消积颗粒治疗大鼠盆腔炎性疾病后遗症的实验研究※

谈忠毅 谈瑄忠▲ 许慧琴

盆腔炎性疾病（pelvic inflammatory disease，PID）是指女性上生殖道及其周围组织感染造成的一组疾病，包括盆腔腹膜炎、输卵管炎、子宫内膜炎和输卵管卵巢脓肿等，若得不到及时治疗，可能造成异位妊娠、慢性盆腔痛、不孕以及炎症反复发作等后遗症的发生，即盆腔炎性疾病后遗症（Sequelae of Pelvic Inflammatory Disease，SPID）。SPID多发于育龄妇女，其可出现组织被广泛的破坏和粘连、组织增生及瘢痕形成等病理改变，严重影响患者的身心健康[1]。中医治疗SPID具有明显的优势，消积颗粒是南京中医药大学附属南京中医院的院内制剂，是高淑华主任医师的经验方[2]。本方由赤芍、红花、香附、蒲公英、生薏苡仁、昆布等药味组成，临床上可明显改善SPID患者的症状。本实验旨在研究消积颗粒对SPID 模型大鼠的影响，探究其治疗机制，为SPID 的临床治疗及新药开发提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 药物 消积颗粒（由南京中医药大学附属南京中医院制剂部提供，批号：20160311）。

1.1.2 试剂 苯酚（成都市科龙公司，批号：20130515）；黄耆树胶（国药集团，批号：W20111220）；大鼠白细胞介素-6（IL-6）试剂盒（上海酶联生物有限公司，批号：201606）；大鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）试剂盒（上海酶联生物有限公司，批号：201606）；大鼠血栓素B2（TXB2）（上海酶联生物有限公司，批号：201606）；大鼠前列腺素1α（PGF1α）（上海酶联生物有限公司，批号：201606）。25%苯酚胶浆配制：取西黄芪胶1 g置干燥坩埚内，加4 mL甘油研磨均匀，再加液化苯酚5 mL，继续研磨至均匀状态，最后加蒸馏水11 mL研磨至浓稠均匀无颗粒。

1.1.3 动物 SPF 级未孕成年SD 雌性大鼠，体重200～220 g，由浙江省实验动物中心提供，实验动物使用许可证号：SYXK（苏）2014-0001。

1.1.4 仪器 TD 6001电子天平（天津市天马公司）；FA2104 电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；CKX-31 生物显微镜（日本奥林巴斯）；Synergy HT 多功能酶标仪（美国Bio TeK）；LDZ5-2 离心机（北京医用离心机厂）。

1.2 实验方法[3-4]

1.2.1 造模 取雌性大鼠50只，随机选取40只大鼠采用腹腔麻醉（10%水合氯醛溶液4 mL/kg），常规消毒后，下腹正中切口约2 cm，暴露子宫，在右侧子宫中段处以4号针头小心进针，向卵巢方向缓慢注入苯酚胶浆0.04 mL/只，再逐层缝合切口，进行正常饲养。保留10只不造模作为空白对照。

1.2.2 分组及给药 造模7 d 后，将40 只大鼠按体重分层随机分为4 组，每组10 只，分别为模型组及消积颗粒低、中、高剂量组。消积颗粒低、中、高剂量组的给药剂量分别为2.6 g/kg、5.2 g/kg、10.4 g/kg；空白对照组、模型组则给予生理盐水。各组按上述剂量灌胃给药（10 mL/kg），每日1次，连续28 d。

1.3 观察指标

1.3.1 体征观察及体重 每天观察大鼠的毛发、精神、行为等体征状况；分别在给药前、给药后第1、2、3、4 w测定大鼠体重。

1.3.2 血液生化指标 末次给药后次日大鼠眼眶取血5 mL，待静置1 h 后，离心10 min（3000 rpm），取血清，保存温度为-20 ℃，后期用于测定血清TXB2、IL-6、TNF-α、PGF1α等指标。

1.3.3 脏器系数 脱颈椎处死大鼠，取出子宫、卵巢，称重并计算其系数。

1.3.4 病理组织学检查 取材后，将右侧子宫用10%甲醛溶液固定后，脱水，石蜡包埋。切片经HE染色，用光学显微镜进行观察。病理观察指标为:（1）子宫内膜上皮细胞变性坏死状况；（2）子宫壁慢性炎细胞浸润状况；（3）子宫腔扩张、粘连或闭塞状况；（4）子腔壁结构改变状况；（5）子宫内膜充血水肿状况[5]。第1、3项指标积分标准为：0分为无病变；1分为范围<1/3的轻度病变；2 分为范围在1/3～2/3 间的中度病变；3分为范围在2/3以上的重度病变。第2、4、5项指标根据病变严重程度计分：无明显病变为0 分；轻度病变为1分，中度病变为2分，重度病变为3分[5]。

1.4 统计方法采用SPSS 16.0 统计软件包，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用t检验。

