冠心康颗粒重复给药试验研究分析

闻金玲，马 骏，王少飞

(1.庆阳市中医医院，甘肃 庆阳 745000；2.甘肃中医药大学，甘肃 兰州 730000)

冠心康颗粒系中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十九册[1](WS3-B-3617-98)收载的中药制剂。它由赤芍、丹参、降香、红花和川芎组成，具有活血行气，化瘀止痛之功效。临床用于血瘀气滞，血脉痹阻所致的冠心病、心绞痛。为了观察连续重复给予冠心康颗粒对动物产生毒性反应首先出现的症状及严重程度，找出毒性反应靶器官，确定该药的无毒反应剂量，为拟定人用安全剂量疗程提供参考，本研究按照CDE中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则要求[2]，对冠心康颗粒的长期毒性进行了研究，现将结果报道如下：

1 材料与方法

1.1 受试药物

冠心康颗粒，10g/袋(相当于原生药19g)，批号214106，西峰制药有限公司生产。剂量组别：冠心康颗粒低剂量组6.0g/kg·d-1(相当于临床剂量的12倍)、冠心康颗粒高剂量组13.0g/kg·d-1(相当于临床剂量的26倍)；给药途径：分2次灌胃给药，与临床给药途径一致。药物配制：根据给药剂量不同，将药物研磨后用纯化水配制成不同浓度混悬液备用。

1.2 实验动物

SPF级Wistar大鼠60只，160±15g，雌雄各半，由兰州大学实验动物中心提供。生产许可证号：SCXK(甘)2013-0002，合格证号：62000800000235。

1.3 造模给药

适应性喂养1周后，将大鼠随机分为对照组igNS,、冠心康颗粒低剂量组6.0g/kg·d-1、冠心康颗粒高剂量组13.0g/kg·d-1，每组20只。各组按剂量每天分2次给药，连续60天，对照组灌胃等体积的生理盐水，给药体积1.5ml/100g，并随时根据动物体重增长调整给药量。

1.4 仪器与试剂

CX-5生化自动分析仪，美国贝克曼公司；TEK-II型全自动血液分析仪，上海涵飞医疗器械有限公司；Benchmark Plus 10705酶联免疫测试仪；美国伯乐Bio-Rad公司；DMR+Q550病理图像分析仪，德国Leica公司产品；Sartorius微量天平，北京赛多利斯天平有限公司。

1.5 观察指标

一般情况：每日观察大鼠的进食量、外观体征、行为活动、粪便性状以及体重改变情况(每周末称体重一次)。

血液学指标：分别于给药60天及停药后第20天，在大鼠尾尖3mm处剪尾取血，检测红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、白细胞(WBC)及白细胞分类计数(Leukocyte differential count)中的淋巴细胞(Lymphocyte)、中性粒细胞(Neutrophils)、单核细胞(Monocyte)、嗜酸性粒细胞(Eosinophils)。

大鼠脏器指数及病理组织学检查：在给药60天及停药后第20天，分别于最后一次给药后24h，每组各取1/2的大鼠颈椎脱臼处死后取大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺和胸腺等脏器称重，计算脏器指数，脏器指数=脏器质量/体质量(mg/g)。另取一小块上述组织置于4%中性甲醛溶液中固定24h，进行常规石蜡包埋、切片，切片厚度5μm，常规HE染色，进行组织形态学观察。

1.6 统计方法

2 结果

2.1 对大鼠一般状况及体重的影响

连续给药60天及停药20天恢复期，实验观察中未发现大鼠外观特征、行为活动及摄食量等有显著改变。给药前及给药第1、2、3、4、5、6、7、8、11周末称大鼠体重。冠心康颗粒低剂量组、冠心康颗粒高剂量组大鼠体重分别与同时期正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 冠心康颗粒对大鼠体重的影响

表2 给药60天对大鼠血清生化结果的影响

表3 停药20天恢复期对大鼠血清生化结果的影响

表4 给药60天对大鼠血液学指标的影响

表5 停药20天恢复期对大鼠血液学指标的影响

表6 给药60天后对大鼠脏器指数的影响

表7 停药20天恢复期后对大鼠脏器指数的影响

2.2 对大鼠血液生化指标的影响

结果显示，连续给药60天及停药20天恢复期，与对照组相比冠心康颗粒低剂量组、高剂量组大鼠血清中ALT活力、AST活力、尿素氮、Crea含量水平差异无统计学意义(P>0.05)。见表2、表3。

