改良全自动粪便分析仪检测华支睾吸虫虫卵效果评价

刘志欢,孙恒昌,黄建华（中山大学附属第三医院,广东 广州 510630）

华支睾吸虫病（Clonorchiasis）又称肝吸虫病，是华支睾吸虫（Clonorchis sinensis）成虫寄生在人体肝胆管，成虫堵塞胆管及代谢产物、分泌物等刺激胆管产生炎症，又迫使肝脏出现脂肪变性、萎缩坏死等现象的一种严重的人兽共患寄生虫病。主要流行于我国广东、广西、黑龙江、吉林等省份（自治区）[1]，其中广东省是我国发现最早、感染最严重的省份，感染率达5.56%；顺德区、番禺区、勒流区居民感染率更是达到了18.52%、22.30%、39.98%，为高流行区[2-3]。生食淡水鱼行为是华支睾吸虫病感染的主要途径；居民的喜食淡水鱼生习惯、生熟砧板混用等不良卫生行为使得大众感染率持续上升[3]。由于华支睾吸虫病前中期感染临床症状不突出，容易与其他胃肠疾病或肝炎混淆，常常出现因为发现不及时，而错过最佳治疗时机的状况。粪便显微镜检查虫卵是诊断华支睾吸虫的金标准。目前，改良加藤厚涂片法是临床运用的主要方法之一，但是该方法操作繁琐、费时费力，检测结果受检验人员经验技术的影响等，难以满足临床快速检测的需求。因而，探索粪便华支睾吸虫虫卵快速检测技术具有重要意义。全自动粪便分析仪能自动识别粪便中的虫卵，具有简便快速、便于标准化等优点，但是常规仪器检测模式下容易造成虫卵漏检。本文通过改变全自动粪便分析仪的参数等提高仪器法华支睾吸虫的检出率，并与传统方法的检测效果相比较，具体报告如下。

1 一般资料与方法

1.1 选取2020年5月-2020年9月中山大学附属第三医院检验科华支睾吸虫感染的门诊和住院患者粪便标本137例，每份粪便量5-10g。分别应用改良加藤厚涂片法（Kato-Katz）和全自动粪便分析仪（KU-F20，珠海科域股份有限公司）进行华支睾吸虫虫卵检测。

1.2 检测步骤 改良加藤厚涂片法的检测采用《第四版全国检验标准操作规程》中的流程，由经验丰富的检验人员进行检测，一式三份，包括基本操作方法、采样标准、镜检标准和结果判读计算。三张片全片计算华支睾吸虫总数除以3再乘100，即总数/3×100个/g为每克粪便华支睾吸虫虫卵数。

改良全自动粪便分析仪肝吸虫卵检测法流程，包括基本操作方法、采样标准、镜检标准和结果判读计算。按仪器KU-F20粪便分析仪粪便采集流程收集标本，一式两份；对仪器拍摄参数进行以下设置，仪器拍照参数设置A组（10倍镜拍摄）：共20组，B组（40倍镜拍摄）：共24组；每组拍4个视野，每个视野有4张图片，共176个视野，704张图片/标本。设置仪器镜检完成自动识别所拍摄图片中的华支睾吸虫虫卵，人工对仪器识别的虫卵进行二次判读确认。

1.3 结果统计分析 本研究用改良加藤厚涂片（Kato-Katz）法作为标准法，分析改良粪便分析仪华支睾吸虫虫卵检测法的检测效力，主要包括以下评价指标：灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值等，粪便华支睾吸虫虫卵检测灵敏度特异性的差异（P＜0.05表示差异有统计学意义）。Kappa检验评价两种方法的一致性，Kappa值＜0：一致性极差；0-0.2：微弱；＞0.2-0.4：弱；＞0.4-0.6：中度；＞0.6-0.8：高度；＞0.8-1.0：极强。

