两种富硒菜籽饼对多鳞白甲鱼生长与健康及硒含量的影响

■王 萍 周继术* 祁 蒙 梁 茂 晏显芳 徐庆来 李 杨 吉 红

（1.西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌 712100；2.安康市富硒产品研发中心，陕西安康 725000）

硒是鱼类等生物的必需微量营养元素，在促进生物机体生长发育、提高繁殖性能、增强免疫应答、提高抗氧化能力以及解除重金属毒性等方面发挥重要作用。对水生生物而言，硒更是影响着生物体代谢、繁殖等多个重要生理过程。同时，由于硒对人类的生长、生育及抗衰老等方面的多种有利作用，富硒产品的开发利用已成为研究热点。硒在水生生物上的研究，多集中于在饲料中添加不同形态的硒，如无机硒（亚硒酸钠）、有机硒（硒代蛋氨酸、酵母硒）以及纳米硒等，以探讨硒对鱼体营养和健康的影响。梁达智等（2019）选用亚硒酸钠和蛋氨酸硒对斜带石斑鱼幼鱼的生长性能、免疫酶活性等方面展开研究，发现两种硒源均能促进鱼的生长，有机硒的生物利用率更高。Kohshahi等（2019）的研究也发现，饲料中含有一定量硒能够更好地促进虹鳟的免疫功能，改善虹鳟生长性能和抗氧化能力。

安康是陕西的一个地级市，其土壤和水体富硒，全市50%以上的土壤硒含量达到中硒（0.2 mg/kg）以上水平，全市耕作土壤平均硒含量达到0.57 mg/kg，是我国著名的“硒谷”，其天然的富硒地质条件为富硒作物及富硒农副产品的生产提供了极好的自然条件。利用富硒土壤生产富硒农作物及其加工产品，在富硒地区是比较常见的一种产品生产方式，如富硒烟叶、富硒茶叶以及富硒小麦、富硒大米、富硒玉米等。研究表明，植物可吸收利用土壤中的硒，并将在其植物组织中富集，进而转化为人或动物能够直接利用的硒（如含硒氨基酸等），通过食物链方式供给人类或动物所需的硒元素。富硒菜籽饼就是这样的一类富硒农副产品，经研究发现，安康产地的菜籽饼，其硒含量远高于非安康产地的菜籽饼，如汉中菜籽饼。

菜籽饼是水产动物常用的饲料原料之一，因其含有较高的蛋白质和适宜的脂肪水平而广泛应用于水产动物的配合饲料中。在这样的配合饲料中，若使用安康产地的富硒菜籽饼，则因其硒含量较高进而可能对水产动物具有更高的营养价值，或者使水产动物机体贮积更高水平的硒，使富硒鱼的生产成为一种可能，但相关研究还较为缺乏。

多鳞白甲鱼（Onychostoma macrolepis），又名多鳞铲颌鱼，属鲤形目（Cypriniformes），鲤科（Cyprinidae），白甲鱼属（Onychostoma），主要分布于陕西省南部巴山地区的镇坪、岚皋、紫阳等地。该鱼肉质细嫩、味道鲜美、营养丰富，还具有独特的药用保健价值，是一种名贵的经济鱼类，具有较高的开发利用价值。近年来，多鳞白甲鱼的经济和生态价值越来越得到重视，在其生物学、生长发育、繁殖学、病害学及其营养价值等方面的研究较多，但关于多鳞白甲鱼营养需求及饲料利用等方面的研究报道较少，目前仅见该鱼的饲料蛋白质营养需求水平、饲料硒需求水平、幼鱼的开口饵料以及多鳞白甲鱼对黑水虻粉及裂殖壶藻粉的利用等方面的研究，在富硒饲料原料，尤其是富硒菜籽饼饲料原料的开发利用方面，仅见张斌鑫（2019）及赵俊兰（2020）的研究有所涉及，对于特定品种的天然富硒菜籽饼，如文章中将用到的中油杂及陕油28 等对多鳞白甲鱼的生长与健康的影响及其硒蓄积和富硒鱼生产方面研究的相关报道尚为缺乏。

