新城疫活疫苗对控制鸡大肠杆菌病的效果观察

蔡 羲 林 琳 黄梅清 陈秀琴 郑 敏 江 斌＊

（1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所 福州 350013；2.福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心 福州350013）

禽大肠杆菌病（Avian colibacilloisis）指部分或全部由大肠杆菌（E.coli）所引起的局部或全身性感染的疾病。随着集约化养禽业的发展，鸡大肠杆菌病已成为严重威胁养鸡业的传染病之一，造成严重的经济损失。目前，防治该病主要依靠抗生素，但是抗生素滥用的现象越来越严重，不仅会造成养殖成本增高，也会导致细菌产生耐药性，另外药物残留会造成更为严重的食品安全问题。疫苗接种有一定的效果，但由于大肠杆菌血清型众多，各血清型之间没有交叉保护，因此其推广使用范围有限。如何应用无抗的方法控制大肠杆菌病已经成为一项涉及食品安全的实用技术。笔者通过多年临床观察，对于顽固性大肠杆菌，应用新城疫疫苗紧急免疫能取得较好的效果，具体原因尚不清楚。因此，设计本试验，论证新城疫La-sota弱毒苗（Ⅳ系）对控制鸡大肠杆菌病的效果。

1 材料与方法

1.1 大肠杆菌菌株来源 本实验室分离鉴定的FQ11株。

1.2 仪器和试剂 流式细胞仪（BD公司，型号：BD FACSCalibur）；普通台式离心机（上海安亭科学仪器厂，型号：TGL-16G）；淋巴细胞分离液（天津灏洋生物制品科技有限责任公司）；新城疫疫苗La-sota弱毒苗（Ⅳ系）为青岛易邦生物制品厂生产，批号为：20190911。

1.3 试验动物 选取同一批次30日龄的健康蛋鸡50羽，由河北峪口禽业有限公司提供，根据本场免疫程序进行，于7日龄、21日龄进行鸡新城疫-传染性支气管炎二联四价疫苗(活)免疫，随机分为空白组10羽，对照组20羽，试验组20羽，正常饲喂，不添加任何药物。

1.4 攻毒试验 参照周秀红等[1]的方法进行攻毒试验，以平板计数法测定细菌含量，最终调至细菌浓度为1×108CFU/mL。FQ11大肠杆菌混悬液胸肌注射攻毒，0.2 mL/羽。 各组鸡分别隔离饲养，连续观察2周，每天详细记录鸡群发病、死亡情况，并对病死鸡进行剖检，从中分离病原体并进行鉴定，以验证死鸡确系由攻毒所致。

待出现临床症状，试验组每只鸡紧急免疫新城疫La-sota弱毒苗（Ⅳ系）4羽份。分别于免疫后第5 d、10 d、17 d随机采集各组血样8份，每份5 mL，其中每份血液样品取2 mL分离血清，用血凝抑制法（HI）检测ND抗体[2]；每份剩余样品3 mL，加肝素抗凝，用于提取淋巴细胞，按流式细胞仪操作进行T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞数量检测。

1.5 数据统计分析 试验数据采用SPSS 13.0软件进行单因素方差分析，用LSD法进行多重比较，以平均值±标准差表示，以P＜0.05作为差异显著性判断标准。

2 结果与分析

2.1 临床表现和剖检病变 对照组鸡死亡10羽，死亡率高达50%，试验组死亡4羽，死亡率20%；对照组和试验组部分鸡食欲降低，翅下垂，羽毛蓬乱，反应迟钝，行动缓慢，消瘦喜睡，排黄绿色稀粪。剖检病变为气囊炎、心包炎、肝周炎。以患鸡的心血、气囊、肝渗出液接种S-S琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂，于37℃温箱培养24 h后均有典型的大肠杆菌菌落生长。空白对照组，一切正常。

2.2 新城疫抗体水平与大肠杆菌病抗病性相关性分析 由表1可知，紧急免疫后5～17 d，试验组抗体水平逐渐升高，而对照组抗体略有下降，免疫后第17 d，试验组与对照组新城疫抗体水平差异显著（P<0.05），试验组死亡率明显降低，说明新城疫抗体水平较高的鸡，对大肠杆菌病的抗病性较强，呈一定程度正相关。

表1 免疫后鸡群新城疫平均抗体水平变化相关性分析比较

2.3 外周血液中T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞数量的变化 由表2可以看出，对照组、试验组紧急免疫后外周血液T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞数量明显上升，试验组与对照组T淋巴细胞数量差异极显著（P<0.01），B淋巴细胞、NK细胞数量差异显著（P<0.05），说明紧急免疫后体液免疫、细胞免疫、非特异性免疫增强，并且维持在较高的水平。

表2 外周血液T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞数量变化

3 讨 论

从试验结果可以看出，紧急免疫后，随着试验组鸡新城疫抗体水平提高，对大肠杆菌病的抗病性增强，死亡率降低，新城疫抗体水平与大肠杆菌病抗病性呈一定程度正相关。这一结果与Yunis R等[3]的研究报道基本一致，即新城疫抗体水平较高的个体，其大肠杆菌病抗病性也较高，二者存在很强的正相关。

试验结果表明，紧急免疫后，试验组鸡的死亡率得到有效控制，未免疫的对照组死亡率达到50%。外周血液检测结果显示，紧急免疫后，T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞数量明显上升，并维持在较高的水平。有试验表明[4-7]，应激反应可增强固有免疫、获得性体液免疫和细胞免疫，其决定因素是抗原、病原或受伤导致的应激反应建立的生理条件，这些条件包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞的转运和激活。新城疫弱毒疫苗有Ⅰ系、Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系等多种，Ⅰ系疫苗具中等毒力，对产蛋鸡、雏鸡等都有致病性，应谨慎使用；Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系属于弱毒苗，广泛应用于青年鸡群免疫，但Ⅳ系疫苗的毒力比其它两系要强，免疫后对鸡群提升免疫力效果不错[8]。因此，可以通过紧急免疫新城疫La-sota弱毒苗（Ⅳ系），快速提高鸡群免疫力，提高对大肠杆菌病的抗病性。