循环miR-485-5p水平与前列腺癌病人病理参数的关系及其对预后的价值

刘国路 李强 李乾 王苏贵

前列腺癌位列男性恶性肿瘤第6位，死亡因素的第9位，多见于中老年人群[1]。我国2020年前列腺癌发生率在15.6例/10万人，死亡例数超5万人[2]。手术切除仍是目前根治前列腺癌的首选方法，术后高复发率是困扰临床医师的棘手问题。前列腺特异性抗原(prostate specific antigen，PSA)是癌常用的筛查指标之一，但前列腺炎症、药物使用情况等可影响PSA测定结果，其预测肿瘤复发转移的敏感度、特异度有限[3]。微小核糖核酸(microRNA，miR)是一种单链RNA小分子物质，在人体细胞分化、增殖、细胞周期、细胞凋亡、新陈代谢等基因调控过程中具有重要作用，与肿瘤细胞的生长、迁移、浸润关系密切[4]。有研究表明，miR-485-5p参与大肠癌[5]、肝癌[6]等多种癌症的发生、发展，与肿瘤细胞的生长、迁移、浸润关系密切。有研究显示，通过上调miR-485-5p表达水平可抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭[7]。我们对103例前列腺癌病人循环miR-485-5p水平进行检测并探讨其与前列腺癌病人预后的关系。

对象与方法

一、对象

2016年10月～2018年11月我院收治的前列腺癌病人103例，年龄32～75岁，平均年龄(60.47±6.85)岁。本研究为前瞻性研究，经医院伦理委员会审批通过。纳入标准：(1)符合《前列腺癌筛查中国专家共识(2021年版)》中前列腺癌诊断标准[8]；(2)首次行前列腺癌根治性手术；(3)既往未接受任何形式治疗；(4)签署知情同意。排除标准：合并其他部位恶性肿瘤；重要脏器严重功能障碍；伴有免疫缺陷性疾病、血液系统疾病、全身系统性疾病；伴有精神性疾病、认知功能障碍；根治性手术前发现远处转移者、转移性前列腺癌；既往有药物滥用史、吸毒史及前列腺癌放化疗、手术治疗史；伴有代谢性脑病、颅内器质性病变、严重心脑血管疾病。剔除标准：(1)手术过程中死亡；(2)自行终止治疗；(3)依从性差；(4)自然失访。

二、方法

1.手术治疗：参照《中国前列腺癌外科治疗专家共识》进行根治性前列腺癌手术[9]，完整切除前列腺、双侧精囊及足够的外周组织，获得满意阴性切缘，去除癌灶并保留尿控功能(尽可能保留勃起功能)，若切缘阳性则根据个体情况行内分泌治疗及放化疗。

2.前列腺癌肿瘤直接的测定：病人取左侧卧位，臀部朝向检查者，经直肠超声观察腺体形态，腺体内肿瘤大小，以最大肿瘤直径记录多灶性前列腺癌大小。

3.外周血循环miR-485-5p相对表达量测定：术前抽取空腹静脉血液3 ml，离心，收集血清，提取总RNA，采用mirPremie micro RNA Isolation Kit试剂盒分离RNA，逆转录成cDNA，进行实时荧光定量PCR测定。内参选用GAPDH，以CT值为基础，2-△△CT法计算外周血循环miR-485-5p相对表达量。引物序列见表1。

表1 PCR引物序列表

4.随访：所有病人术后以门诊复查、电话等方式随访3年，术后第1年，每2个月复查1次；自第2年起，每6个月复查1次，行MRI等影像学检查及PSA测定。统计随访期间复发转移状况，出现复发转移者则终止随访。

三、统计学方法

结果

1.不同病理参数前列腺癌病人血清miR-485-5p相对表达量比较见表2。不同年龄、PSA、肿瘤直径分组病人的miR-485-5p相对表达量比较，差异无统计学意义(P>0.05)；Gleason评分>7分、有微血管侵犯、有淋巴结转移、Ⅲ期病人的miR-485-5p相对表达量分别低于Gleason评分≤7分、无微血管侵犯、无淋巴结转移、Ⅰ-Ⅱ期病人，差异有统计学意义(P<0.05)。

表2 不同病理参数前列腺癌病人血清miR-485-5p相对表达量比较

2.影响前列腺癌病人术后复发转移的因素:截止随访结束，103例前列腺癌病人共有10例失访。剩余93例前列腺癌病人中35例(37.63%)出现复发转移，58例(62.37%)未出现复发转移。Cox回归分析显示,Gleason评分、分期、miR-485-5p相对表达量是影响前列腺癌病人术后复发转移的独立因素(P<0.05)，见表3。