为此，本试验在多鳞白甲鱼饲料配方中分别添加产自安康地区的两种富硒菜籽饼，以非安康产地的菜籽饼为对照，通过饲养试验，分析多鳞白甲鱼生长、生物学性状、血清生化指标及鱼体抗氧化能力及肌肉硒含量等指标，探索安康富硒菜籽饼对多鳞白甲鱼生长与健康以及硒贮积的影响，以期为富硒多鳞白甲鱼健康养殖以及富硒鱼休闲食品的开发提供有益参考，为富硒菜籽饼的营养价值评价提供基础资料。

1 材料与方法

1.1 试验饲料

试验以鱼粉、菜籽饼、棉粕、豆粕、面粉及豆油为主要基础饲料原料，其中的菜籽饼有三种，安康产地的两种富硒菜籽饼，分别为中油杂菜籽饼及陕油28菜籽饼，其硒含量分别为0.13 mg/kg 与0.43 mg/kg，由陕西省安康市中国富硒产业研究院提供，非安康产地的菜籽饼，其硒含量为0.057 mg/kg，同其他饲料原料，由陕西华秦农牧科技有限公司（陕西，杨凌）提供。将三种来源的菜籽饼分别添加于多鳞白甲鱼基础饲料配方中，配制出蛋白质为37.28%、脂肪为8.93%三组等氮等脂饲料，其中A 组为普通非安康产地的菜籽饼，B 组为中油杂菜籽饼，C 组为安康陕油28 菜籽饼。将各饲料原料粉碎过80 目筛，按配方进行称量与配比，并将其充分混匀，添加10%～15%水后，用饸烙机制成直径约为2 mm 圆条，于通风干燥的地方室温放置24 h，然后在50 ℃烘箱烘4 h，切断料条，制成长度约3 mm 柱状颗粒。装样，放于-20 ℃冰箱保存备用。试验饲料配方及营养水平见表1。

表1 饲料配方及营养水平

1.2 试验鱼分组及饲养管理

试验用多鳞白甲鱼为三龄，购自陕西省安康市绿水生态农业有限公司，于西北农林科技大学动物科技学院水产动物养殖室开展养殖试验。将鱼暂养30 d，挑选体重相近、体质健康的多鳞白甲鱼153尾[（23.14±1.94）g]，随机分配在9 个循环流水玻璃鱼缸（300 L）中，按试验饲料不同分为3 个组，每组3 个重复，每个重复17 尾鱼，分别用以上三组饲料进行饲养。饲养期间每天投喂4 次（07：30、11：30、15：30、19：30），投喂量以10 min 内能吃完为宜，投饲率2%～3%；每3～5 d换水一次，换水量为鱼缸水体的1/3。定期清洗抽水泵和过滤棉，以保持水质清洁。光源为室内白炽灯光。试验期间，水温（21.3±1.4）℃，溶氧（7.43±0.35）mg/L，pH（7.1±0.15），氨氮＜0.065 mg/L，亚硝酸盐＜0.03 mg/L。饲养周期为60 d。

1.3 样品采集

养殖试验结束时，试验鱼饥饿24 h，用丁香油0.03 mg/L（江西亿森源植物香料有限公司）将鱼麻醉称重。每缸随机取6尾鱼进行尾静脉采血，将血液于4 ℃冰箱保存24 h后，3 000 r/min离心10 min，制备血清于-20 ℃低温保存备用。称取每尾鱼体重并测量其体长，然后进行解剖，分离肝胰脏、肠道、脾脏、肌肉、性腺、腹腔脂肪组织，称取各器官组织的重量并测量肠长。将每尾鱼体的肌肉与肠组织于-20 ℃冰箱保存备用；将鱼体的肝胰脏和肠分别于4%甲醛溶液中固定备用，同时每组随机选取9尾鱼的肝胰脏于-80 ℃冰箱中保存备用。每缸随机选择8 尾鱼胴体（去鳞、去内脏），用面粉等包裹后，于140 ℃下油炸烹饪，制成香酥多鳞白甲鱼旅游休闲食品试样，用真空包装机进行真空包装。每组随机选取6 尾香酥鱼，剥取肌肉，用于硒含量检测。