2 结果

2.1 对体征及体重的影响模型组大鼠出现行为迟缓、精神萎靡、毛发蓬松等现象，且体重明显减轻，与空白对照组比较具有统计学差异（P<0.05或P<0.01）；而消积颗粒低、中、高剂量组大鼠体征明显改善，体重在给药第2 w后明显增加，与模型组比较具有统计学差异（P<0.01）。见表1。

表1 各组大鼠体重的变化情况（）

表1 各组大鼠体重的变化情况（）

注：与空白对照组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，**P<0.01

2.2 各组大鼠IL-6、TNF-α水平比较模型组血清IL-6、TNF-α较空白对照组显著升高，而消积颗粒低、中、高剂量组IL-6、TNF-α均较模型组显著降低，差异具有统计学意义（P<0.01）。见表2。

表2 各组大鼠血清IL-6、TNF-α水平比较（）

表2 各组大鼠血清IL-6、TNF-α水平比较（）

注：与空白对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，**P<0.01

2.3 各组大鼠TXB2、PGF1α水平及其比值比较与空白对照组比较，模型组血清中的TXB2升高，PGF1α降低，TXB2/PGF1α比值提高，两组差异具有统计学意义（P<0.01）；而消积颗粒低、中、高剂量组均能降低TXB2，升高PGF1α，使其TXB2/PGF1α比值降低，与模型组比较差异具有统计学意义（P<0.01）。见表3。

表3 各组大鼠血清TXB2、PGF1α水平及其比值比较（）

表3 各组大鼠血清TXB2、PGF1α水平及其比值比较（）

注：与空白对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

2.4 各组大鼠卵巢、子宫脏器系数比较各组大鼠卵巢系数未见明显差异；模型组子宫系数显著升高，与空白对照组比较具有统计学差异（P<0.01）；而消积颗粒中、高剂量组均能降低子宫系数，与模型组比较差异显著（P<0.05或P<0.01）。见表4。

表4 各组大鼠卵巢及子宫系数比较（）

表4 各组大鼠卵巢及子宫系数比较（）

注：与空白对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

2.5 病理组织学检查模型组大鼠的病理表现为子宫内膜上皮细胞变性、坏死，宫壁结构改变，子宫腔粘连缩小、扩张或偏位，与空白对照组比较有统计学差异（P<0.01）。在使用消积颗粒后，子宫内膜上皮细胞变性、坏死及宫壁结构改变程度减轻，其中，中、高剂量组与模型组比较差异显著（P<0.05）。见表5、图1。

图1 各组大鼠子宫病理学检查结果

表5 各组大鼠子宫病理学评分结果（）

表5 各组大鼠子宫病理学评分结果（）

注：与空白对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05

3 讨论

盆腔炎性疾病是妇科临床发病率较高的疾病，易反复发作，临床症状有下腹疼痛坠胀、腰痛、月经不调等，甚者可导致异位妊娠、输卵管阻塞和不孕［6］。该病可归属于中医学“妇人腹痛”“热入血室”“癥瘕”“不孕”等范畴[2]。中医临床实践认为，盆腔炎性疾病后遗症主要呈现“湿、热、瘀”的病理状态，究其病机特点，主要为湿热余毒为患。现代研究亦表明，盆腔炎患者的血液呈浓、黏、凝、滞状态，符合中医学“血瘀证”特点。本实验采用较为成熟的苯酚胶浆致炎法造模，造模7 天后肉眼观察模型组大鼠出现精神萎靡、行为迟缓、毛发蓬松等现象，且体重明显降低；病理主要表现为模型组子宫内膜上皮细胞突变坏死，宫壁结构改变，子宫腔粘连缩小、扩张或偏位[7]。消积颗粒能够改善SPID 大鼠的体征和体重，使子宫内膜上皮细胞突变坏死、宫壁结构改变程度减轻。IL-6作为启动炎症反应的关键因子，主要由单核巨噬细胞产生[8]，对盆腔炎早期诊断具有重要意义。TNF-α 是由活化的单核巨噬细胞和其他多种细胞产生，具有广泛的生物活性，参与炎性反应和免疫应答[9]。消积颗粒能够显著降低模型组大鼠血清IL-6、TNF-α含量。由于PID时盆腔组织长期炎症侵蚀可引起增生、局部充血肿胀，产生炎性粘连和阻塞，从而引起子宫微循环的局部障碍，压迫神经纤维，引发腹痛等症状[10]，消积颗粒能够显著降低TXB2/PGF1α比值，改善血瘀相关指标及微循环障碍。本实验研究发现，消积颗粒具有改善体征和体重，降低子宫系数、减轻炎症反应的作用，其作用机理涉及降低炎症因子、减轻血瘀、改善血液循环等多个环节。实验结果表明，消积颗粒具有抗苯酚致大鼠慢性盆腔炎的作用，为临床研究消积颗粒治疗SPID提供了理论依据，也为新药开发奠定了基础。