阴道微生态状况与持续性高危型人乳头瘤病毒感染及转归相关性研究

黄金印 刘 巍 李秋萍 钟嘉玲 刘正娴 温庆辉 赵伟华 罗衬银*

（1 东莞市谢岗医院检验科，广东 东莞 523590；2 东莞市谢岗医院妇产科，广东 东莞 523590；3 东莞市人民医院检验科，广东 东莞 523059）

人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）具有普遍感染性，高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）属于临床上常见感染病毒之一，会对女性生殖系统产生极大的威胁，如不予以及时有效的治疗，随着感染周期的延长，甚至可能引发生殖系统肿瘤，严重威胁女性的生殖功能以及生命健康安全[1-2]。相关研究报道显示，高危型人乳头瘤病毒的持续感染是导致宫颈上皮内瘤变及宫颈癌发生及发展的主要致病因素，高危型HPV持续感染会对女性阴道微生态状况造成影响，并促使患者机体内的感染情况加剧[3-5]。迄今为止，关于高危型HPV持续感染的具体机制尚不明确，且关于高危型HPV和女性阴道微生态状况之间的关系尚未有统一的结论，阴道微生态异常是否会引起高危型HPV感染情况的持续恶化，改善阴道微生态状况是否有利于HPV感染转归有待进一步研究证实。鉴于此，本文通过研究阴道微生态状况与持续性高危型HPV感染及转归的相关性，以期为临床持续性高危型HPV感染的防治提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年1月至2021年1月于东莞人民医院及东莞市人民医院谢岗院区（东莞市谢岗医院）妇科门诊就诊且自愿接受HPV筛查及阴道微生态检测的育龄期女性作为研究对象。将其按照高危型HPV感染状态的差异分成高危型HPV持续感染组200例、一过性感染组100例以及正常对照组100例，检测其阴道微生态状况并进行对比。以多因素Logistic回归分析明确高危型HPV持续性感染的相关影响因素。此外，以随机数字表法将持续感染组患者分为观察组和对照组，每组各100例。本次研究经过本院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 纳入与排除标准 本研究纳入标准：①所有受试者均为育龄期女性，性生活规律。②TCT检查未出现上皮内病变和恶性病变。③入组前7 d内未接受过阴道药物治疗和阴道冲洗。④入组前3 d内无性生活。本研究排除标准：①入组前7 d内接受过抗生素类药物治疗。②妊娠期或哺乳期女性。③TCT检查出现上皮内病变和恶性病变。④意识障碍或合并精神疾病者。⑤正参与其他研究者。⑥研究期间因故退出或失访者。

1.2.2 研究方法与观察指标

1.2.2.1 高危型HPV检测 采用通用引物多重PCR扩增，扩增产物通过多功能流式荧光杂交分型检测仪进行检测，同时检测27种型别，包括高危型HPV17种（16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、82），低危型HPV10种（6、11、40、42、43、44、55、61、81、83）亚型。

1.2.2.2 阴道微生态检测 包括形态学检测（菌群密集度、菌群多样性、优势菌等）以及功能学检测（阴道pH值、过氧化氢酶、唾液酸苷酶以及白细胞脂酶等）。

1.2.2.3 治疗及疗效评估 对照组不予任何处理，随访观察。观察组患者将乳酸菌阴道胶囊（西安正浩生物制药有限公司，国药准字号：H10980293）放置到阴道内，1粒/次，1次/d，连续使用7次为1个疗程，月经期停用，共治疗4个疗程。用药期间禁止冲洗阴道、盆浴、坐浴及性生活，月经期停用，后分别于3个月、6个月后返院检测HPV和阴道微生态，评估疗效。

1.2.3 判断标准 HPV感染判断标准：①任何一种HPV亚型阳性即为HPV阳性，提示HPV感染。②受检者分别于检测当日以及第6个月、第12个月检测1次HPV，将≥2次检测到相同亚型的高危型HPV记为持续感染组；同一受试者3次检测仅出现1次阳性记作一过性感染组。阴道微生态正常判断标准[6]：①菌群密集度为Ⅱ～Ⅲ级。②菌群多样性为Ⅱ～Ⅲ级。③乳酸杆菌为优势菌。④pH≤4.5。⑤乳酸杆菌功能无异常。⑥过氧化氢酶、唾液酸苷酶以及白细胞脂酶阴性。上述任意一项异常记作阴道微生态失衡（异常）。HPV疗效评估：对患者的HPV-DNA情况测定，分为转阴、有效以及无效。如果高危型HPV的表达全部为阴性则为转阴；有效为少数阳性高危HPV亚型转为阴性，≥1种HPV亚型判定为阳性；全部为阳性则为无效，治疗总有效例数为转阴例数和有效例数之和。

1.3 统计学处理方法 采用SPSS20.0软件进行数据分析。对于计数资料，使用频数（%）的形式进行描述，使用卡方分析法（包括连续性校正法和Fisher确切概率法）对计数资料进行分析。利用Logistic回归分析计算OR值及95%CI，描述相关危险因素与HPV感染发生的风险，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 3组基线资料对比 持续感染组无避孕措施人数占比高于一过性感染组及正常对照组（均P＜0.05），3组年龄、BMI、首次性生活年龄、性生活频率、人工流产以及文化程度对比均不明显（均P＞0.05），见表1。