1.4 鱼体生长与生物学性状指标的测定

增重率（Weight gain rate，WGR，%）=[末均重（g）-初均重（g）]/初均重（g）×100

成活率（Survival ratio，SR，%）=试验结束鱼数量（尾）/试验初鱼数量（尾）×100

特定生长率（Specific growth rate，SGR，%/d）=[Ln末均重（g）-Ln初均重（g）]/试验天数（d）×100

饲料系数（Feed conversion ratio，FCR）＝投饲总量（g）/体增重（g）

蛋白质效率（Protein efficiency ratio，PER，%）=鱼体增重量（g）/食入蛋白质量（g）×100

肥满度（Condition factor，CF，g/cm3）=体重（g）/[体长（cm）]3×100

肝胰脏指数（Hepatosomatic index，HSI，%）=肝胰脏重（g）/鱼体重（g）×100

内脏指数（Viscerosomatic index，VSI，%）=内脏重（g）/鱼体重（g）×100

脾体比（Spleen index，SI，%）=脾脏重（g）/鱼体重（g）×100

肠长比（Gut length ratio，GLR，%）=肠长（cm）/体长（cm）×100

肠体比（Relative intestine length，RIL，%）=肠重（g）/鱼体重（g）×100

腹腔脂肪指数（Intraperitoneal fat body index，IPFI，%）=腹腔脂肪重（g）/鱼体重（g）×100

性腺指数（Gonad index，GI，%）=性腺重（g）/鱼体重（g）×100

含肉率（Meat content rate，MC，%）=肌肉重（g）/鱼体重（g）×100

1.5 鱼体肌肉及肠组织硒含量的测定

分别将多鳞白甲鱼的新鲜肌肉样品、新鲜肠组织样品及加工休闲熟食制品的肌肉样（熟）送至西北农林科技大学食品质量检测中心（陕西，杨凌）进行硒含量检测。硒含量测定方法参照国标GB 5009.93—2017。

1.6 饲料及鱼体肌肉常规营养成分测定

常规营养成分参照AOAC（2003）进行相关指标检测：采用105 ℃恒温干燥法测定水分含量，索氏抽提法测定粗脂肪含量，凯氏定氮法测定粗蛋白含量，马弗炉灼烧法（550 ℃）测定粗灰分含量。

1.7 组织切片观察

肝胰脏和肠道组织固定后，用梯度浓度乙醇进行脱水，然后经过二甲苯透明，石蜡包埋，切片机切片（厚度为5 μm），H.E.染色，中性胶封片。石蜡切片由武汉百仟度生物科技有限公司制作。将切片于显微镜（Nikon DS-Ri2）下进行观察并拍照。

1.8 血清生化指标及抗氧化酶活性的测定

血清谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLO）、葡萄糖（Glu）、胆固醇（Chol）、三酰甘油（TG）指标由杨凌高新农业示范区医院（陕西，杨凌）采用全自动生化分析仪（日立7600，东京，日本）进行检测。

血清抗氧化酶[超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）]活性、总抗氧化能力（T-AOC）及丙二醛（MDA）含量选用南京建成生物工程研究所有限公司试剂盒进行测定。

1.9 肝胰脏中抗氧化酶基因相对表达水平测定

分别采集三组鱼的肝胰脏组织，以qPCR 技术检测基因CAT、SOD和GPx在组织中的相对表达量。首先采用Trizol 法提取肝胰脏总RNA，用超微量分光光度仪（NanoDrop）测定260 nm 和280 nm 处的吸收值，检测RNA 的含量和纯度。取1 μg 总RNA，在20 μL的反应体积内按照反转录试剂盒（TaKaRa，中国大连）进行cDNA 反转。qRT-PCR 使用CFX 96 实时PCR 检测系统（Bio-Rad，Hercules，CA，USA），参照ChamQ SYBR qPCR Master Mix 试剂盒说明书进行。所有引物在北京AuGCT 生物公司合成，选取管家基因β-actin作为内参基因，引物序列见表2，采用2-ΔΔCt法分析数据并计算基因相对表达量。

