妊娠期高血压疾病孕妇血清和胎盘组织中血管内皮生长因子、糖基化终末产物、转化生长因子-β1表达及其与病情严重程度相关性研究

张 丽，彭 静，金 璟，刘国成

(广东省妇幼保健院产科，广东 广州 511400)

妊娠期高血压疾病(Hypertensive disorders of pregnancy，HDP)是以血压剧增、水肿、蛋白尿、全身小动脉痉挛、各系统及脏器损害为主要病理表现的孕期常见并发症，部分严重者可出现子痫前期(Preeclampsia，PE)症状，极易增加母婴不良妊娠结局的风险，是导致孕产妇及新生儿死亡的主要原因之一[1]。如何预知并控制HDP的病情进展，及早做出有效干预，最大程度确保母婴安全是产科临床医师迫在眉睫的主要问题，而深入探究HDP的发病机制是关键。近年来，越来越多的研究[2]显示，HDP的发生可能与血管活性因子和内皮细胞的炎性反应有关。血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是特异性较高的促血管生长因子，具有较强的抗血管作用，而糖基化终末产物(Advanced glycation end products,AGEs)可通过调节转化生长因子(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达，参与血管内皮细胞的炎性反应[3-5]。然而，目前针对三者在HDP疾病中的共同作用及机制研究较少，因此，本研究将探讨VEGF、AGEs、TGF-β1的表达水平及其与HDP病情严重程度的相关性，以期通过母体和胎盘两个方面为HDP的临床诊治提供新思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究选取2020年1月至2021年6月期间广东省妇幼保健院产科收治的90例HDP孕妇为研究对象，其中包括HDP组、轻度PE组及重度PE组各30例；同期内另选取30例健康妊娠孕妇设为对照组。病例纳入标准：①HDP孕妇符合第9版《妇产科学》中相关诊断及分类标准[6]；②健康妊娠孕妇为足月妊娠，无并发症且最终分娩健康新生儿。③均为单胎妊娠，孕周20～40周；④年龄20～35岁；⑤研究前均获得所有孕妇知情同意。排除标准：①孕前有原发性或继发性高血压病史；②合并糖尿病、心脏病、肾脏疾病、自身免疫性疾病等；③合并胎膜早破、羊水过多或过少等其他妊娠并发症。本研究已经医院伦理委员会通过。HDP组年龄23～33岁，平均(28.21±2.54)岁；孕周37～40周，平均(38.22±1.20)周。轻度PE组年龄23～35岁，平均(28.47±2.63)岁；孕周37～40周，平均(38.71±1.52)周。重度PE组年龄22～35岁，平均(28.55±2.74)岁；孕周37～40周，平均(38.68±1.62)周。对照组年龄20～34岁，平均(28.93±2.89)岁；孕周37～40周，平均(38.70±1.08)周。四组孕妇一般资料比较差异无统计学意义(均P<0.05)，具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集及处理：①血清标本采集：各组孕妇于分娩前抽取清晨空腹静脉血5 ml，送至检测科，室温下静置30 min后，以3000 r/min的速度离心20 min，收集上层血清置入无菌EP管中，-70 ℃冷存备用。②胎盘组织标本采集：各组孕妇于分娩后20 min内，于胎盘母面中央无明显出血、梗死、钙化处，取1 cm×1 cm×1 cm的新鲜组织，经0.9%氯化钠溶液清洗后置于10%中性甲醛液中固定24 h，经脱水及浸蜡处理包埋，待测。

1.2.2 检测方法：①血清中VEGF、AGEs、TGF-β1水平检测采用免疫吸附法：试剂盒购自美国R&D公司，经上海劲马试验设备有限公司分装。检测前20 min取出血清标本，室温下平衡后进行标准品稀释；将样本注入酶标板孔底部，封膜孵育1 h；酶标板取出后加入洗涤液，操作洗板5次；再次加入酶标试剂孵育30 min后洗板；每孔加入显色剂混合后，避光静置显色；根据标准品浓度和对应光密度，计算样本浓度。②胎盘组织中VEGF、AGEs、TGF-β1阳性表达检测采用免疫组化法：研究前进行石蜡切片烤片1 h，依次经二甲苯、酒精、蒸馏水、PBS液脱蜡；切片放入高温柠檬酸钠缓冲液中5 min，冷却后PBS液冲洗，进行组织抗原修复；滴加鼠抗人BMPR2一抗和生物素标记二抗，PBS冲洗3次；DAB显色，显微镜下观察组织形态变化；苏木素复染、二甲苯透明、中性树胶封片；免疫组化结果判定：显微镜下滋养细胞染色呈棕黄色颗粒为阳性。

2 结 果

2.1 各组孕妇血清中VEGF、AGEs、TGF-β1表达水平比较 HDP组、轻度PE组、重度PE组孕妇血清VEGF水平低于对照组；血清AGEs、TGF-β1水平则高于对照组，差异有统计学意义(均P<0.05)。重度PE组VEGF水平低于HDP组和轻度PE组，重度PE组AGEs、TGF-β1水平高于HDP组和轻度PE组，轻度PE组TGF-β1水平高于HDP组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表1。

