内窥镜在鸸鹋真菌性气管炎疾病诊断中的应用

2022-08-18朱云芸焦思敏普天春刘秉祺

现代畜牧兽医 2022年7期

朱云芸，胥哲，焦思敏，罗毅，丁楠，普天春*，刘秉祺

（1. 北京动物园，北京 100044 ； 2. 辽宁省农业发展服务中心，辽宁沈阳 110032）

禽真菌性气管炎、真菌性肺炎是禽类常见疾病之一。在圈养条件下，禽类自生活环境中吸入大量真菌孢子以及动物机体免疫力下降是导致真菌侵袭主要诱因。在圈养动物饲养管理工作中，疾病诊断是重要的组成部分；对珍稀野生禽类真菌性气管炎、肺炎进行诊断，尽可能快速地取材确诊避免禽类应激，是更值得被关注的问题。

禽类呼吸系统真菌感染的关注点多为家禽养殖，有关圈养野生珍禽的研究则多集中于对症治疗及剖检，内窥镜应用于圈养珍禽的真菌性呼吸道疾病鲜少报道。本文记录了对北京动物园圈养鸸鹋进行内窥镜气管检查及窥镜引导下活检，取气管膜附着物，并通过真菌培养、基因测序，对该病例进行诊断；经检查确诊为热带念珠菌及阿萨希丝孢酵母菌混合感染的气管炎。文章以气管膜附着物的技术应用为例，对该病例的诊断治疗进行分析，以期为珍惜禽类真菌性气管炎肺炎相关呼吸道感染提供诊断方案，提升相关疾病的治愈率。

1 病例资料

病例为北京动物园内圈养鸸鹋，雌性，体重30 kg，5 岁；消瘦、咳喘、拒食。经临床兽医治疗，采用恩诺沙星2.2 mg/kg肌肉注射7 d[1]，未见显著变化，站立逐渐困难，胸部影像学检查未见明显病变。

为明确诊断，防止疾病加重，需进一步在麻醉状态下进行气管内检查，在内窥镜引导下取样，进行真菌培养，样本进行ITS基因测序。

2 检查结果

2.1 真菌分离培养及鉴定（见图1～图4）

鸸鹋麻醉前禁食禁水10 h，吸入麻醉。麻醉平稳后，持气管镜探入鸸鹋气管内观察气管内壁，并在窥镜引导下使用纤支气管活检钳采样。鸸鹋苏醒后未见不良反应。

将采集到的样品置于无菌试管，2 h 内送至实验室化验。样品加入1 mL灭菌水，3 000 r/min离心5 min，取沉淀物接种于DTM培养基内[2]，25 ℃培养1周，观察培养结果。所用培养基购自北京索莱宝科技有限公司。

DTM 培养基可见两种真菌菌落生长，编号命名为菌1、菌2。菌1 革兰氏染色镜检结果、培养基上的菌落形态见图1、图2；菌2革兰氏染色镜检结果、培养基上的菌落形态见图3、图4。

由图1、图2可知，菌1显微镜下观察呈短杆状，单个或双个成串，为革兰氏阳性菌；菌落呈乳黄色，随菌落生长，菌落边缘呈褶皱状花瓣状。

图1 菌1革兰氏染色镜检结果Fig.1 Gram stain microscopy result of bacterial 1

图2 菌1的菌落形态Fig.2 Colony morphology of bacteria 1

由图3、图4 可知，菌2 显微镜下观察呈着色不均的圆形或卵圆形，为革兰氏阳性菌；菌落呈乳白色，直径为2 mm，为凸起无光泽圆形菌落。

图3 菌2革兰氏染色镜检结果Fig.3 Gram stain microscopy result of bacterial 2

图4 菌2在DTM培养基上的菌落形态Fig.4 Colony morphology of bacteria 2

2.2 测序结果（见图5、图6）

两分离菌株经中瑞动检（北京）生物技术有限公司基因测序，结果通过Gen Bank进行Blast对比，相似度均达到99%。由图5、图6 可知，菌1 为阿萨希丝孢酵母菌，菌2 为热带念珠菌。