表2 实时荧光定量PCR引物序列

1.10 统计分析

试验数据用“平均数±标准差（Mean±SD）”来表示。采用SPSS 19.0 Statistic 软件进行组间平均值的显著性分析，以P＜0.05 为差异显著，P＜0.01 为差异极显著。

2 结果分析

2.1 多鳞白甲鱼生长性能和生物学参数（见表3）

由表3可知，相比于A组，B组的增重率和特定生长率显著升高（P＜0.05），分别为（56.45±8.21）%和（0.74±0.09）%/d。B、C 组的饲料系数分别为（2.36±0.23）、（3.18±0.30），显著低于A 组的（4.90±1.75）（P＜0.05），且B、C组之间差异不显著（P＞0.05）。CF、HSI、VSI、SI、RIL、IPFI、GI等生物学指标分别在1.38～1.50 g/cm3、0.93%～1.09%、12.11%～13.06%、0.16%～0.37%、2.45%～2.59%、0.72%～0.99%和1.20%～1.55%，在各组间均无显著差异（P＞0.05）。

表3 多鳞白甲鱼生长性能及生物学性状

2.2 多鳞白甲鱼肌肉与肠道硒含量（见表4）

表4 多鳞白甲鱼肌肉与肠道硒含量（mg/kg）

由表4 可知，从横向比较来看，多鳞白甲鱼中期肌肉、末期肌肉、油炸加工熟食制品肌肉以及肠道组织的硒含量在A、B、C 三组均无显著差异（P＞0.05）。从纵向来看，随着养殖时间的延长，饲喂富硒菜籽饼的B、C组鱼体鲜肌硒含量呈现逐步上升的趋势，说明鱼体硒含量可能随着养殖时间延长而得以蓄积。

从油炸加工水产熟食制品来看，熟食制品肌肉的硒含量均表现出高于新鲜肌肉的硒含量的趋势，且这种增高趋势在A 组与C 组中表现更为明显（P＜0.05），表现了该加工方式有助于水产品硒含量的增加。

从不同组织硒含量来看，三组中，各组内鱼体肠道硒含量（0.94～1.13 mg/kg）均显著高于对应组的新鲜肌肉硒含量（0.35～0.38 mg/kg，P＜0.05）。

2.3 多鳞白甲鱼肌肉常规营养成分测定（见表5）

表5 多鳞白甲鱼肌肉常规营养成分（风干样，%）

从表5 可知，多鳞白甲鱼肌肉粗蛋白、粗脂肪及粗灰分含量分别在75.63%～80.20%、9.83%～10.38%、4.54%～5.39%，各营养指标在三组间均无显著差异（P＞0.05）。

2.4 肝胰脏及肠道H.E.染色观察（见图1）

多鳞白甲鱼肝胰脏组织学形态未发生较明显病理变化，肝细胞排列紧密规则，细胞核多位于中央、清晰可见，且三组间无明显差异（图1a）。各组多鳞白甲鱼肠组织均发育较为良好，肠道微绒毛紧密排列，肠褶皱明显，肠道结构完整，无明显损伤（图1b）。中肠绒毛高度结果显示，B组的多鳞白甲鱼肠绒毛高度显著高于A、C组（图1c，P＜0.05）。

图1 多鳞白甲鱼肝胰脏及中肠组织切片H.E.染色观察及肠绒毛高度比较

2.5 多鳞白甲鱼血清生化指标及血清抗氧化酶活性（见表6）

由表6 可知，多鳞白甲鱼血清生化指标，如谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、葡萄糖、三酰甘油、总胆固醇、尿素、高密度胆固醇及低密度胆固醇等，在各组间均无显著差异（P＞0.05），但B、C 组的三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白及低密度脂蛋白含量有上升的趋势，B组的谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性有低于A组的趋势（P＞0.05）。

表6 多鳞白甲鱼血清生化指标及抗氧化能力

B组和C组的血清T-AOC均极显著高于A组（P＜0.01）。C 组的血清GPx 活性显著高于A、B 组（P＜0.05），且A、B两组间差异不显著（P＞0.05）。其他血清抗氧化指标，如SOD、CAT 活性及MDA 含量，在三组间差异均不显著（P＞0.05）。

