气相色谱-质谱联用测定苹果中五氯硝基苯残留量

2022-08-09史真真郭凯锐汪小芳

食品安全导刊 2022年20期

史真真，郭凯锐，汪小芳

（1.众平检测有限公司，河南许昌 461100；2.河南森邦环境检测技术有限公司，河南许昌 461100）

五氯硝基苯是一种典型的有机氯类杀菌剂，至今在农业生产中仍起着重要作用。但随着科学技术的发展，以及人们对五氯硝基苯弊端认识的加深与替代产品的出现，其使用安全性问题已经在世界各国引起了广泛关注。欧盟和美国均已出台了禁用或限制使用范围的措施，我国则主要针对五氯硝基苯在不同样品中检出的分析方法进行研究[1]。我国是苹果种植和消费大国，苹果产业是农村经济的支柱产业，然而，随着苹果种植面积的增加和种植方式的改变，为应对逐渐加重的病虫害，超剂量施用高毒、高残留农药屡见报道，过度施用农药会导致药害的发生，造成苹果叶片、果实的药斑病害，严重影响苹果品质，果皮表面农药残留过高，食用后对人们的健康产生较大的危害[2-4]。因此，为保障农产品质量安全，加强对五氯硝基苯及其代谢产物的检测，建立准确、高效、低成本的检测方法十分必要。

常见的五氯硝基苯农药残留的分析方法有液相色谱（Liquid Chromatograph，LC）[5]、气相色谱（Gas Chromatography，GC）[6]、气相色谱-质谱联用（Gas Chromatography-Mass Spectrometry，GC-MS）[7-9]、液相色谱- 质谱联用（Liquid Chromatograph-Mass Spectrometer，LC-MS）等[10]，一般情况下，单一色谱类虽然定量准确，但是易出现假阳性，在定性方面难以实现准确筛查，而仪器联用技术则应运而生，即将具有高分离性能的色谱技术和高灵敏度的质谱的联用技术相结合起来，建立气相色谱-质谱联用法测定苹果中五氯硝基苯的方法，并进行评定分析，得到了满意的结果。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

GCMS-QP2020气相色谱质谱联用仪，日本岛津；固相萃取仪、水浴氮吹仪、旋转蒸发仪，上海力辰；涡旋混匀器，其林贝尔；AUW220D 十万分之一电子天平，日本岛津；可调高速匀浆机，常州国华；高速冷冻离心机，上海力申。

乙腈：色谱纯；氯化钠：优级纯；无水硫酸钠：分析纯，用前在650 ℃下灼烧4 h，贮于干燥器中，冷却后备用；甲苯：优级纯；正己烷：色谱纯；丙酮：色谱纯；ProElut C18SPE 柱（12 mL，2.0 g）、ProElut CARB/NH2双层柱（6 mL，0.5 g/0.5 g），迪马科技；100 μg/mL 五氯硝基苯标准溶液（证书编号BW900748-100-A）；100 μg/mL 环氧七氯标准溶液（证书编号BW900786-100-A），坛墨质检标准物质中心。

1.2 实验方法

1.2.1 气相色谱-质谱条件

色谱柱：SH-Rxi-5Sli MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；色谱柱升温程序：40 ℃（1 min）→130 ℃（30 ℃/min）→250 ℃（5 ℃/min）→300 ℃（10 ℃/min，保持5 min）；载气：氦气，纯度≥99.999%；流速：1.00 mL/min；进样口温度：220 ℃；进样量：1 μL；进样方式：不分流进样；电子轰击源（EI）：70 eV；离子源温度：230 ℃；GC-MS 接口温度：230 ℃；柱前压：49.7 kPa；扫描模式：选择离子检测方式（SIM）；定量方法：峰面积内标法定量，质谱特征离子（m/z）：五氯硝基苯--定量295，定性237、249；环氧七氯--定量353，定性355、351。

1.2.2 标准溶液的配制

准确移取100 μg/mL 环氧七氯标准溶液0.7 mL，用丙酮定容至2.0 mL，配制成环氧七氯内标溶液；准确移取100 μg/mL 的五氯硝基苯标准溶液0.5 mL，用丙酮定容至5 mL，配制成10 μg/mL 五氯硝基苯标准储备液。用样品空白基质提取液配制成浓度为0.125 μg/mL、0.250 μg/mL、0.500 μg/mL、1.000 μg/mL、2.000 μg/mL 和4.000 μg/mL 的标准工作系列溶液，分别加入40 μL 环氧七氯内标溶液，混匀，现用现配。

1.2.3 样品前处理

取苹果全果（去柄）约1 kg，切碎、用匀浆机匀浆后分成两份，一份检测，另一份留样备用。称取20 g 试样（精确至0.01 g）于80 mL 离心管中，加入40 mL 乙腈，用均质器在15 000 r/min 匀浆提取1 min，加入5 g 氯化钠，再匀浆提取1 min，将离心管放入离心机，在3 000 r/min 离心5 min，取上清液20 mL，将ProElut C18SPE 小柱放入固定架上，加样前先用10 mL 乙腈预洗柱，下接鸡心瓶；移入上述20 mL 提取液，并用15 mL 乙腈洗涤柱，将收集的提取液和洗涤液在40 ℃水浴中旋转浓缩至约1 mL，备用，过ProElut CARB/NH2双层柱。活化：加入2 g 无水硫酸钠，用4 mL 乙腈-甲苯溶液（3+1）预洗小柱。上样：迅速移入上述浓缩液，用鸡心瓶收集；再用6 mL 乙腈-甲苯（3+1）分3 次洗涤样液瓶，确保上样完全。洗脱：安装60 mL 贮液器和适配器，加25 mL 乙腈-甲苯（3+1），收集洗脱液。定容：40 ℃水浴中减压蒸馏至近干，用正己烷定容至1 mL，加入40 μL 环氧七氯内标，混匀后待上机进行定性测定和定量测定。对于试剂空白，除不加试样外，按照上述步骤平行操作。

2 结果与分析

2.1 线性关系

本次试验标准系列浓度为0.125 μg/mL、0.250 μg/mL、0.500 μg/mL、1.000 μg/mL、2.000 μg/mL及4.000 μg/mL，以浓度为横坐标，以目标物与内标物响应值（峰面积）的比值为纵坐标绘制标准曲线，曲线方程为Y=0.344 488 4X-0.006 877 486，相关系数为R2=0.999 9，满足线性要求，标准曲线见图1。

图1 五氯硝基苯线性曲线图

2.2 检出限和定量限

根据信噪比S/N=3 和S/N=10 确定目标物的检出限和定量限，当取样量为20.0 g 时，五氯硝基苯的检出限为0.007 8 mg/kg，定量限为0.025 0 mg/kg。

2.3 回收率与精密度试验

以阴性苹果样品进行添加回收和精密度试验，本次添加水平为LOQ、2LOQ、10LOQ，充分混匀处理后按此方法进行测定，每个水平测定10 次，进行GC-MS 测定，测得五氯硝基苯在添加水平0.025 0 ～0.250 0 mg/kg，其平均回收率在83.5%～94.9%，相对标准偏差在0.71%～2.34%。回收率与精密度试验具体结果见表1。