2.3 对大鼠血液学指标的影响

结果显示，给药60天及停药20天后所测得的RBC数、Hb含量、WBC数及白细胞分类，与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表4、表5。

2.4 对大鼠各脏器指数的影响

结果显示给药60天及停药20天后与对照组相比，冠心康颗粒高、低剂量给药组大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺和胸腺脏器指数差异无统计学意义(P>0.05)。见表6、表7。

2.5 组织病理学检查

给药60天和停药20天后，处死大鼠进行尸解，肉眼观察给药组与对照组大鼠相比主要脏器的大小、颜色、质地，发现无明显差异，仅见个别大鼠肺少量充血，其余脏器均未见萎缩、肿胀、充血、淤血、坏死等异常改变。对高剂量组、对照组、停药组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺和胸腺等脏器进行HE染色和组织病理学检查，光镜下观察组织形态，发现与对照组相比，各给药组大鼠心肌结构正常，纵纹、横纹清晰可见；肝小叶结构、形态正常，肝窦壁有枯否氏细胞和窦壁细胞增生；脾脏的脾小体和脾窦结构正常，中央动脉清晰可见；肺小叶间隔及其中的细支气管周围可见少量淋巴细胞浸润，肺泡正常；肾皮质、肾小球和肾小管结构正常，间质小血管扩张充血；肾上腺皮质球状带、束状带和网状带细胞和髓质细胞结构形态正常；胸腺皮质、髓质结构正常，淋巴细胞结构正常，髓质中可见胸腺小体。以上结果显示与对照组大鼠相比冠心康颗粒高剂量组、停药组均未观察到明显的组织病理学异常改变。结果见图1-21(HE×400)所示。

3 讨论

3.1 本实验剂量选择

本品急性毒性试验表明，本品毒性较小，无法测定LD50，故测定冠心康颗粒最大耐受量。以动物能耐受的最大浓度(0.4g/ml)、最大容量(0.8g/ml)一日内两次灌胃给药，连续观察七天，记录动物反应情况，以不产生死亡的最大剂量为最大耐受量。结果表明：给药一周内小鼠行为无异常变化，摄食、活动及精神均正常，无一只小鼠死亡。经计算冠心康颗粒对小鼠(一日内两次)的最大耐受量为60.8g/kg(合生药量g/kg表示)，经推算相当于临床用药量的53.3倍。本品大鼠长期毒性实验，按照1.5ml/100g体重灌胃给药，药物剂量组设置高剂量组和低剂量组，高剂量组给药剂量为13.0g/kg·d-1，低剂量组为6.0g/kg·d-1，并根据动物体重增长调整给药量，2次/天。因本制剂主要用于冠心病、心绞痛等疾病，用药周期较长，为与临床用药情况相似，故在本研究中设计连续灌胃给药周期为60天。

图1 对照组心脏 图2 高剂量组心脏 图3 停药组心脏

图4 对照组肝脏 图5 高剂量组肝脏 图6 停药组肝脏

图7 对照组脾脏 图8 高剂量组脾脏 图9 停药组脾脏

图10 对照组肺 图11 高剂量组肺 图12 停药组肺

图13 对照组肾 图14 高剂量组肾 图15 停药组肾

图16 对照组肾上腺 图17 高剂量组肾上腺 图18 停药组肾上腺

图19 对照组胸腺 图20 高剂量组胸腺 图21 停药组胸腺

3.2 对大鼠一般状况及体重的影响

实验期间各剂量组大鼠的一般状况、进食量、饮水、活动均正常，未出现异常症状和死亡现象，进食量和体重均正常增长，冠心康颗粒剂量组大鼠体重总增重与进食量略低于对照组，可能是由于药物混悬液过于黏稠，对胃造成机械负担导致吸收障碍，从而影响大鼠进食与增重，但与对照组比较差异不显著(P>0.05)。这说明冠心康颗粒在本试验剂量范围内对大鼠消化系统的影响不大，不会对大鼠的一般状况及正常生长产生影响。

3.3 对大鼠血液学各项指标的影响

血液生理指标是判定药物毒性的重要指标[4]，本实验给药60天后，大鼠WBC分类中高剂量组与对照组比较淋巴细胞升高，但在正常范围内。淋巴细胞正常值范围[5]为65-84%。其他各项指标与对照组比较差异不显著(P>0.05)。说明冠心康颗粒在本试验剂量范围内对大鼠的血液学指标无影响。