2.6 多鳞白甲鱼肝胰脏抗氧化酶基因相对表达量（见图2）

图2 多鳞白甲鱼肝胰脏抗氧化酶基因相对表达量

由图2 可知，饲喂含不同菜籽饼的饲料时，SOD相对表达量在各组间变化不显著（P＞0.05）；B 组GPx的相对表达量极显著高于A、C组（P＜0.01），且A、C组之间差异不显著。C 组CAT的相对表达水平极显著高于A、B两组（P＜0.01）。

3 讨论

3.1 不同富硒菜籽饼对多鳞白甲鱼生长、生物学性状的影响

硒是水生生物生长发育至关重要的营养元素，鱼类可以通过饲料硒来满足其对硒的营养需求。有研究表明，含硒饲料能够有效提高尼罗罗非鱼、石斑鱼、鲈鱼、军曹鱼等鱼类的特定生长率和增重率，同时研究还发现，硒的促生长效果与饲料硒的浓度密切相关。在Zhang等（2021）的研究中发现，4 mg/kg硒含量的饲料比高硒饲料（16 mg/kg）和无硒饲料（0 mg/kg）更能提高虹鳟的特定生长率和增重率，Hu 等（2016）在黄颡鱼的研究也发现，饲料中缺乏硒（＜0.05 mg/kg）或补充过量硒（6.5 mg/kg）减缓了黄颡鱼的生长。本试验中，B 组的增重率和特定生长率显著高于A组（P＜0.05），且与C组无显著差别，这表现出B组较高的增重率与生长率，可能与这组硒含量（0.91 mg/kg）更适合多鳞白甲鱼生长有关，较低的硒含量（A组，0.88 mg/kg）或较高的硒含量（C组，1.0 mg/kg）均有削弱多鳞白甲鱼生长的趋势，然而，以往的研究显示，多鳞白甲鱼对硒的营养需求水平为0.70～2.08 mg/kg 或0.14～1.19 mg/kg，在这范围内，硒的含量并未影响多鳞白甲鱼的生长速度，本试验的饲料硒含量均在这一范围内，在这较窄的硒含量范围内，硒是如何影响到多鳞白甲鱼的生长，是否还有其他因素也参与到影响多鳞白甲鱼的生长上来，相关问题还需进一步研究。

本试验中，多鳞白甲鱼的肥满度、肝胰脏指数、内脏指数等生物学指标在三个饲料组间均无显著差异，这在张斌鑫（2019）的研究结果中也有类似发现，表明安康产地的两种富硒菜籽饼对鱼体的生长发育、繁殖能力及摄食消化等均无不良影响，表现出该类富硒菜籽饼是多鳞白甲鱼的优质饲料原料。同时，本试验结果还显示，B、C 组饲料系数显著低于A 组，且B、C 组的增重率和特定生长率高于A 组（表3），进一步说明富硒菜籽饼，尤其是B 组中油杂菜籽饼的使用，在提高饲料效率和促进多鳞白甲鱼生长方面更有优势和潜力。

3.2 不同富硒菜籽饼对多鳞白甲鱼健康的影响

3.2.1 不同富硒菜籽饼对肠道及肝胰脏组织器官形态学特征的影响

肠道是动物体消化吸收营养物质的主要器官，兼有免疫、防御和内分泌的功能，肠道健康与动物机体健康息息相关，而鱼类肠道健康是保证其高效生产的关键，同时，肠绒毛的高度和面积是评价动物机体对营养物质消化吸收能力的主要指标。有研究发现，对鲤鱼饲喂纳米硒饲料，其肠绒毛高度显著高于无硒饲料组，作者推测，含硒饲料可有效改善了肠道中抗氧化酶活性和氧化应激状态，促进了鲤的肠道健康，维持了鲤肠道完整性，保证了鲤肠上皮细胞的健康。对螯虾的研究发现，饲料中添加硒可以通过增强消化酶的活性来改善消化系统的健康状况，进而促进螯虾生长并改善其免疫力和健康。本试验结果显示，各组多鳞白甲鱼肠道组织发育较为完整，未见明显损伤，且B组的肠绒毛高度显著高于A组（图1C），表明安康菜籽饼提供的高硒含量在一定程度上改善了多鳞白甲鱼的肠道健康，尤其是中油杂菜籽饼的使用，促进了肠绒毛高度，增加了肠道表面积，更有利于促进营养物质的消化与吸收。