2 结果

2.1 改良加藤法华支睾吸虫检测结果137例标本中阳性69例，阳性率50.36%；改良粪便分析仪法华支睾吸虫检测结果137例标本中阳性73例，阳性率53.28%。两种方法检测结果比较见表1。

表1 改良加藤法与改良全自动粪便分析仪检测粪便中华支睾吸虫虫卵的检测结果

以加藤法为标准方法，全自动粪便分析仪法检测华支睾吸虫虫卵的敏感性为86.96%，特异性为80.88%。阳性预测值75.95%，阴性预测值85.93%。两种方法符合率为83.9%，一致性检验显示仪器法的检测结果与加藤法高度一致。

3 讨论

目前用于诊断华支睾吸虫病的方法主要有病原学诊断方法、免疫学诊断方法、分子生物学诊断方法。免疫学诊断方法中主要是ELISA和免疫胶体金技术，但其敏感性和特异性不高，使用改良加藤厚涂片法与ELISA联合检测，检出率更高；分子生物诊断方法主要是PCR法，前景比较好，但是现阶段技术要求上尚未达到比较理想水平，且分子生物学和免疫学检测技术对仪器设备、人员素质等要求较高，不适合基层检测机构推广使用[4-8]。改良加藤厚涂片法，是现在各临床实验室主要应用的检测方法，但是该方法处理复杂，操作步骤多、耗时长、气味难闻，生物安全性较低，且临床结果报告时间长，往往难以满足临床快速检测的需求。因此，探索粪便华支睾吸虫虫卵简便、准确的快速检测方案具有重要的临床意义。

全自动粪便分析仪在进行粪便常规检测的时候，标本为全封闭状态下，多点抓取，通过对粪便样本进行稀释、过滤大的残渣之后涂片。在显微镜下，利用显微摄像技术采集粪便涂片的多个视野图像，继而将图片中识别的特征性物质与仪器数据图片库中细胞、脂肪球、寄生虫卵等的形态进行比对，从而实现粪便中红细胞、白细胞、脂肪球、虫卵等的识别检测。已有研究对比了人工镜检和全自动粪便分析仪对寄生虫的检测效果。结果发现粪便分析仪检测寄生虫与人工镜检的结果一致性达到98.9%[9]。但是笔者发现KU-F20全自动粪便分析仪器推荐的粪便常规检测拍摄视野和每个视野拍摄数量较少，因此可能导致肝吸虫卵的漏检。笔者推测仪器拍摄的视野数量和每个视野拍摄的图片数量越多，粪便中虫卵被检测出的几率越高，敏感性也就越高，因此对拍摄参数进行改进也许能提升华支睾吸虫的检测率。

本文通过调整设置KU-F20全自动粪便分析仪的粪便沉渣拍摄参数，即增加每份粪便样本中的拍摄视野和每个视野拍摄数量，并且同一份粪便标本重复两次进行检测。改良后的仪器法检测肝吸虫的敏感性和特异性分别达到86.96%和 80.88%。阳性预测值75.95%，阴性预测值85.93%。且一致性分析显示，全自动粪便分析仪法与加藤法结果高度一致。此外，仪器检测法极大缩短了粪便肝吸虫检测的报告时间，提高了检测效率。且自动化程度高，检测过程为全封闭状态下进行，自动化程度和生物安全性高，减少人为误差。

传统形态的显微镜观察在检验过程中仍属于金标准，但是单一的显微镜观察容易使检验人员产生视觉疲劳，影响结果判读，甚至容易产生漏检，仪器法有望在一定程度上代替这一单一的镜检工作；其次仪器法的检验图片可以保留，图片的保留不仅便于教学[10]，也有利于在医生或患者对检验结果有疑问时，作为检验结果的可靠证据。所以在不影响检验结果甚至在准确性能更优的情况下，用仪器法代替人工计数，使得检验人员能更好地对结果进行分析，完成更多的临床检验任务及教学任务，具有较好的临床应用价值。