3.4 对血液生化指标的影响

血液生化指标判定了药物对主要脏器毒性作用[6]。动物肝脏中含有多种酶，当肝脏受损时，会导致血清中酶含量发生改变，临床中通过对血清中ALT和AST的检测判断肝脏功能[7]。肾功能检测的指标包括肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)[8]。本实验主要对大鼠肝功能、肾功能等指标进行了检测。在肝、肾功能检测结果中各项结果略有变化，但给药组与对照组相比各项指标均无显著性差异(P>0.05)，且均在正常的生理范围内，这说明冠心康颗粒在本试验剂量范围内对大鼠的血液生化指标无影响。

3.5 对主要脏器的影响

在药物安全评价中，由于药物作用的影响，常会引起动物一些器官质量的减低，根据脏器系数来检验动物的脏器是否受到药物的不良影响[9]。对大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺和胸腺给药前后进行称重，计算脏器指数，给药组与对照组相比较无显著性差异(P>0.05)，说明冠心康颗粒对大鼠脏器大体方面无影响。给药60天和停药20天后，未发现大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺和胸腺有任何具有病理学意义的组织学改变，说明冠心康颗粒在本试验剂量范围内对大鼠主要脏器无病理损害作用，无迟发性毒性作用。

3.6 冠心康颗粒处方分析

冠心康颗粒处方中丹参活血祛瘀，通经止痛，清心除烦是为君，发挥化瘀止痛之主要功效；赤芍清热凉血，散瘀止痛是为臣，协助君药散瘀以止痛；川芎、降香共为佐药。降香化瘀止血，理气止痛。川芎活血行气，祛风止痛。两种药协同共助君臣之力，以活血化瘀而止痛，兼以调理气机，气机畅则心慌、心悸、胸闷症状消失；红花归心经，可引药到达病所是为使药。诸药合用，共凑活血通经，散瘀止痛之功效。

3.7 冠心康颗粒药理实验研究

赤芍具有保肝、抗肿瘤、神经保护、心脏保护、抗血栓、抗氧化、抗内毒素等多种药理作用，对心血管系统、神经系统及血液系统等均有良好的临床治疗效果[10]。丹参具有广泛而复杂的药理活性，其中的活性成分高达上百种，丹参酮类脂溶性成分主要的药理活性为抗凝血及抗血小板聚集、调血脂、抗炎、抗肿瘤；酚酸类水溶性成分主要的药理活性为抗氧化、抗动脉粥样硬化、降血压[11]。降香研究表明：其对心血管疾病具有一定的治疗作用，具有改善心肌重构，促进血管新生，改善心肌功能，抗血栓、血小板凝集的功能[12]。红花研究表明：其具有抗凝、保护心肌、稳定血管内皮细胞、调节细胞内外钙离子作用。红花治疗心血管疾病、糖尿病并发症临床应用价值较高[13]。川芎研究表明：川芎所含有的川芎嗪和阿魏酸均具有较好的抗血栓形成的作用，均可有效促进血管的舒张，进而延缓动脉粥样硬化的发生[14]。

冠心康颗粒用于治疗冠心病稳定性心绞痛的临床疗效明显优于复方丹参片[15]；冠心康中剂量具有明显的降低TC、TG、LDL-C，升高HDL-C含量的作用，减轻肝脏脂肪沉积，保护肝细胞，从而起到调控血脂水平的作用[16]；冠心康颗粒可以降低血浆中总同型半胱氨酸的浓度，减轻高脂血症的程度，抑制主动脉内皮细胞NF-KB mRNA表达，减轻内膜增生的程度，具有抗动脉粥样硬化的作用，可作为中国人特发的高同型半胱氨酸老年病的特效药[17]。

4 结论

近年来，国内冠心病的发病率及死亡率呈逐年上升趋势，对人民的生命健康产生了巨大威胁，冠心康颗粒临床使用及相关研究随之增多[18]。然而冠心康颗粒报道的研究仅涉及药效学、药理学、质量标准等方面，未发现毒理学研究报道。本试验通过冠心康颗粒对大鼠的长期毒性研究，发现用药及停药后大鼠脏器未受损、组织形态未发生病理改变。作为中国人特有的高同型半胱氨酸老年病的特效中成药，根据实验数据，针对临床血瘀气滞，血脉痹阻所致的冠心病、心绞痛患者，应用该药疗效可靠，建议服用疗程可延长至两个月。