肝胰脏是水生生物主要的消化腺，也是机体营养物质代谢和解毒的中心，对外界应激极为敏感。陈剑杰等（2013）通过研究纳米硒对氟损伤的鲤肝细胞的保护作用，发现硒可以减轻因氟导致的肝细胞形态的异常变化，保护了肝细胞结构的完整性。姚朝瑞等（2021）以草鱼肝细胞为研究对象，探讨亚硒酸钠对不同浓度亚硝酸钠诱导的肝细胞损伤的保护作用，发现给草鱼肝细胞补充硒能在一定程度上维持肝细胞的形态及活力、缓解亚硝酸钠导致的氧化系统失衡。本试验中，多鳞白甲鱼肝胰脏组织学形态在三组间均未发生明显病理变化，且各组鱼体的肝细胞均排列紧密规则，细胞核多位于中央、清晰可见，细胞界限分明。由此可以看出，本试验所用的富硒菜籽饼对多鳞白甲鱼肝胰脏产生了积极的营养作用，是多鳞白甲鱼良好的饲料资源。

3.2.2 不同富硒菜籽饼对多鳞白甲鱼血清生化指标的影响

血清生化指标不仅可以作为鱼类病理、毒理、生理学的参考指标，还可以评价鱼类的营养健康状况与环境适应能力。GPT主要存在于肝脏、心脏和骨骼肌等组织中，GOT 主要存在于心肌细胞中，若血液中该酶活性超出正常范围，则标志着心脏、肝脏细胞受到损伤。血清总蛋白是白蛋白和球蛋白的总称，在提供机体蛋白和机体免疫过程中发挥作用，可作为机体吸收蛋白质的指标。胆固醇主要来自于肝脏的合成，是动物细胞必不可少的物质，血液中的胆固醇应在一定范围内，一旦胆固醇水平较高，易引起血管堵塞，造成高血压和其他心血管疾病；血液三酰甘油是血液脂质的组成部分，当机体脂肪含量过高，肝脏可对多余脂肪进行分解，但当血液中的三酰甘油和总胆固醇的含量异常高时，往往也说明肝脏受损，使肝脏无法对多余血脂类进行有效降解。本研究中，多鳞白甲鱼各项血清生理生化指标在三组间均无显著差异，表明处理组和对照组的鱼体具有一样的健康水平，也说明这两种富硒菜饼同普通菜籽饼一样，对多鳞白甲鱼的营养与生理健康有良好的促进作用。

3.2.3 不同富硒菜籽饼对多鳞白甲鱼抗氧化系统的影响

机体在代谢过程中会产生大量活性氧，这些存在于组织中的活性氧可对DNA、蛋白质、碳水化合物及脂质造成破坏，这些潜在的有害反应就是由机体的抗氧化系统进行控制，从而维护机体健康；该抗氧化系统包括酶类和非酶类两部分。其中，酶类抗氧化体系包括谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、过氧化物还原酶、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）等，除此之外，机体内还存在多种新型抗氧化酶，如硫氧还蛋白、谷氧还蛋白、含硒蛋白和金属基质蛋白酶等，它们通过对氧化还原反应的催化作用来清除机体的氧化物质，保护机体免受损伤。非酶类抗氧化系统通常包括水溶性的维生素C、硫辛酸和尿酸等，以及脂溶性的胡萝卜素、维生素E 和辅酶Q 等，这些物质既可以在体内合成又可以从自然界中获取。酶类和非酶类抗氧化体系共同构成一个复杂的抗氧化系统，共同作用抵抗潜在的氧化损伤，对维持机体正常生理状态具有重要意义。