图5 阿萨希丝孢酵母菌部分序列Fig.5 Partial sequence of Trichospora asahi

图6 热带念珠菌部分序列Fig.6 Partial sequence of Candida tropicalis

2.3 诊断结果

经真菌培养、ITS基因测序，患病鸸鹋气管内白色附着物及主支气管样本为热带念珠菌及阿萨希丝孢酵母菌，诊断为两种真菌混合感染的气管炎。由于真菌斑块长期附着，患病鸸鹋气管膜可见点状出血。

3 治疗

3.1 用药方案

根据诊断结果，患病鸸鹋采用抗真菌药物联合用药，并配合雾化进行治疗。口服伏立康唑20 mg/kg，连续服用21 d；口服伊曲康唑8 mg/kg，连续服用14 d[1]。F10（主要成分为季铵盐和双胍类两性表面螯合剂）加灭菌水，按照1∶250 的比例稀释，取20 mL 进行雾化治疗，每次20 min，每日1 次，连续10 d[1,3]。使用F10 加灭菌水按相同比例稀释，取1 mL 对患病鸸鹋进行气管注射，连续3 d[3]。经治疗，患病鸸鹋康复。

3.2 兽舍消毒

该鸸鹋临近兽舍环境喷洒消毒，更换铺设垫料，F10消毒剂按1∶500稀释对鸸鹋兽舍环境每日喷洒消毒。冬季保证兽舍内温度不出现大幅度波动；日粮中合理补充蛋白质，增加营养摄入。夏季高温多雨，兽舍内增加通风，更换室内垫料。更换垫料时为避免出现吸入真菌孢子的风险，应先将鸟类移出[4-5]。日常应保证动物在室外的活动时长[5]。此外，水盆与食盆也应使用F10消毒剂，稀释后每日浸泡消毒[3]。

4 讨论

热带念珠菌是重要的念珠菌血症和播散性念珠菌病的病原菌[2]，在一定条件下定植于呼吸道、肺部、胃肠道等处[6]。念珠菌的主要致病因素为机体抵抗力降低或长期使用广谱抗生素[7-8]，其他因素包括老龄、营养不良、环境清洁度等。热带念珠菌是侵袭性真菌病的主要致病菌，可表现出较强的毒力[9-11]；热带念珠菌易形成生物膜[12]，具较强的附着性，导致兽舍消毒易残留、患病动物易反复感染或传染同兽舍内其他动物[9,13]。

2022年，国内人类临床医学报道了首例散播性丝孢酵母菌病[14]，表明阿萨希丝孢酵母菌可引起浅部感染如白毛结节病，还可导致深部侵袭性感染[15-16]，发病率呈明显上升趋势，且临床表现多样化[13,15-16]。阿萨希丝孢酵母菌致病力较强，感染常见于长期使用广谱抗菌药导致菌群紊乱或免疫功能下降，可引起侵袭性肺部感染导致呼吸衰竭预后差，病死率高[14,17]。有研究表明，联合用药在治疗丝孢酵母菌病方面具有重要的意义[14,17-18]。

本文治疗过程中，真菌培养所需化验时间较长。而动物治疗时间宝贵，故在日常临床诊疗中，若对某种疾病高度怀疑，得出明确诊断结果前先进行对症治疗可为动物提供宝贵的后续治疗时机[3]。如本文中患病鸸鹋呼吸困难等症状缓解后，采取长期口服真菌药物的治疗方案；直至再次临床检查时，培养结果为阴性。

在禽类临床用药中，伊曲康唑的生物利用度有限，且因该药物具有肝毒性副作用，用药的患病动物应每月进行血清生化检查[1,19]。伏立康唑是较新的抗真菌药物，对禽类安全且对真菌感染的治疗效果较好[3]。有研究表明，联合用药可提高治疗效果，降低真菌耐药性的产生[14,17-18]。对于深部侵入型真菌感染应继续治疗2～3 月[20-21]，在治疗初期，患病动物自身抵抗力降低，动物出现真菌感染，影响患病动物的肺部与支气管局部组织的功能，使病情逐渐恶化，此时应提供支持性护理，包括输液、强制喂食、管饲等[3]。

内窥镜进行气管内观察及采样，是确诊禽类呼吸道真菌感染的必要诊断步骤[1]。对胸部影像学无明显病变特征的咳喘病例，应及时进行病原学和支气管镜检查，气管上出现的斑块及气管深部采样的鉴定结果可保证诊断的准确性，对明确诊断具有重要意义[22]。