表1 各组孕妇血清中VEGF、AGEs、TGF-β1表达水平比较

2.2 各组孕妇胎盘组织中VEGF、AGEs、TGF-β1阳性表达率比较 HDP组、轻度PE组、重度PE组孕妇胎盘组织中VEGF阳性表达率均低于对照组，而AGEs、TGF-β1阳性表达率均高于对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。重度PE组AGEs阳性表达率高于HDP组和轻度PE组；重度PE组TGF-β1阳性表达率高于轻度PE组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。在显微镜下，对照组孕妇VEGF和重度PE组孕妇AGEs、TGF-β1呈强阳性表达，表现为胎盘绒毛滋养细胞的细胞质含大量棕褐色颗粒，VEGF的阳性表达随病情加重而减少，AGEs、TGF-β1的阳性表达随病情加重而减多。见表2(图1)。

表2 各组孕妇胎盘组织中VEGF、AGEs、TGF-β1阳性表达率比较[例(%)]

A1～4：对照组、HDP组、轻度PE组、重度PE组胎盘组织VEGF的表达；B1～4：对照组、HDP组、轻度PE组、重度PE组胎盘组织AGEs的表达；C1～4：对照组、HDP组、轻度PE组、重度PE组胎盘组织TGF-β1的表达

2.3 血清VEGF、AGEs、TGF-β1水平与疾病严重程度相关性分析 血清VEGF与妊娠期高血压疾病严重程度呈负相关(r=-0.257，P=0.014)，AGEs、TGF-β1则与疾病严重程度呈正相关(r=0.269，P=0.009；r=0.301，P=0.002)，差异均有统计学意义(均P<0.05)。

3 讨 论

近年来，相关研究指出HDP发病为母体和胎盘两种因素的并存所导致，母体因素主要以患者有无高血压家族史，或自身伴有慢性疾病引起机体炎症反应等相关；而胎盘因素则主要指胎盘生长发育过程中受到多种因素的影响导致其发育异常，从而发生HDP[7-8]。另有研究指出，HDP进展为PE主要经历两个阶段，一是子宫滋养细胞的重铸功能受损，导致胎盘供血不足，进而激发其释放更多胎盘因子；二是随着代谢循环，胎盘机制会影响并激发母体炎性反应，导致血管内皮受损，从而引发母体出现PE的临床症状[9]。故而普遍认为本病与免疫因素、遗传因素、基因多态性、炎症刺激、血管内皮细胞损伤等相关，其中，多数学者认为血管内皮损伤是HDP发病的中心环节[10-11]。

VEGF是目前最强的促血管生长细胞因子，正常妊娠早期，VEGF在胎盘滋养细胞和血管内皮细胞中呈高表达状态，到了妊娠晚期，VEGF则以调节内皮细胞功能，参与血管的生长、修复与维持，为胎盘的营养及代谢提供保障[12-13]。在本研究中，HDP组、轻度PE组、重度PE组孕妇血清及胎盘组织中VEGF水平显著低于对照组，该结果与李晓琼等[14]研究相似。因此推断，在妊娠晚期VEGF的低水平表达，可能影响了胎盘血管的生成及正常发育，胎盘无法获得母体丰富的供血与灌注，进而出现缺血缺氧及局部炎症等系列反应，而由于胎盘血管的重构能力下降，无法抵抗炎症，进而导致血管内皮加剧损伤，最终引发HDP[15]。AGEs是糖和蛋白质过量结合的产物，可与其受体RAGE结合可破坏机体各器官组织细胞，导致如糖尿病、肥胖、动脉粥样硬化等疾病的发生[16]。苏敏等[17]研究指出，在机体处于氧化应激状态下，AGEs可在血管内皮细胞及滋养细胞表面与其RAGE受体结合，诱导细胞内氧化应激的加剧，同时通过调控TGF-β1的表达，减少基质金属蛋白酶的生成，使胎盘血管管壁增厚，管腔狭窄，导致组织损伤。在本研究中，HDP组、轻度PE组、重度PE组孕妇血清及胎盘组织中AGEs、TGF-β1水平显著高于对照组。由此可见，血清及胎盘组织中VEGF、AGEs、TGF-β1三者表达失衡，可导致血管平衡被破坏，从而引起HDP一系列病理症状。

在相关性分析中，血清VEGF的表达水平与HDP疾病严重程度呈负相关，AGEs、TGF-β1则与疾病严重程度呈正相关。因此提示：VEGF、AGEs、TGF-β1在HDP疾病进展环节发挥重要作用。苏叶青[18]研究表明，VEGF水平的下降，直接影响绒毛滋养细胞的浸润与分化，影响胎盘血管床的血管形成，子宫螺旋小动脉重铸减少，加重疾病。AGEs和TGF-β1的异常表达，可促发血管内皮细胞氧化应激和炎症损伤反应，同时可造成胎盘螺旋动脉浸润不足，随着胎盘缺血缺氧越重，其病情越严重[19-20]。由此可见，VEGF、AGEs、TGF-β1与血管内皮细胞及滋养细胞的浸润及分化有密切联系，在HDP的发生及进展中起重要作用。在孕中晚期，临床医师可通过监测血清VEGF、AGEs、TGF-β1水平，评估患者病情进展，通过及早的有效干预，有利于控制滋养细胞浸润，促进胎盘血管重塑作用，为保障母婴健康奠定基础。

综上，HDP孕妇血清及胎盘组织中VEGF水平显著低于正常妊娠孕妇，与病情严重程度呈负相关；HDP孕妇血清及胎盘组织中AGEs、TGF-β1水平则显著高于正常妊娠孕妇，与病情严重程度呈正相关。