硒是GPx的活性中心元素，从而使GPx具有抗氧化功能，使GPx能通过酶促反应体系还原过氧化氢及脂质过氧化物，通过催化具有还原性质的谷胱甘肽将有害的过氧化氢及脂质过氧化物还原为无害的水及烃基化合物，从而抵御细胞膜的损伤。已有文献报道，随着饲料硒水平的升高，罗非鱼血清和肝脏的GPx活性也随之升高，在肖金星等（2020）、杨原志等（2016）的研究中也发现，黑鲷和军曹鱼血清GPx的活性随饲料硒含量增加而显著升高。本试验结果显示，具有较高硒含量的C组显著提高血清GPx活性，这可能与该饲料具有较高硒含量有关，而这较高的硒含量中所增加的硒含量部分，是由富硒菜籽饼中的硒所提供，因此，从某种程度上表明，以中油杂与陕油28为代表的两种富硒菜籽饼在提升多鳞白甲鱼GPx酶活性方面具有促进作用。

T-AOC 是机体内酶类和非酶类两部分因子总抗氧化能力的总体现，在龙萌等（2015）的研究中发现，饲料中添加不同水平的酵母硒可显著提高团头鲂幼鱼机体T-AOC 水平。本试验结果显示，使用两种安康富硒菜籽饼的B、C 组极显著提高了血清T-AOC，表明该安康菜籽饼的使用提升了多鳞白甲鱼总抗氧化能力。

MDA是氧自由基攻击生物膜引起脂质过氧化反映而生成的产物，本试验三个组血清MDA 含量差异不显著，陈春秀等（2019）在纳米硒对半滑舌鳎幼鱼抗氧化水平影响的研究中也发现，硒对MDA 含量的影响不显著，这与本试验结果一致，由此也说明，采用该富硒菜籽饼，没有减少脂质过氧化产物的生成量，也没有加速脂质过氧化产物的生成量，对多鳞白甲鱼的抗氧化系统没有形成负面压力。

在分子水平上，抗氧化酶基因的相对表达量也能反映机体的抗氧化能力。研究发现，饲料中添加0.3 mg/kg硒，在哺乳动物山羊各组织中可检测到较高GPx表达量。在鸡的研究中也发现，日粮中添加硒时，GPx的表达水平显著高于对照组，且有机硒的效果要优于无机硒。刘碧涛等（2014）的研究也发现，较0.045 mg/kg硒含量的日粮，0.4 mg/kg硒含量的日粮小鼠肾脏SOD、CAT表达有不同程度升高。本研究发现，富硒菜籽饼的使用，B组多鳞白甲鱼肝胰脏GPx相对表达量极显著增高；C 组中另一种抗氧化基因CAT相对表达量也极显著上调；B、C组SOD相对表达量呈不显著的上升趋势。由此说明，富硒菜籽饼能够通过提高SOD、GPx和CAT的表达水平来提高肝脏的抗氧化能力，以增强机体抵抗外界应激变化的能力。

综合血清生化指标、血清抗氧化酶活性以及肝胰脏抗氧化酶基因的相对表达结果，可以看出，两种富硒菜籽饼的使用比普通菜籽饼更能对抗多鳞白甲鱼的氧化应激状态，对鱼体健康呈现积极反应。

3.3 不同富硒菜籽饼对多鳞白甲鱼机体硒沉积及富硒鱼养殖的影响

饲料的硒含量与鱼体的硒含量密切相关，这与鱼体肠道对来自饲料硒的消化、吸收与利用有关。本试验的研究结果表明，多鳞白甲鱼肠道的硒含量0.94～1.13 mg/kg 远高于肌肉硒含量0.35～0.38 mg/kg，表明饲料硒是鱼体肠道吸收硒的主要来源，同时也表明，肠道对饲料中硒的消化与吸收是鱼体其他组织器官，包括肌肉中硒的主要来源。Liu 等（2017）的研究表明，随着饲料硒含量的增加，硒在鱼各组织中的沉积量也增加，表现为团头鲂全鱼、肌肉及肝脏的硒沉积量随着饲料硒水平呈线性上升趋势。本试验结果显示，三组试验饲料饲喂多鳞白甲鱼，鱼体肌肉（鲜）硒含量在各组间无显著差异，这可能与本试验使用的三组饲料硒含量相近有关。经检测，三组饲料的硒含量分别为0.88、0.91 mg/kg和1.0 mg/kg（见表1），在335 mg/kg菜籽饼配制水平下，三组饲料中，由三种菜籽饼提供的硒含量分别为0.019、0.044 mg/kg及0.144 mg/kg，由此可见，由菜籽饼提供的硒使配合饲料的总硒含量有所不同，然而，鱼体肌肉所蓄积的硒，要经过肠道的消化、吸收以及其他组织器官的协同代谢和利用，这使得肌肉蓄积的硒并非完全反映饲料硒含量。肌肉硒含量究竟能多大程度地反映饲料硒含量，这将与不同的鱼或不同的鱼体状态等方面有关，相关问题尚需进一步研究。