表3 影响前列腺癌病人术后复发转移的单因素与多因素分析

3.血清miR-485-5p水平预测前列腺癌病人术后复发转移的价值:ROC曲线结果显示，血清miR-485-5p水平预测前列腺癌病人术后复发转移的最佳截断点为1.02，灵敏度为74.29%，特异度为75.86%，AUC为0.795。见图1。

图1 血清miR-485-5p相对表达量预测前列腺癌病人术后复发转移的ROC曲线

4.不同血清miR-485-5p水平的前列腺癌病人生存情况:以术前血清miR-485-5p相对表达量预测前列腺癌病人术后复发转移的最佳截断点(1.02)为分界线，将miR-485-5p相对表达量>1.02记为miR-485-5p高表达，miR-485-5p相对表达量≤1.02记为miR-485-5p低表达。41例miR-485-5p低表达病人无病生存21例，52例miR-485-5p高表达病人无病生存37例；miR-485-5p高表达病人的无病生存曲线优于miR-485-5p低表达病人，差异有统计学意义(P<0.05)。见图2。

图2 不同血清miR-485-5p相对表达量的前列腺癌病人的Kaplan-Meier无病生存曲线

讨论

目前，临床针对前列腺癌主要采用手术、放化疗及内分泌治疗的综合治疗措施，但仍存在较高的复发转移风险。miR是一类非编码单链RNA，在细胞内稳定存在，可通过完全和不完全碱基配对与靶基因结合，转录后可调节多个基因的表达使靶基因降解或抑制靶基因翻译发挥调控功能，参与上皮细胞、内皮细胞、巨噬细胞的生理、病理过程，在前列腺癌等多种恶性肿瘤的发生、发展中具有重要调控作用[10]。miR-485-5p是抑癌基因之一，有研究证实，上调miR-485-5p表达可抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭[7]。

本研究发现，Gleason评分>7分、有微血管侵犯、有淋巴结转移、Ⅲ期病人的miR-485-5p相对表达量分别低于Gleason评分≤7分、无微血管侵犯、无淋巴结转移、Ⅰ-Ⅱ期病人，提示miR-485-5p相对表达量与前列腺癌病人病情关联的病理参数有关，可能与以下机制有关：(1)miR-485-5p相对表达量降低可增强细胞外基质金属蛋白酶活性，促进细胞外基质降解，增强癌细胞侵袭、迁移风险；(2)miR-485-5p相对表达量降低可负性调控肿瘤有关蛋白，提高周期蛋白依赖性激酶1、细胞周期素B1活性，进而缩短细胞周期，促进癌细胞增殖、分化。miR-485-5p在多种恶性肿瘤中起到抑癌基因作用，可与对应靶点相互作用形成双闭环负反馈系统，Wang 等[11]研究显示，miR-485-5p可使顺铂耐药细胞中的部分耐药基因失活，抑制抗癌药物转移至细胞外，进而提升癌细胞对抗癌药物的敏感性。郑瑞等[12]研究指出，胃癌病人存在miR-485-5p低表达现象，miR-485-5p可通过调控Wnt/β-catenin通路抑制胃癌细胞的增殖、转移。

miR-485-5p可通过抑制线粒体呼吸及癌细胞膜表面信号传递，以降低癌细胞的转移、进展风险[13]；miR-485-5p也可通过阻断上皮间质转化来抑制癌细胞转移[14]。本研究Cox回归分析显示Gleason评分、分期、miR-485-5p相对表达量是影响前列腺癌病人术后复发转移的独立因素，提示miR-485-5p相对表达量是影响前列腺癌病人预后的因素。miR-485-5p高表达病人的无病生存曲线优于miR-485-5p低表达病人，提示miR-485-5p相对表达量与前列腺癌病人预后有关，miR-485-5p低表达病人术后复发转移风险更高。

miR-485-5p表达情况与前列腺癌病人病理参数及预后有关，miR-485-5p低表达病人预后不良风险高。受时间、精力、经济等多方面限制，本研究仍存在不足之处，为单中心研究，样本量较小，随访时间短，miR-485-5p在前列腺癌中的分子机制也值得进一步的探讨，后期将针对不足之处进一步完善研究。