表1 3组基线资料对比

2.2 3组阴道微生态状况 持续感染组阴道微生态异常、菌群密集度异常、菌群多样性异常、阴道分泌物pH＞4.5、过氧化氢酶异常、唾液酸苷酶异常以及白细胞脂酶异常发生率均高于一过性感染组以及正常对照组（均P＜0.05）。见表2。

表2 3组阴道微生态状况对比[n（%）]

2.3 高危型HPV持续性感染影响因素的多因素Logistic回归分析 以高危型HPV持续性感染与否为因变量，赋值如下：持续感染=1，无持续感染=0；以避孕措施以及阴道微生态状况为自变量，赋值如下：有避孕措施=0，无避孕措施=1；阴道微生态、菌群密集度、菌群多样性、过氧化氢酶、唾液酸苷酶以及白细胞脂酶正常均赋值为0，异常均赋值为1；阴道分泌物pH≤4.5=0，阴道分泌物pH＞4.5=1。经多因素Logistic回归分析发现，阴道微生态异常、菌群密集度异常、菌群多样性异常、阴道分泌物pH＞4.5以及无避孕措施均是高危型HPV持续性感染的危险因素（均OR＞1，P＜0.05）。见表3。

表3 高危型HPV持续性感染影响因素的多因素Logistic回归分析

2.4 观察组及对照组HPV转阴总有效率以及阴道微生态恢复情况对比 观察组干预后3个月、6个月的HPV转阴总有效率及阴道微生态正常人数占比均高于对照组（均P＜0.05）。见表4、表5。

表4 观察组及对照组有效率对比[n（%）]

表5 观察组及对照组阴道微生态改善对比[n（%）]

3 讨论

大部分女性生殖道感染HPV后可自行清除，但仍有30%左右的女性在感染HPV后无法自行清除，且长期处于感染状态下进展成为尖锐湿疣或宫颈癌[7-8]。相关研究报道证实，高危型HPV的持续性感染是宫颈癌的独立危险因素之一。由此可见，及时检测HPV对预防其感染具有极其重要的意义[9-10]。女性阴道属于一个动态平衡的微生态系统，在一定程度上受机体内分泌水平、阴道微生物菌群以及局部免疫功能等因素的影响。宫颈直接显露于阴道内，因此极易受到阴道微生态改变的影响，其中阴道微生态失衡会显著增加宫颈高危型HPV感染的风险，继而增加宫颈疾病发病概率[11-13]。因此，维持阴道微生态的正常可能有利于降低高危型HPV感染风险。

本研究结果显示，持续感染组阴道微生态异常、菌群密集度异常、菌群多样性异常、阴道分泌物pH＞4.5、过氧化氢酶异常、唾液酸苷酶异常以及白细胞脂酶异常发生率均高于一过性感染组以及正常对照组。这与陈锐[14]等人的研究报道一致，持续高危型HPV感染患者存在一定程度的阴道微生态失衡。究其原因，可能是阴道微生态属于女性机体内一个极为灵敏的系统，在遭受内源性以及外源性因素影响时，阴道微生态平衡系统会被打破，继而导致阴道对各类病原微生物的抵御能力降低，最终引起感染。然而，魏东林[15]的研究报道发现，持续高危型HPV感染患者白细胞脂酶、过氧化氢异常率相较于非持续感染组无明显差异。这和本研究结果存在一定的差异，而导致上述差异发生的主要原因可能和两项研究分组方式和样本量及检测方法试剂敏感性不同有关。此外，经多因素Logistic回归分析发现，阴道微生态失衡以及无避孕措施均是高危型HPV持续性感染的危险因素，即随着阴道微生态失衡的发生以及未实施避孕措施，高危型HPV持续性感染概率升高。究其原因，阴道微生态失衡极易导致阴道炎症的发生，进一步促使阴道黏膜屏障的破坏，从而促进了高危型HPV的持续性感染，并引发宫颈炎症，如不予以及时有效的治疗，可能进展为宫颈上皮内瘤变乃至宫颈癌[16]。由此可见，维持女性阴道微生态平衡状态尤为重要，亦是降低高危型HPV感染以及宫颈病变的关键。避孕措施的实施可有效维持阴道的自净功能，从而有效抵御病原微生物的侵袭、感染。乳杆菌为阴道内正常菌群，乳酸菌阴道胶囊是一种的微生态制剂，活乳杆菌为其主要成分，置入阴道后，分解阴道内黏膜分泌的糖原，产生乳酸、乙酸等，使阴道保持酸性环境，进而可抑制致病性细菌的增殖，促进乳杆菌大量增殖，进而竞争性的抑制致病性细菌的增殖，加快阴道菌群恢复，平衡阴道微环境，持续作用下能够改善微生态环境，可刺激机体的免疫系统，重建防御机制。本研究结果显示，在使用微生态制剂阴道乳杆菌胶囊干预的观察组干预后3个月、6个月的总有效率及阴道微生态正常人数占比均高于未干预对照组。这一结果反映了阴道微生态制剂干预的实施，一定程度上提高了治疗效果，可有效促进持续高危型HPV感染患者转阴，也再次证实了阴道微生态在高危型HPV持续感染患者中发挥着至关重要的作用。

综上所述，阴道微生态状况与持续性高危型HPV感染及转归均密切相关，临床工作中可能通过阴道微生态制剂干预等途径改善阴道微生态，进一步达到防治持续性高危型HPV感染的目的。