权群学等（2015）的研究发现，饲喂酵母硒的时间对育肥猪肌肉硒沉积量产生积极影响，肌肉硒含量随着酵母硒饲喂时间的延长而上升。在本试验中，随着养殖时间的延长，肌肉硒含量由饲喂初始的0.26 mg/kg增加到中期（30 d采样）的0.32 mg/kg，到末期（60 d采样）时的0.37 mg/kg，表现出肌肉对硒蓄积量的增加趋势。在以往对多鳞白甲鱼的研究发现，饲喂含纳米硒饲料的多鳞白甲鱼全鱼的硒含量最高可达2.08 mg/kg，饲喂含酵母硒饲料的多鳞白甲鱼肌肉硒含量可达0.5 mg/kg。本研究中，经过60 d 的饲养，多鳞白甲鱼肌肉的硒含量0.37 mg/kg，距离前人研究的0.5 mg/kg 硒含量还有较大差距，笔者推测，若延长养殖时间，多鳞白甲鱼肌肉硒沉积量可能会得到进一步提升。

硒具有抗氧化、防衰老、保护和修复细胞、提高红细胞的携氧能力、提高人体免疫力、解除重金属的毒害等功能。硒对人类的健康具有无可替代的作用。鱼类是人类食物的重要组成部分，是人类硒营养元素的重要且安全的来源。通过养殖富硒鱼，来提高人类的硒摄入量，一直是水产养殖的研究热点。2012 年7 月湖南省首例富硒鱼研究成功，其产品硒含量达到1.28 mg/kg，符合富硒食品硒含量≥0.2 mg/kg 的标准。近几年，有关富硒鱼的养殖试验开展越来越多，如富硒鲈鱼、富硒草鱼以及富硒鲢鱼等的养殖，其目的都在于采取科学的技术手段，有效富集鱼体硒元素，达到富硒标准，为人类所用。本试验中，多鳞白甲鱼新鲜肌肉的硒含量从养殖初期的0.26 mg/kg 到养殖末期的0.35～0.38 mg/kg，均符合陕西省对非即食水产品的富硒标准，即硒含量≥0.15 mg/kg（DB 61/T 556—2018），因此，可以看出，通过本试验方法，养殖出的多鳞白甲鱼为富硒鱼。

有研究表明，水产品的不同烹饪与加工方法可能会影响鱼体硒的含量，通过对淡水鱼不同鱼肉制品的硒含量的评估，发现腌制鱼和熏制鱼的肌肉硒含量要显著高于原始样品肌肉硒含量。根据陕西省地方标准DB 61/T 556—2018规定，当水产动物产品中硒含量≥0.15 mg/kg时，即为富硒水产品。本试验中，三组饲料饲喂的多鳞白甲鱼，经油炸方式加工成熟食制品后，其肌肉硒含量为0.45～0.54 mg/kg，显著高于0.15 mg/kg的硒含量标准，表明油炸加工可增加多鳞白甲鱼体肌肉硒含量，且该加工方式生产多鳞白甲鱼是富硒的即食水产品。由此可见，将多鳞白甲鱼进行油炸加工，是形成富硒多鳞白甲鱼旅游休闲食品的有效途径，这为本试验的后续研究，即将鱼体进行腌制或熏制，形成多样化的富硒鱼旅游休闲食品提供有益的参考。

4 结论