。

表4 血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 对分化型甲状腺癌术后转移的诊断价值(%)

表5 血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 对分化型甲状腺癌术后转移的预测价值

3 讨论

CD44 属于分布较为广泛的一组细胞表面跨膜糖蛋白，是细胞黏附分子的一种，CD44V6 属于细胞黏附分子CD44 变异型。随着临床分子学研究进展，有研究发现[7]，CD44 分子变异型会在肿瘤细胞表面异常表达，和肿瘤的发生与发展密切相关，并在肿瘤的转移和侵袭中发挥重要作用。MMPs 是一组具有跨膜转运和分泌功能的肽链内切酶，主要分为膜型基质金属蛋白酶、间质溶素酶、明胶酶、胶原酶等。MMPs 除了在人体正常生理过程中发挥作用外，还会参与肿瘤的发生与发展，通过促进血管新生、激活细胞生长因子以及降解细胞外基质等作用于肿瘤组织。以往研究发现[8]，MMPs 与多种恶性肿瘤具有密切关系。另外有研究通过体外实验发现[9]，MMP-2 可辅助诊断甲状腺癌患者术前淋巴结转移情况，而对于术后转移情况的预测并无确切结论。TgAb 是TSH 的受抗体，共包括3 种形式，分别是抑制性抗体、中性抗体以及刺激性抗体。研究发现[10]，TgAb 对于甲状腺癌术后转移具有独立预测价值。因此，本研究分析血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 水平与分化型甲状腺癌术后转移的相关性，希望能够为临床提供参考。

本研究结果表明，两组患者TSH、FT3、FT4 水平对比差异无统计学意义（P＞0.05），转移组患者血清CD44V6、MMP-2、Tg、TgAb 水平明显高于未转移组（P＜0.05）。这是因为MMP-2 是MMP 家族成员，细胞外基质降解酶，通过对细胞外基质中不同成分的降解，在肿瘤的浸润转移中发挥重要作用。MMPs 家族成员可降解癌细胞周围细胞，导致癌细胞进出周围组织，促使肿瘤浸润转移，形成新生血管后，成为肿瘤转移的血行通道。有研究发现[11]，恶性肿瘤转移和浸润过程中，细胞外基底膜和基质降解是必要条件，明胶酶作为基质金属蛋白酶中的一种，主要作用就是分解Ⅳ型胶原，降解基底膜促进肿瘤转移和浸润，因此MMP-2 属于肿瘤恶性进展标志物的一种，与本研究结果相符。CD44V6 作为重要肿瘤分子标记物的一种，参与细胞基质黏附、靶向及肿瘤生长与转移以及淋巴细胞激活，因此CD44V6 水平越高可能增加分化型甲状腺癌术后转移现象。另外，TgAb 属于自身免疫性甲状腺疾病的重要标志物和主要抗体，也是甲状腺癌诊疗的常见血清标志物，因此，分化型甲状腺癌术后转移患者会出现TgAb 水平升高。研究发现[12]，25%以上的分化型甲状腺癌患者会出现TgAb 升高现象，若持续或重新出现TgAb 升高，提示患者出现疾病复发情况。Spearman 相关分析结果显示：TSH、FT3、FT4、Tg 与分化型甲状腺癌术后转移无明显相关性（P＞0.05），CD44V6、MMP-2、TgAb 与分化型甲状腺癌术后转移呈正相关（P＜0.05）。MMP-2 是癌细胞降解并突破基底膜，向外周浸润转移的一个重要因素，而CD44V6 属于肿瘤标志物，TgAb 是甲状腺疾病的重要标志物。有研究发现[13]，检测甲状腺癌患者癌组织中CD44V6、MMP-2、TgAb 水平明显升高，三者可判断癌细胞的转移和浸润潜能，与本研究结果相符。应用ROC 曲线分析显示：CD44V6、MMP-2 及TgAb 联合诊断的敏感度与特异性明显高于CD44V6、MMP-2 或TgAb 单一诊断（P＜0.05）。Logistic 回归分析结果表明：CD44V6、MMP-2 及TgAb 对分化型甲状腺癌术后转移具有独立预测价值（P＜0.05）。以往的研究[14，15]多分析了CD44V6、MMP-2 及TgAb 与甲状腺癌病理情况的相关性，并无针对三者联合诊断甲状腺癌术后转移的敏感度与特异性以及对预后预测的分析，而本研究加入了这些观察。

综上所述，分化型甲状腺癌术后转移患者血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 水平明显升高，与术后转移呈正相关，应用血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 联合诊断敏感度和特异性高于单一诊断，且血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 为分化型甲状腺癌术后转移的独立预测因素。因此可以考虑应用术前血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 水平作为分化型甲状腺癌术后转移的预测和辅助诊断指标。